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17.2.01 10 ml de solución de telurito de potasio al 1% esterilizada por filtración (p / v). Mezclar y

Método oficial AOAC 966.23 almacenar a 4° ± 1 ° C.

Métodos microbiológicos
Primera acción 1966
Acción final 1989
(Para la determinación del recuento aeróbico en placa, el número más
probable de bacterias coliformes y Escherichia coli yEstafilococo en productos
tales como productos cárnicos, de aves de corral y vegetales cocidos
congelados; mariscos cocidos y / o empanizados; productos de panadería;
ensaladas carnes de frutos secos; e ingredientes de muestras de laboratorio
de alimentos recolectadas durante las inspecciones sanitarias de los
establecimientos de producción de alimentos, a menos que se den
instrucciones específicas para ese producto).
(3) Medio completo.—Añadir 5 ml de enriquecimiento calentado a 95 ml de
medio basal fundido enfriado a 45° -50 ° C. Mezcle bien, evite las burbujas, y
vierta de 15 a 18 ml en 100× Placas de Petri de 15 mm. Guarde los platos en
temperatura ambiente (≤25 ° C) para ≤5 días antes de su uso. El medio debe ser densamente
opaco; no utilice placas no opacas. Seque las placas antes de usarlas mediante uno de los
siguientes métodos: (a) en horno de convección o incubadora durante 30 min a 50 ° C sin las
tapas y con la superficie del agar hacia abajo; (B) en estufa de tiro forzado o incubadora 2 ha
50 ° C con las tapas puestas y la superficie de agar hacia arriba; (C) en incubadora 4 ha 35 ° C
con las tapas puestas y la superficie de agar hacia arriba; o (D) en una mesa de laboratorio de
16 a 18 ha temperatura ambiente con las tapas puestas y la superficie del agar hacia arriba.

A. Medios y reactivos (4) Interpretación.—Colonias de S. aureus son típicamente circulares, lisos,

convexos, húmedos, de 2 a 3 mm de diámetro en placas con poca gente, de
Los ingredientes y reactivos utilizados para preparar los siguientes medios
color gris-negro a negro azabache, frecuentemente con un margen de color
pueden ser productos de cualquier fabricante si las pruebas comparativas muestran
claro (blanquecino), rodeado por una zona opaca (precipitado) y
que se obtienen resultados satisfactorios. Utilice carbohidratos puros adecuados
frecuentemente con zona despejada exterior; las colonias tienen una
para uso biológico, productos químicos inorgánicos de grado reactivo ACS y tintes
consistencia mantecosa a gomosa cuando se tocan con una aguja de
certificados por la Comisión de manchas biológicas para su uso en medios.
inoculación. Se pueden encontrar cepas no lipolíticas ocasionales que tienen el
Por conveniencia, se pueden usar medios deshidratados de cualquier marca
mismo aspecto, excepto que no hay zonas opacas y claras circundantes. Las
equivalente a la formulación. Analice cada lote de medio para determinar la
colonias aisladas de alimentos congelados o desecados que se han
esterilidad y las cualidades promotoras del crecimiento de los organismos adecuados
almacenado durante períodos prolongados suelen ser menos negras que las
(p. Ej., Inocular medios que contienen lactosa con bacterias coliformes,Estafilococo
colonias típicas y pueden tener un aspecto rugoso y una textura seca.
medios con Estafilococo, etc.).
Determine el pH antes de esterilizarlo en autoclave con un medidor de pH estandarizado
( F ) Trypt i caso ( t rypt ic) caldo de soja con cloruro de sodio al 10%.—Añadir 95 g

frente a tampones estándar, 964,24 (ver A.1.04). Ajuste el pH, cuando sea necesario,
de NaCl a 1 L de solución de 17,0 g de tripticasa o triptosa (digestión pancreática de

