MICROBIOLOGÍA

FARMACEUTICA
GENERALIDADES

• USP ( farmacopea de los

estados unidos)
• PH EUR ( farmacopea
europea)
MEDIOS DE
CULTIVO
 ARMONIZADOS
 CICLOS DE AUTOCLAVADO VALIDADOS
 RECOMENDACIONES DE PROVEEDOR
 CONDICIONES AMBIENTALES IDONEAS
 PESAJE CORRECTO
 INDICADORES DE VERIFICACION
MEDIOS RECOMENDADOS POR LA USP
(LIQUIDOS)
CALDO CASOY (Tripticasa de soya/Triptona de Soya) Medio liquido nutritivo

CALDO RAPPAPORT (Medio de cultivo selectivo – Pre enriquecimiento para Salmonella)

CALDO MOSSEL (Enterobacterias / gram - / Bilis tolerantes)

CALDO PEPTONA DE CASEINA+ LECITINA +POLISORBATO (superficie- áreas- medios de transporte)

CALDO MacConkey (Caldo selectivo y diferencial Coliformes totales y E. coli)

AGUA PEPTONADA (medio de transporte – Manipuladores )

CALDO RCM (Clostridium)

CALDO TIOGLICOLATO (Anaerobio y Clostridium)

MEDIOS RECOMENDADOS POR LA USP
(SOLIDOS)
AGAR CASOY (Nutritivo – Bacterias aerobias mesófilas)

AGAR SABOURAUD (Nutritivo Hongos y levaduras )

AGAR XLD ((Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar) – Aislamiento selectivo de Salmonella

AGAR VRB (Violeta cristal-Rojo neutro-Bilis-Lactosa)- Enterobacterias

AGAR MacConkey (Aislamiento de coliformes y E.coli)

AGAR MANITOL (S. aureus)

AGAR CETRIMIDE (Pseudomona)

AGAR COLUMBIA (Clostridium)

AGAR SPS (Clostridium)

TEST DE PROMOCION Y CRECIMIENTO

• Capacidad de un medio de cultivo

debido a su composición para
estimular y/o favorecer el
crecimiento de un microorganismo
o grupo de microorganismo.
• Objetivo: Valorar y verificar la
calidad de los medios de cultivos
empleados en los ensayos
microbiológicos mediante la
evaluación de la Productividad ,
selectividad y porcentaje de
recuperación.
 Cepa de referencia Cepa de referencia (control
Medio de cultivo Test
(control negativo) positivo)

CEPAS PARA Caldo Mossel para enriquecimiento de Recuento de bacterias Gram negativas Staphylococcus aureus
Escherichia coli ATCC 8739

CONTROL DE
enterobacterias tolerantes a bilis y coliformes. ATCC 6538 Pseudomonas aeuruginosa
ATCC 9027

CALIDAD DE Violet Red Bile Glucose Agar

Recuento de bacterias Gram negativas Staphylococcus aureus
Escherichia coli ATCC 8739

MEDIOS DE tolerantes a bilis y coliformes. ATCC 6538 Pseudomonas aeuruginosa

ATCC 9027

CULTIVO MacConkey Broth Recuento y detección de Escherichia coli

Staphylococcus aureus
ATCC 6538
Escherichia coli ATCC 8739

Staphylococcus aureus
MacConkey Broth Recuento y detección de Escherichia coli Escherichia coli ATCC 8739
ATCC 6538
Candida albicans ATCC
10231
Agar Sabouraud Recuento de hongos y levaduras N/A
Apergillus brasiliensis
ATCC16404
E.coli ATCC8739
Bacillus spizizenni
Agar Casoy Recuento de aerobios mesófilos N/A
ATCC6633
S.aureus ATCC6538
Caldo Rappaport vassilidis para Staphylococcus aureus Salmonella entérica NCTC
Recuento y detección de Salmonella sp
enriquecimiento de Salmonella sp ATCC 6538 6017
Staphylococcus aureus Salmonella entérica NCTC
Xilose, Lysine agar deoxicolato agar Recuento y detección de Salmonella sp
ATCC 6538 6017
Staphylococcus aureus
Agar Manitol Recuento de Stphylococcus aureus Escherichia coli ATCC 8739
ATCC 6538
Recuento y detección de Pseudomonas Pseudomonas aeruginosa
Cetrimide agar Escherichia coli ATCC 8739
aeruginosa ATCC 9027
CRITERIOS PROMOCION
Y CRECIMIENTO
 Factor 2: Consiste en comparar el resultado del lote del medio de cultivo
nuevo con el resultado del lote de medio de cultivo aprobado anteriormente;
este resultado debe estar entre rango de ≥ a la mitad del resultado anterior y ≤
al doble del resultado anterior.

