Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado

Decanato de Ciencias Veterinarias

Área de Anatomía Microscópica
Departamento de Ciencias Básicas

Técnicas histológicas

MV. Johilmer J. Álvarez Gil. Abril 2018.

UCLA-DCV Anatomía Microscópica y Embriología Veterinaria.
alvarez@ucla.edu.ve

BIENVENIDOS……..
Átomo Moléculas

CÉLULA

TEJIDO

SISTEMA
PROCARIOTA: núcleo carece EUCARIOTA: núcleo posee
de membrana nuclear membrana nuclear
Átomo Moléculas

CÉLULA

TEJIDO

EPITELIAL CONECTIVO MUSCULAR NERVIOSO

ÓRGANO

SISTEMA
 ORGANISMOS

UNICELULARES PLURICELULARES

Protozoarios
Metazoarios
SISTEMA INTERNACIONAL DE LONGITUD
1 cm 10 mm (milímetros)
1 mm 1000 µm (micrómetros)
1 µm 1000 nm (nanómetros)
1 nm 10 Å (Angströn)

1 µm 1 x 10-3 = 0,001 mm
 Anatomía
Microscópica

HISTOLOGÍA

Es la ciencia que estudia las características

estructurales de células, tejido u órgano que
solo son observables por medio del
microscopio.
 Anatomía Macroscópica vs Anatomía Microscópica

• Toma de muestra y preparación de los tejidos

• Observación con microscopio

• Disección de tejidos
• Observación a simple vista
 Técnica histológica

El conjunto de procedimientos aplicados a

una muestra biológica a fin de prepararlo
para poderlo observar a través de un
microscopio.
 Técnica histológica
Procedimientos
Vitales Postvitales
Procedimientos histológicos que se
realiza en células, tejidos u
organismos vivos en su estado
natural, con el uso de microscopios
ópticos especiales
Métodos para estudio “In vivo” Métodos para estudio “In vitro”

Técnica de coloración vital” Cultivo de células

Definición Definición

Tipos de coloración vital Condiciones (4)

Intravital Supravital
(se inyecta a (se aplica a células Desventajas (2)
organismos vivos) o tejidos vivos)
 Técnica histológica
Procedimientos
Vitales
Procedimientos histológicos que se
realiza en células, tejidos u
organismos vivos en su estado
natural, con el uso de microscopios
ópticos especiales
Métodos para estudio “In vivo” Métodos para estudio “In vitro”
Técnica de coloración vital” Cultivo de células
Postvitales
Procedimiento histológico que se
realiza en células, tejidos u órganos de
organismos sin signos vitales, a fin de
preservar su estructura evitando los
procesos postmortem, y ser
observados con microscopio óptico.
Métodos para estudios
de tejidos muertos”

Definición Definición Técnica de la parafina

1. Toma de la muestra
Tipos de coloración vital Condiciones (4) 2. Fijación
3. Deshidratación
Intravital Supravital 4. Aclaración
5. Inclusión en parafina
(se inyecta a (se aplica a células Desventajas (2) 6. Formación de los bloques de parafina
organismos vivos) o tejidos vivos) 7. Microtomía u obtención de cortes
Parafina…
Es hidrocarburo sólido a temperatura ambiente, blanco, inodoro, y
líquido en temperaturas elevadas, de color translúcida, se obtiene de la
destilación del petróleo y se emplea generalmente para fabricar velas,
otros usos como en cosmetología y técnicas histológicas.

Parafina sólida Parafina fundida

 Técnica de la parafina
1. Toma de muestra
Procedimientos:
Biopsia: toma de fragmentos de tejidos Necropsia: toma de fragmentos de tejidos u órganos
u órganos de un organismo vivo. De un organismo muerto.

PASOS:
1. Muerte del animal (natural o eutanasia).
2. Extracción de los órganos con delicadeza en la manipulación.
3. La muestra debe ser tomada con prontitud.
4. La muestra debe ser representativa del órgano o tejido.
5. El tamaño de la muestra debe ser de 1 cm 3.
6. Cortes con bisturí realizando movimientos deslizantes sin presión.
 Técnica de la parafina
2. Fijación
Definición: paso de la técnica de parafina que consiste en utilizar agentes fijadores en la
muestra biológica, a fin de detener el proceso postmorten (autolisis) para conservar de manera
integra la estructura de la muestra.

