U.A.B.J.

O
F.C.Q.
MICROBIOLÓGIA

“TÉCNICAS BÁSICAS PARA EL CULTIVO BACTERIANO”

EL MÉTODO DE SIEMBRA POR
ESTRÍA EN PLACA
 Es el método más usado para obtener
cultivos axénicos. Para ello, con un asa de
siembra se toma una muestra de la población
mixta y a continuación se hacen estrías sobre
la superficie de un medio sólido preparado
en una placa Petri.
 A continuación, las placas se incuban en un
lugar adecuado, permitiendo que las células
aisladas experimenten un número suficiente
de divisiones para formar colonias visibles.
a) Estriado simple o estría continua
Se utiliza para siembra masiva cuando se requiere
aumentar la población microbiana, se divide en:
 corta

 cerrada

Se siembra en una placa con agar estéril y con cuidado de

no romper el agar, inocula la muestra en un extremo de la
placa y con el asa en posición ligeramente horizontal
realiza las estrías oscilando el asa de siembra sobre la
superficie del agar; mediante un balanceo sucesivo y
rápido de la muñeca.
 b) Estría cruzada:
Es un método que se utiliza para aislamiento
y caracterización por siembra por estría en
placa.
a) esterilizar un asa de siembra por flameado en la llama
de un mechero

b) introducirla en la suspensión bacteriana

para recoger una muestra

c) sembrar haciendo estrías sobre la superficie de un medio sólido en

una placa Petri, y

d) volver a esterilizar el asa, tocar en la zona de la placa ya sembrada

y hacer un segundo grupo de estrías en una región nueva de la placa.
Repetir el proceso una tercera y una cuarta vez, hasta conseguir que
los grupos de células se diluyan y se separen células aisladas.

e) Después de la incubación, se desarrollan colonias aisladas. Para

estar seguro de que el cultivo es puro, repetir el proceso entero;
para ello tomar una colonia aislada y sembrar por estrías una
segunda placa.
 c) estriado en cuadrantes:
 Esta técnica se utiliza para aislamiento y
caracterización. Se dibuja imaginariamente
cuatro cuadrantes en la placa.
 Con el asa flameada y fría se toma un poco
de la muestra y dibujamos sobre la placa una
serie de estrías sin que toquen unas con
otras.
 Flameamos y enfriamos el asa de platino y
realizamos estrías en el cuarto cuadrante sin
coger muestra, comenzando a partir de la
última estría del tercer cuadrante.
 la mayor parte del inóculo se descarga en
los cuadrantes 1y 2,lo que permite obtener
colonias separadas en 3 y 4.

 d) Difusión o dispersión: está técnica se

utiliza para pruebas de sensibilidad y puede
derivarse a través de dispositivos como
varillas de vidrio, hisopos, o placa vertida.
MÉTODO DE VERTIDO EN PLACA
 En este método, las suspensiones de células microbianas se
diluyen antes de su siembra en placa. Se siguen estas técnicas
cuando la muestra contiene tantos microorganismos, que la
dilución no se puede realizar en una sola etapa. Por ejemplo,
una suspensión con millones de células por mililitro debe ser
diluida cierta cantidad de veces para obtener una suspensión
con un centenar de células por mililitro, Por tanto, se realizan
diluciones seriadas.
 Para realizar diluciones de diez en diez, se añade 1 ml de la
suspensión bacteriana a 9 ml (le medio estéril o solución salina,
igualmente estéril. Se agita vigorosamente para diluir las células
y el proceso se repite cuantas veces sea necesario.
 En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se
mezclan con agar fundido y se vierten en placa. Algunas colonias
quedarán embebidas en el agar y otras creceran en la superficie.
Las colonias superficiales se extenderán y serán más grandes.
 MÉTODO DE EXTENSIÓN EN PLACA
 En este caso las muestras diluidas se
siembran directamente en la superficie de la
placa de agar, extendiéndolas con ayuda de
un asa de Digralsky de cristal estéril. La
suspensión se absorbe en el agar, dejando las
células microbianas sobre la superficie.
 Las dos técnicas de siembra por dilución
presentan la ventaja de que permiten
obtener un mayor numero de colonias
aisladas que el método de siembra por
estría, por tanto se eligen cuando se ha de
seleccionar una cepa a partir de una mezcla
con varios tipos de microorganismos.
 SIEMBRA POR PICADURA
 El inóculo es introducido con el asa recta o
pipeta pasteur hasta el fondo del medio con un
solo movimiento y teniendo cuidado en hacer el
mismo trayecto de entrada quede salida. Debe
flamearse la boca del tubo antes y después de la
siembra. Antes de introducir el tubo a la estufa
de cultivo debe soltarse el tapón de goma para
evitar que los gases expulsen el tapón.
 En el caso con la pipeta pasteur es necesario
calentar el medio y cuando se encuentra en
estado líquido a una temperatura de 42°C se
agrega el inoculo, se homogeniza y se deja
solidificar.
 SIEMBRA EN MEDIO SEMISÓLIDO
 La siembra en este tipo de medio, que
contiene una proporción menor de agar que
los medios sólidos y que se envasa en tubos,
se lleva a cabo con un hilo de siembra
esterilizado, con el cual se toma la muestra.
 El medio queda inoculado al introducir el hilo
en profundidad hasta el fondo del tubo,
retirándolo sin tocar la pared del tubo.
GRACIAS::::::::::::::::::::::::::::::
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