ELECTROFORESIS

Prof. Doris Nobrega

ELECTROFORESIS

 La primera electroforesis fue realizada por Arne

Tiselius en 1937, y se basaba en el movimiento
libre de las partículas a través de una solución.

 La electroforesis es una técnica para la separación

de moléculas según la movilidad de éstas en un
campo eléctrico.

 Separa los diferentes elementos que componen

una mezcla compleja en función de la carga
eléctrica de los mismos.
SEPARACIÓN DE LOS ELEMENTOS
DE UNA MEZCLA

- +
MIGRACIÓN ELECTROFORÉTICA

 Es la movilidad de la molécula por unidad de

campo eléctrico

- +
Aplicación
PRINCIPIO

 Movimiento de una partícula cargada en el seno de un

campo eléctrico:
– Partículas cargadas positivamente (catión) migran hacia el
polo negativo (cátodo).
– Partículas cargadas negativamente (anión) migran hacia el
polo positivo (ánodo).

La fuerza (F) que ejerce el campo eléctrico sobre la partícula

cargada es proporcional a la carga (Q) de la partícula y al
voltaje (V) del campo eléctrico aplicado:
F=Q.V
PRINCIPIO

 Existe otra fuerza opuesta al movimiento de la partícula que es

proporcional al tamaño y forma de la misma, y a la velocidad del buffer.
Fr = f . V
donde: f = Coeficiente de fricción
v = Velocidad

 Estas dos fuerzas se equilibran cuando la partícula comienza a migrar,

y hacen que alcance una velocidad constante.
 La velocidad de migración por unidad de campo eléctrico se define
como movilidad electroforética, y se expresa con el símbolo µ.
 La movilidad electroforética es la constante de proporcionalidad entre
la velocidad del ion y la fuerza del campo eléctrico. La movilidad es
proporcional a la carga del ion e inversamente proporcional al
coeficiente de fricción. En moléculas de tamaño parecido, el valor de la
movilidad aumenta con la carga.
 FACTORES QUE AFECTAN LA
MIGRACIÓN DE LAS PARTÍCULAS

Carga neta Tamaño y

de la forma de la
partícula partícula

Punto VARIABLES QUE Soporte

Isoeléctrico AFECTAN A LA
ELECTROFORESIS
Efecto del Potencial
pH del del campo
tampón eléctrico

Fuerza iónica Temperatura

del tampón
TIPOS DE ELECTROFORESIS

 ELECTROFORESIS  ELECTROFORESIS
LIBRE DE ZONA
– Sobre una disolución o – Sobre un soporte a
suspensión través del cual avanza
– Baja Resolución la muestra
– Mayor resolución
TIPOS DE ELECTROFORESIS

Libre

Tipos de Papel
electroforesis

Sobre
Acetato de celulosa
Soporte
(De Zona) Almidón
Gel Poliacrilamida
Agar
REALIZACIÓN DE LA
ELECTROFORESIS

Preparación de Selección y Preparación del

la muestra soporte

Aplicación de
la muestra

Electroforesis

Revelado

Lectura
REALIZACIÓN DE LA
ELECTROFORESIS

 Preparación de la muestra
– Suero, plasma, sangre total, orina, etc.)
 Selección y preparación del soporte
– No restrictivos: Las partículas se separan en función
de su carga eléctrica
 Papel
 Acetato de celulosa
 Agarosa
– Restrictivos: Las partículas se separan en función de
su tamaño
 Geles de almidón
 Geles de poliacrilamida
Selección del Soporte

 Soportes No Restrictivos  Soportes restrictivos

– Porosidad del soporte – Poros de tamaño similar al
mucho mayor que el de las moléculas
tamaño de las moléculas  Efecto de tamizado durante
 No ofrece restricción al el avance
avance de las moléculas  Se separa dependiendo de
 Se separan dependiendo su tamaño
de su densidad de carga – Ejemplos:
– Ejemplos.  Agarosa (para ácidos
 Acetato de celulosa (para nucleicos)
proteínas)  Poliacrilamida para
 Agarosa (para proteínas) proteínas
REALIZACIÓN DE LA
ELECTROFORESIS

 Aplicación de la muestra
– Aplicación sobre la superficie
– Orificios o ranuras en los geles
– Inclusión de la muestra en el gel

 Proceso electroforético
– Instrumentación
 Cubeta o Cámara electroforética
 Fuente de alimentación
EQUIPO DE ELECTROFORESIS
REALIZACIÓN DE LA
ELECTROFORESIS

 Revelado y Fijación
– Localización para posterior evaluación de las
distintas fracciones en que ha sido separada la
muestra
 Lectura y evaluación
– Elución
 Se obtiene una solución coloreada que se cuantifica
espectrofotométricamente

– Densitometría
 Lectura directa de la tira que presenta las zonas
separadas mediante el uso de un fotodensitómetro
Evaluación de electroforesis por
densitometría
TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS

 Electroforesis en papel

El papel fue el
primer soporte
empleado en
electroforesis.
Se encuentra en
desuso.
TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS

 Electroforesis en Acetato de Celulosa

TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS

 Electroforesis en gel de agarosa

TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS

 Electroforesis en gel de almidón

Se encuentra en
desuso debido a las
dificultades
técnicas que
presenta el manejo
del gel.
TÉCNICAS ELECTROFORÉETICAS

 Electroforesis en gel de poliacrilamida

Los geles se pueden
emplear en tubos o
en placas, y en su
fabricación pueden
prepararse con una
composición:
- Homogénea
- Gradientes
- Contínuos
- Discontínuos
TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS

 Isoelectroenfoque

Técnica que sirve

para separar
sustancias
anfóteras como las
proteínas.
TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS

 Electroforesis Capilar

Esquema del equipo de

Electroforesis Capilar
TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS

 Electrocromatografía
APLICACIONES CLÍNICAS

 La electroforesis puede ser empleada en la

separación de los siguientes compuestos:
– Aminoácidos
– Proteínas séricas
– Lipoproteínas
– Glucoproteínas
– Ácidos nucleicos
– Hemoglobinas
– Isoenzimas
– Inmunoglobulinas