Clasificación de los fijadores;

Físicos Químicos

Compuestos: (ventajas):
Líquido de Bouin
Líquido de Zenker
Líquido de Helly
 1. Impedir rápidamente
los procesos autolíticos.
5. fácil de 2. Alto poder de
conseguir
Cualidades penetración.
y económico. de un
buen fijador

4. Conferir dureza 3. Fácil manipulación.

no excesiva.

Lavado de la muestra fijada:

Es un paso de la fijación que consiste en lavar la muestra biológica con agua
corriente a fin de retirar el fijador para evitar el excesivo endurecimiento y
facilitar seccionar en láminas delgadas.
Técnica de la
parafina
PLANOS DE CORTES HISTOLOGICOS
PROCESO DE COLORACION O TINCIÓN

La coloración o tinción
Es un proceso que consiste en la aplicación de una sustancia
colorante a una célula o tejido, a fin de aportarle color para
destacar y contrastar o distinguir los componentes
estructurales de la células o tejidos.

Colorante:
Son sustancias con tinción propia,
capaz de ceder color a células y
tejidos dado a su afinidad por sus
componentes.
 Bases teóricas de la coloración
Teoría física
Sostiene que la coloración se da por un proceso físico de cohesión molecular,
es decir, que las partículas disueltas en los colorantes son absorbidos por los
componentes celulares.

Teoría química
Sostiene que la coloración se da por un proceso químico de unión iónica,
que consiste en que los radicales aniónicos y catiónicos de los colorantes se
unen a los radicales catiónicos y aniónicos de los componentes celulares
dado a un proceso de neutralización de las cargas.
Radical El radical aniónico del
COLORANTE ÁCIDOS (-) (+) ácido (-) colorante se unió al radical
El radical aniónico (ácido) catiónico de la célula
Radical básico (+)
del colorante es el que (citoplasma)
aporta color
Radical el radical catiónico del
COLORANTE BÁSICO (+) (-) ácido (-) colorante se unió al radical
El radical catiónico aniónico de la célula
(básico) del colorante Radical básico (+) (núcleo)
es el que aporta color
 Criterios de clasificación de los colorantes
1. Por su origen
1. Animal: El carmín de color rojo intenso (se
Colorantes extrae de la cochinilla)
Naturales
2. Vegetal: La Hematoxilina de color azul (se
extraede la corteza del campeche), La orceina (se
extrae de un tipo de Liquen).

Eosina colorante rojo anaranjado es un derivado de la

Colorantes
anilina, producto de la destilación de la hulla o carbón.
Artificiales

COLORANTE ÁCIDOS (-) (+) = el radical aniónico aporta el color

2. Por el radical COLORANTE BÁSICO (+) (-)= el radical catiónico aporta el color
que cede color
COLORANTE NEUTRO (+) (-)= ambos radicales aportan color

3. Por los componentes Colorantes citoplasmáticos

celulares que colorea Colorantes nucleares
 Tipos de coloraciones

Los tejidos adquieren el mismo El tejido se tiñe con un color diferente al del
color del colorante empleado. colorante empleado.

El tejido se colorea progresivamente con El tejido se colorea con una solución

soluciones de diferente concentraciones hasta concentrada del colorante y luego se
alcanzar el punto óptimo. elimina el exceso por medio de
diferenciadores.

Los tejidos se tiñen con soluciones sucesivas de

varios colorantes, los cuales colorearán los
componentes del tejido según su afinidad.
 TÉCNICA DE COLORACIÓN CON HEMATOXILINA - EOSINA (H - E)
O COLORACIÓN DE RUTINA

Hidratación del Tejido

Coloración con Hematoxilina

Lavado con agua

Coloración con Eosina

Deshidratación

Aclaración (diafanización)
Montaje definitivo
y obtención de la preparación histológica
 AFINIDAD TINTORIAL

Componente acidófilo: componente que tiene afinidad por los colorantes ácidos,
ejemplo citoplasma.

Componente basófilo: componente que tiene afinidad por los colorantes básicos,
ejemplo el núcleo.

