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INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERA QUIMICA E INDUSTRIAS EXTRACTIVAS

Espectroscopia Molecular y Atmica

Partes del espectrofotmetro

Alumno Snchez Mrquez Sajid

Profesora. Jimnez Vieyra Mara Elena Grupo: 3IM74

PARTES DEL ESPECTROFOTOMETRO La mayora de los equipos de espectroscopia que se utilizan en las regiones UV-Visible tienen los siguientes componentes: 1. Una fuente estable de energa radiante. 2. Un selector de longitudes de onda que asla una regin limitada dl espectro para su medida. 3. Uno o varios recipientes de muestras 4. Un detector de radiacin que convierte la energa radiante en una seal elctrica medible 5. Una unidad de procesamiento y lectura de seales que habitualmente consiste en un equipo electrnico y un computador. FUENTES ESPECTROSCPICAS Una fuente apropiada para estudios espectroscpicos debe generar un haz de radiacin suficientemente energtico para que su deteccin y medida sean fciles de realizar. Existen dos tipos de fuentes: Fuentes continuas: emiten una radiacin cuya intensidad vara de manera gradual en funcin de la longitud de onda Fuentes lineales: emiten un numero limitado de lneas espectrales, cada una de las cuales abarca un rango de longitudes de onda muy limitado. Las fuentes tambin se pueden clasificar como: Fuentes continuas: emiten una radiacin constante con respecto al tiempo. Fuentes pulsantes: emiten radiacin en forma interrumpida a modo de rfagas. Fuentes continuas mas empleadas para el rango UV/visible Regiones de longitud de Fuente onda, nm Lmparas de arco de Xenn Lmpara de H2 y D2 Lmpara de Tungsteno/halgeno Lmpara de Tungsteno 250-600 160-380 240-2500

Tipo de espectroscopia

Fluorescencia molecular Absorcin molecular UV Absorcin molecular UV/ visible/ IR cercano Absorcin molecular visible/ IR cercano Absorcin molecular IR Absorcin molecular IR Absorcin molecular IR

350-2200

Lampara de Nernst Alambre de nicromo Globar

400-20000 750-20000 1200-40000

SELECTORES DE LONGITUDES DE ONDA Estos dispositivos refuerzan tanto la selectividad como la sensibilidad de un instrumento. Muchos instrumentos utilizan un monocromador o filtro para aislar las longitudes de onda deseada para que solo la banda de inters sea detectada y medida, este generalmente tiene una rejilla de difraccin para dispersar la radiacin en sus longitudes de onda. El intervalo de longitudes de onda que pasan por un monocromador son denominadas paso de banda espectral o ancho de banda efectiva. Otros instrumentos utilizan un espectrgrafo para desdoblar o dispersar las longitudes de onda en forma que puedan ser captadas por un detector de multicanales. Otros instrumentos que se utilizan en espectroscopia de emisin contienen un dispositivo llamado policromador qu tiene varias rendijas de salida y multiples detectores. Esto permite la medida simultnea de muchas longitudes de onda discretas. REJILLAS La rejilla maestra consta de una superficie dura, pulida y pticamente plana, en la que mediante una herramienta de diamante con forma adecuada se hace un buen numero de surcos paralelos muy cercanos entre si. Comnmente la rejilla para la regin UV y visible contiene entre 300 y 2000 surcos/mm siendo entre 1200 y 1400 el mas comn Rejilla escalonada. Esta ranurada o abrillantada para que tenga caras relativamente anchas en las que se produzca la reflexin y tambin caras estrechas que no se utilizan. Esta geometra permite una difraccin muy eficaz de la radiacin. La dispersin de la radiacin a lo largo del plano focal es lineal. Rejillas cncavas. Permite disear un monocromador sin espejos o lentes auxiliares de colimacin y enfoque, porque la superficie cncava dispersa la radiacin y la enfoca tambin en la rendija de salida. Rejilla hologrfica Debido a su mayor perfeccin en cuanto a la forma y las dimensiones de las lneas, producen espectros ms libres de radiacin parsita y fantasmas. FILTROS Filtros de radiacin. El funcionamiento de los filtros consiste en absorber toda la radiacin de una fuente continua, con excepcin de una banda restringida. En espectrografa se utilizan dos tipos de filtro: filtros de interferencia y filtros de absorcin y en general, transmiten una fraccin de radiacin mucho mayor a sus longitudes de ondas nominales, que los filtros de absorcin. Filtros de interferencia. Se utilizan con la radiacin ultravioleta y visible, asi como con longitudes de onda de hasta 14 m en la regin infrarroja. Se basa en la interferencia ptica para proporcionar una banda de radiacin estrecha que suele tener de 5 a 20 nm de ancho. Consta de una capa de material dielctrico revestida por ambas caras con una pelcula de metal que transmite casi la mitad de la radiacin que incide en ella y reflejan la otra mitad. Filtros de absorcin. Solo pueden emplearse en la regin visible. Constan de una placa de vidrio de color que suprime parte de la radiacin incidente por la absorcin, tienen anchos de banda que varan entre 30 y 250 nm. Pero sus caractersticas de rendimiento son claramente inferiores a las de los filtros de interferencia.

