TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

TIPOS DE TINCIÓN
CLASES DE COLORANTES
María José Pico Vela
Karla Vizuete
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
La técnica histológica es una serie secuencial de pasos a
través de los cuales una muestra de tejido llega a
transformarse en delgados cortes coloreados capaces de ser
observados al microscopio.

Obtención Fijación Inclusión

Corte Coloración Montaje

 • Es el examen de los órganos luego de la muerte, Autopsia o
necropsia
generalmente con el objetivo de determinar las causas
de la misma.
• Consiste en la extirpación de órganos completos o de Resección
Quirúrgica
grandes partes de los mismos, a través de un
procedimiento quirúrgico.
• Consiste en la extracción de pequeños fragmentos de Biopsia
tejido de un organismo vivo.
medio del microscopio.
Consiste en la provisión del material que se desea estudiar por
N:
OBTENCIÓ
FIJACIÓN:
Producen una rápida
muerte celular, evitando
la autolisis

Algunos de ellos
Preservan la morfología
colorean sustancias de
celular y tisular
los tejidos

Aumentan la
Preservan la
consistencia de los
composición química
tejidos

Inhiben el crecimiento
Penetran a los tejidos
microbiano y por lo
con relativa rapidez
tanto la putrefacción

Facilitan la coloración
posterior
 Fijadores

Mezclas de
Físicos Químicos Simples
Químicas

Alcohol Etílico+
Calor Alcoholes Aldehídos Ácidos Sales
Acido Acético

Acido pícrico +
Bicromato de
Desecación Metanol Formaldehido Ác. Acético
Potasio
Formol + Acido
acético

Bicromato de potasio
Microondas +
Bicloruro de
mercurio +
Acido acético

Formaldehido +
Glutaraldehído
 Resina
• Observaciones en microscopios electrónica Epoxi
• Los bloques resultantes, de gran dureza, son seccionados por la navaja de
diamante o de vidrio del ultramicrótomo
• Observaciones en microscopios ópticos
• Los tejidos fijados se deshidratan en alcoholes pasándolos solventes Parafina
intermediarios como el xileno o el benceno Y son colocados en una estufa
con parafina fundida.
• Luego de impregnar al tejido, se deja solidificar a la parafina con el tejido
incluido, constituyendo los bloques o tacos histológicos.
consistencia adecuada para el corte.
El tejido se impregna en un material que le confiere una
INCLUSIÓN:
 COLORACIÓN:

La coloración
rutinaria trata de
posibilitar el La histoquímica La mayoría de los
estudio utiliza métodos colorantes
morfológico o tendientes a citológicos o
estructural, sin que identificar a un histológicos son de
se pueda obtener determinado tipo de naturaleza
mayor información molécula o sustancia, naturaleza
sobre la naturaleza visualizándola orgánica y
química de las microscópicamente. aromáticos.
estructuras
observadas.

Consiste en colocar sobre el corte histológico ya coloreado

una delgada lámina de vidrio llamada cubreobjetos, el cual
MONTAJE: se adhiere con algún adhesivo transparente conocidos como
medios de montaje.
PREPARACIÓN DE UN FROTIS

Mezclar la
Limpiar y secar Secar el frotis
muestra en la
el portaobjetos al aire
gota de agua

Tomar una
Colocar una
muestra de
gota de agua Fijar la muestra
cultivo
pasándola por
el mechero
Flamear la boca
Desinfectar el
del tubo de
aza
cultivo
TINCIÓN

Las tinciones pueden ser

La tinción es una técnica
usadas para definir y
auxiliar en microscopía
examinar tejidos en bruto,
para mejorar el contraste
poblaciones celulares u
en la imagen vista al
orgánulos dentro de
microscopio.
células individuales.
• Estudia al organismo vivo pero colocado en Método “in
condiciones artificiales. Se realiza en células aisladas y Vitro”
fáciles de separar. Estas células se colocan sobre un
sustrato adecuado que se llama medio de cultivo en el
cual se mantienen con vida mientras dura el estudio.
• Se realiza a organismos o células vivas en su estado Método “in
natural. Se utilizan colorantes llamados colorantes vivo”
vitales, estos no causan daño al organismo o célula
durante un tiempo corto, a largo plazo son tóxicos y
mortales.
TIPOS DE TINCIONES:
 El material Las muestras se
Se deposita
puede diluirse extienden
suavemente un
con igual directamente No se utiliza
cubreobjetos
volumen de sobre la superficie ningún tipo
sobre la de un de colorante.
solución salina
superficie del portaobjetos para
fisiológica
material. su observación.
estéril.
SIN COLORANTE
 Este tipo de preparación se
emplea para detectar
trofozoítos móviles de
parásitos intestinales como
Giardia, Entamoeba, huevos
y quistes de otros parásitos,
larvas y gusanos adultos,
Trichomonas, hifas de
hongos, etc

En la imagen: Candida sp en un examen en fresco.

TINCIÓN
SIMPLE:
Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se
tiñen con la misma tonalidad.

El Hidróxido de potasio
permite ver elementos Azul de metileno de
de hongos ya que este Loeffler puede
digiere parcialmente los agregarse a las
componentes proteicos, preparaciones en fresco
pero no actúa sobre los de heces para observar
polisacáridos de las la presencia de
paredes celulares de los leucocitos.
hongos.
TINCIÓN DIFERENCIADA

Se utilizan varios colorantes combinados.

Las estructuras celulares se diferencian en función de

los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su
propia constitución química.

Los ejemplos clásicos sería la tinción de GRAM o la

de Ziehl-Neelsen
En la imagen: BGN y levaduras en una tinción
GRAM
LA TINCIÓN NEGATIVA

Es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir,
pero se colorea en cambio el medio que las rodea.

Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células.

La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no

tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las
células.
En la imagen: Cryptococcus neoformans en una
tinción con tinta china.
TIPOS DE COLORANTES

La mayoría de los
colorantes son
compuestos Tienen alguna afinidad
orgánicos . específica por los
materiales celulares.
Estos colorantes se combinan con intensidad con los
constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los
ácidos nucleídos y los polisacáridos ácidos.
Violeta
Safranina
Cristal
catiónicos
Colorantes
metileno
Azul de
 Eosina

Colorantes
Aniones

Fuscina Rojo
ácida congo

Se combinan con los constituyentes celulares cargados

positivamente, tales como muchas proteínas.
 Los colorantes de este grupo se
combinan con los materiales
lipídicos de la célula, usándose a
menudo para revelar la
localización de los depósitos de
grasa.

Colorantes Negro
Liposolubles
Sudán
RECOMENDACIONES:

Esta sustancia se denomina

Algunos colorantes teñirán
mejor sólo después de que la
célula haya sido tratada con otra
sustancia química.
mordiente; habitualmente ácido
taníco. El mordiente se combina
con un constituyente celular y lo
altera de tal modo que ahora sí
podrá atacar el colorante.

El azul de metileno es un buen

colorante simple que actúa sobre
todas las células bacterianas
rápidamente y que no produce
un color tan intenso que
oscurezca los detalles celulares.
Los métodos de tinción son de gran
utilidad, pero deben usarse siempre
con precaución, ya que pueden
conducir a errores.

Las moléculas de colorante forman

en ocasiones precipitados o
agregados que parecen estructuras
celulares auténticas, pero que son
formaciones completamente
artificiales inducidas por el mismo
colorante.
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