 Productividad: es un atributo que se le debe evaluar a los medios de cultivos

selectivo:

Pr= NS/NO

 Pr: productividad

NS: número de colonias del medio selectivo a evaluar.

NO: numero de colonias del medio de cultivo de referencia (no selectivo).

NOTA: El resultado obtenido debe ser mayor a 0.7

 Porcentaje de recuperación: es un parámetro que debe ser evaluado a todos

los medios de cultivos, se calcula de la siguiente manera:

 % de Recuperación = Número de colonias recuperadas en la prueba x100

Número de colonias inoculadas

DILUYENTE
VIA DE ADMINISTRACION
PREPARACION DE
LA MUESTRA
 PESAR 10g o al menos 1g (10mL o 1mL)
del producto en análisis en 90 mL o 1
mL de Caldo caso con el aditivo
necesario para la inactivación del
conservante .
 Dar un tiempo de pre-
acondicionamiento máximo de 5 horas
para microorganismo aerobios en
incubar de 20-25 °C
 Análisis
 Para análisis de bacterias aerobias mesófilas y
hongos y levadura se debe agregar en una caja de
Petri estéril 1mL de la muestra pre-acondicionada;
realizar este procedimiento por duplicado.
 Verter el medio de cultivo correspondiente al
análisis , dejar gelificar y proceder a incubar:

• Bacterias aerobias mesófilas de 30-35°C por un

tiempo de 3-5Días
• Hongos y levaduras de 20-25°C por un tiempo de 5-
7Días
 si el análisis requiere un parámetro adicional como
coliformes(mossel) o cándida (caldo Sabouraud)
proceder a realizar e incubar la dilución de 18 a
24Horas
REPIQUES FASE
1
 Pasado el tiempo de incubación de la dilución se procede a
realizar los respectivos repiques para microorganismos
específicos según lo requiera la especificación:
• E.coli: transferir 1ml de la dilución a un frasco con 100mL de
caldo MacConkey incubar de 40-45°C por 18-24 horas.
• Salmonella : transferir 0,1 microlitros de la dilución a un
tubo con 10 mL de caldo rappaport incubar de 30-35 °C por
18-24 horas. .
• Staphylococcus aureus: con ayuda de un asa realizar siembra
masiva en una caja de Petri con agar manitol e incubar de 30-
35 °C por 18-24 horas.
• Pseudomonas aeruginosa: con ayuda de un asa realizar
siembra masiva sobre una caja de Petri con agar cetrimide e
incubar de 30-35 °C por 18-24 horas.
REPIQUES FASE
2
• Pasado el tiempo de incubación de la dilución
se procede a realizar los respectivos repiques
para microorganismos específicos según lo
requiera la especificación:
• E.coli: con ayuda de asa realizar siembra masiva
en agar MacConkey e incubar de 30-35 °C por
18-24 horas.
• Salmonella: con ayuda de un asa realizar
siembra masiva en agar XLD.
• Coliformes totales: con ayuda de un asa estéril
realizar siembra masiva en agar VRB.
TSB – Caldo Tripticasa de
Soya – Caldo Casoy
 PREPARACIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
 PESAR 10g o al menos 1g
(10mL o 1mL) del producto en
análisis en 90 mL o 1 mL de
Caldo caso con el aditivo
necesario para la inactivación
del conservante .
 Dar un tiempo de pre-
acondicionamiento máximo
de 5 horas para
microorganismo aerobios en
incubar de 20-25 °C
 Tarar Balanza Pesar 10 gr en 90 ml de Caldo
 Para análisis de bacterias aerobias mesófilas y Tripteína de Soya Dar un tiempo de pre-
hongos y levadura se debe agregar en una caja de acondicionamiento
Petri estéril 1mL de la muestra pre-acondicionada; máximo de 5 horas para
realizar este procedimiento por duplicado. microorganismo aerobios
e incubar de 20-25 °C
 Verter el medio de cultivo correspondiente al
análisis , dejar gelificar y proceder a incubar:
• Bacterias aerobias mesófilas de 30-35°C por un
tiempo de 3-5Días (Agar Casoy)
• Hongos y levaduras de 20-25°C por un tiempo de 5-
7Días (Agar Sabouraud)
 Si el análisis requiere un parámetro adicional
como coliformes(mossel) o cándida (caldo
Sabouraud) proceder a realizar e incubar la dilución
de 18 a 24Horas
 INTERPRETACION

