Práctica N° 10

Estudio Microbiológico de
Pseudomonas aeruginosa
Fundamento

 Pseudomonas aeruginosa es uno de los microorganismos mas versátiles que se

encuentra en la naturaleza. Se ,le encuentra en el suelo, el agua, el intestino del
hombre y como contaminante de soluciones desinfectantes en hospitales, de
alimentos y del agua de consumo.

 Ps. aeruginosa es un cocobacilo gran negativo, móvil y oxidasa positiva. Son bacterias
aerobias no fermentativas, producen pigmentos de color azul verdoso que recibe el
nombre de piocianina, son solubles y se difunden en el medio que contaminan dando
la típica coloración verdosa.
Objetivos

 Estudiar la morfología y características tintoriales.

 Estudiar las características culturales y fisiológicas.
Materiales
 Cultivos de Pseudomonas aeruginosa
 Placas de agar Cetrimide
 Tubos con agar TSI, LIA
 Tubos con agar tripticasa soja
 Tubos con caldo tripticasa soja
 Reactivos: oxidasa
 Reactivo de KOVAC’S
 Bateria de Gram.
 Láminas portaobjetos.
 Microscopio.
 Aceite de inmersión.
Procedimiento
 A. Estudio de las características morfológicas y
Tintoriales.

 Realizar un frotis de cada uno de los cultivos y teñir con

la técnica de Gram.
 Observar la morfología al microscopio utilizando objetivo
de inmersión.
 Cocobacilos gran negativos delgados
 Dibujar.

 B. Estudio de las características culturales y fisiológicas

 Observar el desarrollo de cada uno de los cultivos en

placas de agar tripticasa soja y en tubos con caldo
tripticasa soja.
 Describir las características de las colonias: Colonias
grandes, ligeramente planas, producen pigmento de
color verdoso
 C. Prueba de la oxidasa.

 Coger una colonia del cultivo en agar tripticasa soja y

con ayuda de un palillo mondadiente y colocarlo
sobre el reactivo de oxidasa.
 Observar la reacción en 60 segundos.
 Interpretación: POSITIVO: Formación de un color
morado a negro
 D. Prueba de fermentación de carbohidratos.

 Los cultivos se siembran en tubos con agar hierro

triple azucar (TSI) que presenta azúcares como la
lactosa, sacarosa y glucosa y como indicador el rojo
de fenol y se llevan a incubación a 35ºC durante 18-
24 horas.
 Observa e interpretar.
 Interpretación: P. aeruginosa no fermenta los
carbohidratos (K/K) y el medio es de color grosella
 E. Prueba del citrato.
E F
 Sembrar los cultivos en tubos con agar citrato de
simons, que contiene como sustrato el citrato de
sodio como única fuente de carbono y como
indicador de pH el azul de bromotimol.
 Incubar los cultivos a 35ºC durante 18 a 24 horas.
 Observar e interpretar.
 Interpretación: POSITIVO: Medio vira al color azul.
 F. Producción de Pigmento.
 Sembrar la cepa de Pseudomonas aeruginosa en
tubos con agar Trypticasa soja, e incubar a 37°C
durante 24 horas.
 Observar la producción de pigmento verde.
Cuestionario

1. Porque es importante el estudio de Pseudomonas aeruginosa a nivel

hospitalario?
2. Que tipo de pigmentos produce Pseudomonas aeruginosa?