Identificación de aminoácidos en

extracto de Serratia marcescens

por cromatografía en capa fina.
 • Identificar la naturaleza del colorante de Serratia
marcencens mediante cromatografía en capa fina

Objetivo • Conocer las características morfológicas y

bioquímicas de Serratia marcencens.
general y • Conocer la estructura molecular de los
aminoácidos y las propiedades de las proteínas
específico. • Reconocer el procedimiento analítico para la
ejecución del análisis por cromatografía de capa
fina.
• Emplear el simulador virtual para cromatografía en
capa fina de biomodel.
• Identificar las competencias vistas en los
submódulos de la carrera que sean afines a la
practica.
• Si el colorante de las
colonias de Serratia
marcencens muestra
patrones característicos
en la cromatoplaca
usando como estándar
de referencia
aminoácidos y sabiendo Hipótesis
que estos son los
bloques de construcción
de proteínas, entonces
podemos suponer que
el pigmento es una
proteína.
Procedimiento
Acción
1 Siembra de Serratia marcencens ATCC 274
2 Obtención del pigmento y purificación de la muestra por
cromatografía en columna.
3 Hidrólisis con tripsina o bromuro cianógeno.
4 Identificación de aminoácidos por capa fina
5 Revelado de cromatoplaca
6 Informe de resultados.
Fundamentación teórica
• 3.1.1 Serratia marcencens
• Características morfológicas y bioquímicas
• Importancia clínica y/o económica.
• 3.1.2 Proteínas
• Características bioquímicas y funciones
• Aminoácidos y su clasificación.
• 3.1.3 Prodigiosina
• Estructura molecular
• Características físicas, químicas y toxicológicas.
3.1.4 Cromatografía líquida en columna y capa fina.
• Fundamento teórico y elementos que la componen.
Insertar cita desde Word
 • 3.2 Experimentación.

Preparación de Activación de S.
Tinción Gram. Incubación del caldo LB medio LB (caldo
inoculado con S. marcescens
comprobar y agar)
marcescens 24h, 28ºC ATCC 274
morfología
celular. con agitación

Producción de
Siembra en agar
Incubación 24h, prodigiosina
3 resiembras LB inclinado con
28ºC con agitación bajo el
más. aceite de
a 150rpm. procedimiento
cacahuate al 1%
de Hernández
Velazco
Retirar sobrenadante Centrifugar 25mL de
y repetir el paso suspensión Obtención del
anterior hasta agotar bacteriana a pigmento
todo el cultivo. 4000rpm, 10 min 8 ºC (fotosensible)

Agregar 3mL de Dejar enfriar y volver

cloroformo al botón y a sonicar dos veces
sonicar 1 minuto mas

Recuperar el
pigmento en otro Centrifugar a
tubo y evaporar el 4000rpm, 10 min y
solvente 8ºC
 Empacar
Recuperación Fase móvil columna con
de prodigiosina Cloroformo: gel de sílise y Purificación del
purificada. Metanol (9:1) compactar con pigmento por CC
cloroformo

Hidrólisis con
tripsina del
colorante

Cargar en carriles FM Etanol :

Preparación de
separados el estándar Hidróxido de Identificación de
estándares de
y la muestraen la amonio 34% aminoácidos por
referencia al 1%
cromatoplaca (7:3) capa fina

Fin
Eluir ¾ de la Preparación del Revelado e
placa revelador interpretación
Ninhidrina 2% de resultados
 Cromatografía en columna.
• Utiliza una matriz (fase estacionaria), una muestra y un tampón de
elución (fase móvil) y ejecuta la corrida. Toma captura de pantalla
tras haber concluido la elución y se obtenga el cromatograma.

• Cambia el tampón de elución y vuelve a realizar la corrida, al termino

vuelve a tomar captura de pantalla. En la sección de discusión se
planteará cual de las dos condiciones es la mas adecuada para poder
separar los componentes de la muestra.
CORRIDA CROMATOGRÁFICA 1
CORRIDA CROMATOGRÁFICA 2
CÁLCULOS PARA LA PREPARACIÓN DE
SOLUCIONES.
• CALCULOS PARA PREPARAR LA
• MUESTRA AMARILLA AL 10% V/V,
• ESTANDARES GLY GLICINA y LEU LEUCINA AL 2%.
• NINHIDRINA AL 0.2%.
• 250mL de FASE MÓVIL ETANOL 75% : HIDRÓXIDO DE AMONIO 25% (7:3) PARTIENDO DE
ETANOL AL 96% Y DE HIDROXIDO DE AMONIO AL 34%.
NÚMERO CAS Y PICTOGRAMAS
• Identifica el número CAS de los productos que se emplean en la cromatografía
de capa fina GLICINA, LEUCINA, NINHIDRINA, ETANOL Y HIDRÓXIDO DE AMONIO.
• EJEMPLO para el metanol podemos descargar la hoja de seguridad del mismo y
obtener los datos solicitados
https://www.sigmaaldrich.com/MSDS/MSDS/DisplayMSDSPage.do?country=MX
&language=es&productNumber=322415&brand=SIAL&PageToGoToURL=https%3
A%2F%2Fwww.sigmaaldrich.com%2Fcatalog%2Fproduct%2Fsial%2F322415%3Fla
ng%3Des
COMPUESTO # CAS PICTOGRAMAS
METANOL 67-56-1
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
• CARGAR LA MUESTRA AMARILLA Y LOS ESTANTARES DE REFERENCIA DE GLICINA Y
LEUCINA EN LA CROMATOPLACA. Toma captura de pantalla.

• TRAS EL PROCESO DE ELUCIÓN Y AGREGAR EL REVELADOR . Toma captura de pantalla

Reactivos
Carga de muestras y estándares.
Proceso de elución.
Detener la corrida al llegar el frente del
solvente a ¾ de la cromatoplaca.
Secar y rociar el revelador.
Análisis de resultados
Conclusión
Fuentes de
consulta.
Separación de aminoácidos empleando
cromatografía en capa fina.
Experimento virtual.
Separación de aminoácidos por cromatografía en capa
fina y detección mediante reacción con ninhidrina
Cromatografía en columna
Tesis prodigiosina
http://biomodel.uah.es/lab/cromat/TLC-aa.htm
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/
11%20CROMATOGRAFOA%20DE%20CAPA%20FINA%2
0DE%20AAs.pdf
http://biomodel.uah.es/lab/cromat/columna.htm?es
http://eprints.uanl.mx/15876/1/1080291077.pdf
PRODIGIOSINA