agregando NaOH 1 M o HCl 1 M para que los resultados del pH final establecido después de
la esterilización en autoclave.
Utilice vidrio o plástico estéril, 100 × 15 mm, placas de Petri. (a)
Agar de recuento en placa.—Ver 940.36A(gramo) (ver 17.1.02).
(B) Caldo de triptosa de sulfato de laurilo.—Disolver 20,0 g de
caseína), 3,0 g de fitona (digestión papaica de harina de soja), 5,0 g de NaCl, 2,5 g de
K2HPO4y 2,5 g de glucosa. Calentar suavemente si es necesario. Dispensar en tubos
de 16 a 20 mm de diámetro hasta la profundidad
de 5-8 cm. Autoclave 15 min a 121 ° C. PH final, 7.3± 0,2.
(gramo) Caldo EC.—Disolver 20,0 g de tripticasa o triptosa (digestión

tripticasa o triptosa (digestión pancreática de caseína), 5,0 g de NaCl, 5,0 pancreática de caseína), 1,5 g de sal biliar n. ° 3 de Bacto o mezcla de sales
biliares, 5,0 g de lactosa, 4,0 g de K2HPO4, 1,5 g KH2correos4y 5,0 g de NaCl en 1
g de lactosa, 2,75 g de K2HPO4, 2,75 g KH2correos4y 0,1 g de lauril sulfato
LH2O. Dispense 8 mL en 16 × Tubos de ensayo de 150 mm que contienen 10 ×
de sodio en 1 LH2O con calor suave, si es necesario. Dispense porciones
Tubo de fermentación de 75 mm. Autoclave 15 min a 121 ° C. PH final, 6,9± 0,1.
de 10 ml en 20× Tubos de ensayo de 150 mm que contienen 10 × Tubos
de fermentación de 75 mm. Autoclave 15 min a 121 ° C. PH final, 6,8± 0,1.
(h) Infusión cerebro-corazón.-Ver 967.25A(r) (ver 17.9.01). Dispensar en botellas o
(C) Bilis lactosa verde brillante (BGLB) caldo.—Disolver 10,0 g de peptona y
tubos para su almacenamiento y esterilizar en autoclave durante 15 min a 121 ° C.
10,0 g de lactosa en aproximadamente 500 ml de H2O. Agregue una solución
(pH 7.0-7.5) de 20 g de oxgall u oxbile deshidratados en 200 mL de H2O. Diluir
( I ) D esiccatedcoagulasepla sma ( Conejo ) con EDTA.—Reconstituya
a 975 ml y ajustar el pH a 7,4. Agregue 13.3 mL de solución al 0.1% de verde
de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Si no está disponible,
brillante y diluya a 1 L con H2O. Filtre a través de algodón y dispense porciones
reconstituya el plasma coagulasa desecado (conejo) y agregue Na2H2
de 10 ml en 20 × Tubos de ensayo de 150 mm que contienen 10 × Tubos de
EDTA hasta una concentración final de 0,1% en plasma reconstituido.
fermentación de 75 mm. Autoclave 15 min a 121 ° C. PH final, 7,2± 0,1.
(j) Caldo de triptófano.-Ver 940.36A(h) (ver 17.1.02) pero dispense
en porciones de 10 mL.
(D) Agar eosina azul de metileno (Levine) .—Ver 940.36A(D) (ver
(k) Caldo de glucosa tamponado (medio MR-VP).-Ver 940.36A(B) (
17.1.02).
ver 17.1.02).
(mi) Medio de Baird-Parker (agar de huevo telurito glicina piruvato, ETGPA) .
(l) Caldo de citrato de Koser.-Ver 940.36A(mi) (ver 17.1.02).
— (1) Medio basal. — Suspenda 10,0 g de triptona, 5,0 g de extracto de carne,
(metro) Diluyente de fosfato tamponado de Butterfield.- (1) Solución de
1,0 g de extracto de levadura, 10 g de piruvato de sodio, 12,0 g de glicina, 5,0 g
reserva.—Disolver 34,0 g KH2correos4 en 500 mLH2O, ajustar a pH 7,2 con
de LiCl⋅6H2O y 20,0 g de agar en 950 mL de H2O. Caliente a pb con agitación
aproximadamente 175 ml de NaOH 1 M y diluir a 1 L. Conservar en el
frecuente para disolver los ingredientes por completo. Dispense porciones de
frigorífico. (2) Diluente.—Diluya 1,25 ml de solución madre a 1 L con H2O.
95 ml en frascos con tapón de rosca. Autoclave 15 min a 121 ° C. PH final, 7.0±
Prepare blancos de dilución con esta solución, dispensando lo suficiente para
0,2 a 25ºC. Tienda≤1 mes a las 4° ± 1 ° C.
permitir pérdidas durante el autoclave. Autoclave 15 min a 121 ° C.
(2) Enriquecimiento.—Enriquecimiento con telurito de Bacto EY (BD Biosciences Codified

