PCR MÚLTIPLE O

MULTIPLEX.
VARGAS GONZALEZ JUAN OMAR.
INTRODUCCIÓN.
-Descrito en 1988 por
Chamberlain.
-Con la finalidad de amplificar loci
múltiples
-La mPCR ha sido aplicada en
muchas áreas para el análisis
simultáneo de marcadores
múltiples incluyendo:
• Deleciones,
• Mutaciones
• Polimorfismo
• Análisis cuantitativos por
transcriptasa reversa.
¿Qué es?

Es una PCR en la cual hay

múltiples pares de primers
(hasta 8) lo que da una serie de
productos. Éstos pueden verse
como múltiples bandas en un
gel de agarosa. Se usa
frecuentemente en diagnóstico
médico. Ahorra tiempo y
gastos. Requiere una cuidadosa
optimización.
APLICACIONES. Genética de
poblaciones

virus, bacterias, hongos,

Determinación de origen
y parásitos.

Con óptimos resultados ha

sido empleada en:
1. análisis microsatelital​
2.detección de organismos
genéticamente modificado
esta técnica ha
s demostrado ser un Investigar interacciones
3. detección de patógenos método valioso para la tróficas.
4. tipificación de diferentes identificación de :
cepas
 VENTAJAS DE PCR MULTIPLEX.
• PCR en la cual se amplifica más de una secuencia en una misma reacción.

• Sus ventajas: se obtiene la información de varios loci en una solar reacción,

menor cantidad de molde para el análisis, menor cantidad de reactivos, rápida
construcción de base de datos.
METODOLOGÍA.

01 02 03 04
Condiciones Desnaturalización▫ -En una sola -Se emplean mas
similares de PCR Alineamiento ▫ reacción de PCR de 1 par de
para los genes Extensión se amplifican al primers (fw y rv;
amplificar mismo tiempo 2 o 1par por cada
más genes. gen)
CARACTERÍSTICAS DE LOS PRIMERS PARA PCR
MÚLTIPLE.

-No hibridar en
zonas donde no
-Específicos se requiere -No hibridar
para cada gen. sobre todo en entre ellos
zonas del otro
gen a amplificar.
METODOLOGÍA PARA PCR.
 • 1 ciclo de desnaturalización: 95.0° C 5.0
min
• 30 ciclos de amplificación:
PROGRAMACIÓN desnaturalización 95.0° C 1.0 min
DEL Alineamiento 58.7° C 1.0 min
TERMOCICLADOR. amplificación 72.0° C 1.5 min
• 1 ciclo de amplificación final 72.0° C 5.0
min
• Refrigeración 4°C
DESARROLLO DE UNA PCR MÚLTIPLE PARA
LA IDENTIFICACIÓN DE STAPHYLOCOCCUS SPP.
COMO CAUSA DE MASTITIS CAPRINA.
REFERENCIAS.

Innis M. A., Gelfand D. H., Sninsky J. J., White T. J. PCR Protocols. Academic Press Inc. Estados Unidos, 1990.
Griffin H. G., Griffin A. M. PCR Technology: Current Innovations. CRC Press Inc. Estados Unidos, 1994.
Bustin S. A. Absolute quantification of mRNA using real-time reverse transcription polymerase chain reaction assays. Journal of
Molecular Endocrinology. 2000. 25,169-193.
Ruiz-Romero, RA, Cervantes-Olivares, RA, Martínez-Gómez, D, Ducoing-Watty, AE, & Hernández-Andrade, L. (2013). Desarrollo
de una PCR múltiple para la identificación de Staphylococcus spp. como causa de mastitis caprina. Archivos de medicina
veterinaria, 45(3), 327-331. https://dx.doi.org/10.4067/S0301-732X2013000300015
http://www.roche-applied-science.com/PROD_INF/MANUALS/pcr_man/index.htm http://www.med.sc.edu:85/pcr/realtime-
home.htm http://www.espanol.pcrlinks.com/ http://folk.uio.no/kristban/realtime/pfaffl.pdf