DETECTORES. Un detector es un dispositivo que indica la existencia de algn fenmeno fsico. En los instrumentos modernos la informacin buscada se codifica y se procesa como una seal elctrica. El trmino transductor se emplea para indicar el tipo de detector que convierte cantidades, tales como intensidad luminosa, pH, masa y temperatura, en seales elctricas que despus pueden ser amplificadas, manipuladas y convertidas en nmeros proporcionales a la magnitud de la cantidad original. Propiedades de lo transductores de radiacin. El transductor ideal responde a niveles bajos de energa radiante en una amplia gama de longitudes de onda, produce una seal elctrica amplificable y tiene bajo nivel de ruido elctrico. Es esencial que la seal elctrica producida por el transductor sea directamente proporcional a la potencia radiante P del rayo. Hay dos tipos generales:uno de ellos responde a los fotones y el otro al calor. Todos los detectores de fotones se basan en la interaccin de radiacin con una superficie reactiva, ya sea para producir electrones (fotoemisin) o para promover electrones a estados de energa en los que pueden conducir electricidad (fotoconduccin). PROCESADORES DE SEALES E INDICADORES. Son dispositivos electrnicos que amplifican la seal elctrica procedente del detector, adems, pueden modificar la seal cc a ca, cambiar la fase de la seal y filtrarla para suprimir los componentes no deseados. RECIPIENTES PARA MUESTRAS. Generalmente reciben el nombre de celdas o probetas, deben tener ventanas que sean transparentes a la regin del espectro que se desea detectar. Las mejores tienen ventanas perpendiculares a la direccin del rayo a fin de minimizar las perdidas por reflexin.