E.coli
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Coliformes totales
Salmonella
PRUEBAS
ESPECIALES
 Esporas sulfito reductoras

Clostridium sp :
 • La validación de un método
analítico:
Es el proceso por el cual se
establece, mediante estudios
de laboratorio, que las
características de desempeño
del método cumplen con los
requisitos para las aplicaciones
analíticas previstas.

VALIDACION DE
METODOS
CRITERIOS
• ESPECIFICIDAD: Fracción del número total de cultivos o colonias negativos que son
asignados correctamente con el método utilizado.
• EXACTITUD RELATIVA: Grado de concordancia entre los resultados del método evaluado y
los obtenidos utilizando un método de referencia reconocido
• PRECISION: proximidad entre las indicaciones o los valores medidos obtenidos en
mediciones repetidas de un mismo objeto, o de objetos similares, bajo condiciones
especificadas.
• ROBUSTEZ: capacidad de un método para mantenerse sin cambios ante pequeñas pero
deliberadas variaciones en los parámetros del método, que provee una indicación de su
confiabilidad durante el uso normal.
• SENSIBILIDAD:(para un tipo de matriz y un nivel de inoculación dado): Fracción del número
total de cultivos o colonias positivos que son correctamente asignados con el método
utilizado.
• LIMITE DE DTECCION: aplicado a ensayos microbiológicos cualitativos, es el número mínimo
de microorganismos que pueden ser detectados, pero en cantidades que no pueden
estimarse con precisión
MONITOREO
MICROBIOLOGICO EN
PLANTAS DE PRODUCCION
• AMBIENTES:
MONITOREO
MICROBIOLOGICO EN
PLANTAS DE
PRODUCCION
• MANIPULADORES:
MONITOREO MICROBIOLOGICO EN
PLANTAS DE PRODUCCION
• SUPERFICIES:
MUESTREO DE SUPERFICIES (ambientes ISO 5 – Clase A)
RECUENTO TOTAL DE AEROBIOS MESOFILOS RECUENTO TOTAL DE HONGOS Y LEVADURA
≤ 1ufc/30 cm2 ≤1 ufc/30 cm2

Límite de Alerta: 1 ufc/30 cm2 Límite de Alerta: 1 ufc/30 cm2

Límite de Acción: 1 ufc/30 cm2 Límite de Acción: 1 ufc/30 cm2

MUESTREO DE SUPERFICIES (ambientes ISO 8 – Clase D)

RECUENTO TOTAL DE AEROBIOS MESOFILOS RECUENTO TOTAL DE HONGOS Y LEVADURA
≤100 ufc/30 cm2 ≤10 ufc/30 cm2

Límite de Alerta: 50 ufc/30 cm2 Límite de Alerta: 5 ufc/30 cm2

Límite de Acción: 80 ufc/30 cm2 Límite de Acción: 8 ufc/30 cm2

MONITOREO
MICROBIOLOGICO EN
PLANTAS DE
PRODUCCION
AIRE COMPRIMIDO:
MONITOREO
MICROBIOLOGICO EN • AGUAS:
PLANTAS DE
PRODUCCION

Agua
Purificada/Agua
Análisis Agua Potable de proceso
< 100 ufc/100 ml <100 ufc/ml
Recuento Total De Límite de alerta: 50 Límite de alerta:
Aerobios Mesófilos ufc/100ml 50 ufc/ml
Límite de acción: 80 Límite de acción:
ufc/100ml 80 ufc/ml
Pseudomonas aeruginosa 0 ufc/100 ml Ausente
Coliformes Totales 0 ufc/100ml Ausente
Escherichia coli 0 ufc/100 ml Ausente