Componente neutrófilo: componente que tiene afinidad por los colorantes

neutros, ejemplo citoplasma de los neutrófilos.

Componente argirofilo: componente que tiene afinidad por las sales de plata,
ejemplo fibras reticulares .

Acidofilia Basofilia
 COLORACION H - E

GANGLIO LINFÁTICO. HE (obj.100X - inmersión) CEREBRO. HE (obj.100X - inmersión)

- Tejido conectivo reticular. Macrófagos libres y fijos - Corteza cerebral. Neurona piramidal

AFINIDAD TINTORIAL DEL CITOPLASMA ? AFINIDAD TINTORIAL DEL CITOPLASMA ?

AFINIDAD TINTORIAL DEL NÚCLEO ? AFINIDAD TINTORIAL DEL NÚCLEO ?

 IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA RIÑÓN- Lámina basal.-ÁCIDO
PARA FIBRAS RETICULARES PERYÓDICO-SCHIFF (PAS)

TRICRÓMICA DE MALLORY PARA TRICRÓMICA DE MASSON PARA

COLÁGENO COLÁGENO
 MICROSCOPÍA
Es el estudio detallado de
células, tejidos y órganos
mediante el uso del
microscopio.

• Identificar células, tejidos y órganos indicados

y/o enfocados.

• Describir las características histológicas que le

permitió identificarlo.
 CLASIFICACIÓN DE LOS MICROSCOPIOS SEGÚN EL TIPO DE LUZ

Simple
Monocular
M.O
ÓPTICO propiamente
dicho
Binoculares
Compuesto
Luz polarizada
M.O especiales Campo oscuro
Contraste de fases

Transmisión
ELECTRÓNICO
Barrido
 SISTEMA MECÁNICO

TUBO

CABEZAL
PINZA
REVOLVER
ASA
CARRO
PLATINA
TORNILLO
MACROMETRICO

TORNILLO
BASE
MICROMETRICO
SISTEMA SISTEMA
ÓPTICO DE ILUMINACIÓN
OCULARES

OBJETIVOS

CONDENSADOR
LÁMPARA

El sistema de iluminación genera,

trasmite y modula la intensidad de la
luz que incide sobre la preparación
histológica.
 MICROSCOPIOS ÓPTICOS ESPECIALES

*Utiliza dos filtros polarizantes: un

*Se utiliza un condensador
polarizador que dirige toda la luz hacia el
especial que desvía la luz para
objeto y el analizador que registra la
que no llegue directamente al
imagen con toda las variaciones sufrida
objeto, observándose la imagen
por la luz al atravesar el objeto.
sobre un fondo oscuro.

•Diafragma anular: A diferencia del tipo iris,

este diafragma solo deja pasar la luz a
través de una línea circular. Al atravesarlo, la
luz forma un cilindro hueco que ilumina la
preparación.
•Placa anular de fase: Es una lente que se
añade al sistema de lentes del objetivo. Esta
placa enlentece los rayos de luz procedentes
del condensador, y es indispensable que se
encuentre alineada con el diafragma.
 MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS

Microscopio Electrónico Microscopio Electrónico

de Transmisión de Barrido
 ARTEFACTOS DE LA PREPARACIONES HISTOLÓGICA
Definición: serie de alteraciones que pueden observarse en los cortes histológicos,
ocasionadas por anomalías en uno o más de los diferentes pasos de la técnica
histológica y que pueden dificultar o incluso imposibilitar la identificación de tejidos y
órganos.

Hallazgos frecuentes:

PELOS O FIBRAS AUTÓLISIS RETRACCIÓN PRECIPITADO

´PLIEGUES MUESCAS BURBUJAS

 RECOMENDACIONES

1.Desarrollar el programa instruccional.

2.Bibliografía recomendada:
• Histología básica de: Junqueira &
Carneiro.
• Histología Veterinaria de H. Dieter Dellman.

3.Revisar páginas web:

https://anatomiamicrovet.wordpress.com

4. Aclarar dudas con el profesor en su

respectivo horario de consultas.

Email: alvarez@ucla.edu.ve
Horario de consultas: Viernes de 9:00 a.m. -11:00 a.m.