PRINCIPIO DE FUNCIONAMIENTO Un espectrofotmetro o colormetro hace uso de la transmisin de la luz a travs de una solucin para determinar la concentracin de un soluto dentro de la solucin. Un espectrofotmetro difiere de un colormetro en la manera en la cual la luz es separada en sus longitudes de onda componentes. Un espectrofotmetro usa un prisma y un colormetro utiliza filtros. Ambos se basan en un diseo simple en el cual la luz de una determinada longitud de onda pasa a travs de una muestra y se mide la cantidad de luz que es transmitida. Esto es realizado colocando una fotocelda del otro lado de la muestra. Todas las molculas absorben energa radiante en una longitud de onda u otra. Esas que absorben energa dentro del espectro visible son conocidos como pigmentos. Las protenas y los cidos nucleicos absorben luz en el rango ultravioleta. La transmitancia es el porcentaje de luz que pasa a travs de una muestra. Lo que hace a todo esto fcil de aplicar, es la conversin de esa informacin de porcentaje de transmitancia en una funcin logartmica conocida como absorbancia (o densidad ptica). La Ley de Beer-Lambert Definicin La absorbancia: Es el negativo del logaritmo en base 10 de la transmitancia. A = - log10 T A=absorbancia T=transmitancia La relacin de la absorbancia con la concentracin se encontr por dos bioqumicos que tiene la ecuacin para una lnea recta, y= mx +b, dnde la m es la pendiente de la lnea y b es la intercepcin de la recta con el eje y. Si la medicin se realiza de tal manera que b = 0 (es decir, una solucin que no contiene colorante no tiene absorbancia), y si substituimos a absorbancia por y, entonces la concentracin por x, m, llegamos a la formulacin de la Ley de Beer-Lambert: A = Cl Donde A = absorbancia C = concentracin molar = el coeficiente de extincin molar para una determinada longitud de onda l = distancia que atraviesa la luz por la muestra en centmetros Los equipos y las celdas estn diseados de tal manera que l siempre es 1 cm y por tanto es ignorado.

Para utilizar un espectrofotmetro hay que preparar una serie de diluciones con concentracin conocida. Una de estas muestras no contendr soluto y es conocido como el BLANCO. Se usa para ajustar el instrumento para leer transmitancia del 100 % o 0 de absorbancia. En la prctica, un valor de transmitancia (la absorbancia infinita) de 0 % es establecido colocando un objeto opaco la fuente de luz y la fotocelda. El control electrnico es accionado a fin de que muestre una lectura de transmitancia de 0 %.. La muestra BLANCO (no contiene soluto o colorante) es colocada en el porta celda, y el espectrofotmetro reajustado para leer transmitancia de 100 %. Todas la dems medidas sern hechas solo por introducir las muestras en el porta celdas y medir el % de transmitancia. La mayora de espectrofotmetros tienen sistema de conversin del % de transmitancia en absorbancia. Despus de registrar la absorbancia para una serie de muestras de concentracin conocida (estndares), se hace una grfica del valor de absorbancia (el eje vertical o Y) vs la concentracin (el eje de las abscisas o X). La pendiente de la lnea es el coeficiente de extincin (). Note que esto puede ser computado directamente por rearreglo de la ley de BeerLambert, as: = A/C Este valor puede calcularse para cada lectura y el promedio asumida como el valor de la pendiente. Recuerde que este valor es una constante. As, una vez que se calcula, subsiguientemente puede usarse para determinar una concentracin desconocida por un nuevo rearreglo de la ley del Beer-Lambert C=A/ Cualquier valor de absorbancia puede ser fcilmente convertido a una concentracin correspondiente solamente dividiendo la absorbancia por . Tanto longitudes de onda en el infrarrojo o ultravioleta (UV) pueden ser medidas. La UV es muy til para los bilogos debido a que muchas molculas (todas las protenas y todos cidos nucleicos) absorben luz ultravioleta. Los nicos cambios que se necesita hacer es el uso de celdas de cuarzo en lugar de celdas o tubos de vidrio o plstico. El vidrio y el plstico absorben la luz UV y por lo tanto son inapropiados para el uso en un espectrofotmetro UV. Un equipo capaz de utilizar luz visible (usualmente con una lmpara de tungsteno o halgeno) y luz UV es conocido como un espectrofotmetro UV/Vis.

BLIBLIOGRAFIA *Anlisis qumico cuantitativo, Daniel C. Harris, 3ra Edicin, Editorial REVERT, pg. 461 *Mtodos pticos de Anlisis, Eugene D. Olsen, Editorial REVERT 1990, pg. 114 *http://elblogdeadepi.blogspot.mx/p/resumen-analisis-bioquimico-fundamentos.html *http://cristiancarvajalmayo.blogspot.mx/2011/05/espectrofotometro.html