CITRATO DE SIMMONS

 color : VERDE
 indicador: AZUL BROMOCRESOL
 sustrato principal: CITRATO DE SODIO
USO
Para la identificación de bacterias, principalmente Enterobacterias basándose en la
utilización del citrato, como única fuente de carbono.
•El citrato de sodio es la única fuente de carbono.
•El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico del medio
Cuando las bacterias utilizan el citrato, el medio se alcaliniza y cambia el color inicial
verde (neutro), que esta dado por la presencia del azul de bromotimol a color azul
(alcalino, prueba positiva).
La reacción negativa se manifiesta por ausencia de crecimiento y no hay cambio de
color.
FUNDAMENTO
Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono
para el metabolismo y crecimiento, provocando alcalinidad.
El medio incluye citrato de sodio, un anión como única fuente de carbono y fosfato de amonio
como única fuente de nitrógeno.
Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensación de acetilo con la
coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de Krebs.
El desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimático sin la intervención de la
coenzima A.
Esta enzima se denomina citritasa o citrato desmolasa.
Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio:
Consistencia del medio: Sólido inclinado (pico de flauta)
PROCEDIMIENTO
Se inocula la superficie del agar inclinado con una sola estría en el pico.

Utilizar un cultivo de 24 horas en un medio sólido y cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se
pueden producir falsos positivos por crecimiento a partir del medio de cultivo del inóculo.
Incubar a 35°C durante 4 días.

Interpretación

El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento a lo largo de la estría, acompañado o no de un viraje
del indicador al azul.
 RESULTADOS

Positivo: Klebsiella spp.

Negativo: E.coli

Medio de cultivo: Citrato de Simmons

INOCULACIÓN

Se toma una colonia bien aislada de la superficie del medio de aislamiento primario
y se inocula como una estría única en la superficie del pico de flauta.

Incubación: Tiempo = 24 - 48 horas

Temperatura = 35 - 37° C
SIM SULFURO
INDOL
MOVILIDAD
USO
•Medio semisólido
• destinado a verificar movilidad
• producción de indol y sulfuro de hidrogeno por los microorganismos
• es útil para diferenciar miembros de la familia ENTEROBACTERIAS.
FUNDAMENTO
Es un medio semisólido que contiene 0,3 gr de Agar. Se siembra con punta en
profundidad. Se incuba 24 horas a 37ºC.
Se observan tres características: Movilidad, cuando el desarrollo se produce en todo
el medio causando turbidez difusa.
Inmovilidad, cuando el desarrollo se produce sólo a lo largo de la línea de siembra.
Producción de sulfídrico: se observa un precipitado de color negro.
Producción de indol: a partir del triptofano, al agregar un reactivo (kovacs o earlich)
se forma un anillo rojo intenso en
la superficie del medio.
INTERPRETACION
MOVILIDAD
 COLOR MEDIO DE CULTIVO
 PRUEBA DE INDOL
MOVILIDAD
RESULTADO POSITIVO ……………. Presencia de turbidez o crecimiento mas allá
de la línea de siembra .
RESUSLTADO NEGATIVO ………......... Crecimiento solamente en la línea de siembra
PRODUCION DE H 2S
La bacteria reaciona con el TIOSULFATO de sodio por medio de una reacción de
reducción que da sulfito y sulfato
El gas incolo H2S ,reacciona con una sal pesada ,citrato férrico de amonio para
porducir un precipitado negro insoluble,sulfato ferroso.

RESULTADO POSITIVO…….ennegrecimiento del medio de cultivo a lo largo de la

línea de siembra y en todo el medio .
RESULTADO NEGATIVO ……el medio permanece sin cambio de color.
PRUEBA DE INDOL
Agregar al medio de cultivo 3 A 5 gotas de Indol Reactivo
RESULTADO POSITIVO…. anillo rojo en la superficie del medio
RESULTADO NEGATIVO ….. El color de reactivo revelador permanece incoloro –
amarillento.