Cat. No. 277910, o equivalente) o preparar de la siguiente manera: Remoje los huevos frescos B. Preparación de suspensiones de prueba

durante aproximadamente 1 minuto en una dilución de HgCl saturado2 solución (1 + 1000, p / (Prepare todas las diluciones decimales con 90 ml de diluyente estéril más 10 ml
v). Romper los huevos asépticamente y separar las yemas de las claras. Mezclar la yema y la de dilución previa a menos que se especifique lo contrario. Agite todas las diluciones
solución salina fisiológica,940,36B(C) (ver 17.1.02), (3 + 7, v / v) en batidora de alta velocidad 25 veces en un arco de 30 cm. Las pipetas deben entregar con precisión el volumen
aprox. 5 s. A 50 ml de emulsión de yema de huevo, agregue requerido. No las use para administrar <10% de su volumen total.

- 2005 AOAC INTERNACIONAL

Por ejemplo, para administrar 1 mL, no use pipeta> 10 mL; para
administrar 0.1 mL, no use pipeta> 1 mL.)
(a) Alimentos congelados y / o preparados.—Utilice equilibrio con capacidad
de ≥2 kg y una legibilidad de 0,1 g para pesar asépticamente 50 g de porción de
prueba sin descongelar (si está congelada) en un vaso mezclador de alta velocidad
estéril. Agregue 450 mL de diluyente,A(metro) (2) y mezclar 2 min. (Si necesario
para templar la muestra de prueba congelada para eliminar una porción de 50 g, mantenga ≤18 h
a las 2° -5 ° C.) No deben transcurrir> 15 minutos desde el momento en que se mezcla la muestra de
prueba hasta que todas las diluciones estén en el medio apropiado.
Si toda la muestra de prueba consta de <50 g, pese la porción equivalente a
12 analice la muestra y agregue el volumen de diluyente estéril requerido para hacer una dilución 1:10.
El volumen total en la jarra de la licuadora debe cubrir completamente las cuchillas.
(B) Mitades de carne de nuez de árbol y trozos más grandes.—Pésese asépticamente 50 g
de muestra de ensayo en un recipiente estéril. Agregue 50 mL de diluyente,A(metro) (2), y
agite vigorosamente (50 veces a través de un arco de 30 cm) para obtener 100 dilución.
- 2005 AOAC INTERNACIONAL
Deje reposar de 3 a 5 minutos y agite justo antes de realizar diluciones e
inoculaciones seriadas.
(C) Harina de nueces.—Pésese asépticamente 10 g de muestra de ensayo en un recipiente
estéril. Agregue 90 mL de diluyente,A(metro) (2), y agite vigorosamente (50 veces a través de
un arco de 30 cm) para obtener 10−1 dilución. Deje reposar de 3 a 5 minutos y agite para
resuspender justo antes de realizar diluciones e inoculaciones en serie.
C.Recuento de placas aeróbicas
Sembrar placas de Petri duplicadas en diluciones de 1:10, 1: 100, 1: 1000, etc.,
utilizando agar de recuento en placa, A(a). Normalmente, de 1: 100 a 1:10 000 son
satisfactorios. Coloque 1 ml de la dilución adecuada en cada placa y agregue agar
fundido (enfriado a 42° -45 ° C) dentro de los 15 minutos desde el momento de la
dilución original. Incubar 48± 2 ha 35 ° C y cuente las placas duplicadas en un rango
adecuado (30 a 300 colonias). Si las placas no contienen de 30 a 300 colonias, registre
la dilución contada y anote el número de colonias encontradas. Los recuentos medios
obtenidos y el informe como recuento aeróbico en placa / g.