Análisis Químico e Instrumental

Carrera de Química y Farmacia

Sede Temuco

DETERMINACIÓN DE PARACETAMOL Y CAFEÍNA EN COMPRIMIDOS

MEDIANTE HPLC

Una de las grandes aplicaciones de la cromatografía líquida de alta resolución HPLC

en ciencias farmacéuticas es el análisis de medicamentos en control de calidad. Para ello se
verifica que las formas farmacéuticas contengan lo especificado por el fabricante.
En el siguiente laboratorio se hará uso de la HPLC con detector de fila de diodos para
la cuantificación de paracetamol y cafeína en un comprimido.

Preparación de la muestra

• Tome un comprimido comercial que contenga ambos principios activos y péselo en

balanza analítica con precisión 0,1 mg (4 decimales)
• Pulverice el comprimido con ayuda de un mortero hasta que quede finamente dividido
• Pese alrededor de 10 mg del polvo resultante y disuélvalos en aproximadamente 50
mL de agua en un vaso de precipitados y cúbralo con un parafilm. Para ayudar la
disolución use un baño de ultrasonidos, por 20 minutos.
• Una vez disuelto obtendrá una suspensión blanquecina, debido a que los excipientes
no son solubles en agua.
• En un matraz de 250 mL ponga un embudo con su respectivo papel filtro y transfiera
cuantitativamente la masa de comprimido disuelta en agua.
• Enjuague varias veces el vaso con agua destilada y las aguas de lavado páselas a
través del embudo con filtro.
• Lave 2 veces el papel filtro con pequeñas porciones de agua destilada agregadas con
una piseta.
• Finalmente, retire el embudo y afore el matraz de 250,00 mL con agua destilada.
• ESTA SERÁ SU MUESTRA PROBLEMA.
• Una pequeña porción de ella (5 mL) deberá ser filtrada a 0,22 micrómetros para
no dañar la columna.

Instrumentación

• Usará un HPLC Jasco con inyector manual y detector de arreglo de diodos

• La columna a utilizar será una C18 fase reversa con fase móvil metanol agua
• Cada analito se medirá a su respectiva longitud de onda, Cafeína 275 nm aprox y
Paracetamol a 245 nm aproximadamente.

Lectura de las curvas de calibrado

• Las curvas de calibrado de Paracetamol y Cafeína se le entregarán preparadas en una

misma mezcla.
• Las concentraciones serán 20, 40 y 60 mg/L para paracetamol y 10, 20 y 30 mg/mL
para la cafeína.
• Inyecte el primer estándar, gire el inyector y el cromatograma comenzará a registrarse
inmediatamente.
• Repita el procedimiento anterior con todos los estándares y su muestra problema.
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• Paralelamente, procese sus datos.

Determine el área bajo la curva y la altura del pico cromatográfico.
• Si su muestra problema cae fuera de la curva calibrado deberá diluirla.
• Grafique las 2 rectas de calibrado obtenidas.
• Para cada una de ellas obtenga su recta de regresión respectiva.
• Interpole el valor de área y Altura en sus rectas de regresión

PARACETAMOL

Concentración de Tiempo de Área Altura

Paracetamol retención
mg/L
20
40
60
Muestra Problema

Recta de Regresión Paracetamol en Área:

Recta de Regresión de Paracetamol en Altura:

CAFEINA

Concentración de Cafeína Tiempo de Área Altura

mg/L retención
10
20
30
Muestra Problema

Recta de Regresión de Cafeína en Área:

Recta de Regresión de Cafeína en Altura:
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Cálculos

a) Concentración de cafeína y paracetamol en la Muestra Problema (mg/L)

b) Masa de los analitos disueltos en la Muestra Problema (mg)

c) % m/m de los analitos en la muestra.

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d) Contenido de los analitos disueltos en el
comprimido comercial (mg)