UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE NUEVO LEÓN

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO

Química Analítica Avanzada

PIA

Dr. Edgar Abraham García Zepeda

Grupo: 002

Arturo Fabrizio Loera Ortiz 1682246

Diana Guadalupe Macías Pérez 1595323

A 6 de Diciembre del 2017 en San Nicolás de los Garza, Nuevo León

 Timol

El 2-isopropil-5-metilfenol es una sustancia

cristalina incolora que está presente en los
aceites esenciales del tomillo o del orégano.

Se caracteriza por su poder desinfectante y

fungicida.

Pertenece al grupo de los terpenos y su

isómero es el carvacrol.
 Datos fisicoquímicos del timol.

Formula C10H14O
Masa molecular 150.22 g/mol
Punto de fusión 49 – 51°C
Punto de ebullición 232°C
Punto de inflamación 107°C
Presión de vapor 2.5 Pa a 25°C
Densidad 0.97 g/cm³ (20 °C)
0.93 g/ cm³ (70 °C)
Solubilidad 0.98 g/L en agua a 25°C
1000 g/L en etanol
1428 g/L en cloroformo

LD50 980 mg/kg

Materia prima
La materia prima utilizada para la extracción del aceite esencial, fueron las
hojas, tallos y flores frescas de las especies Thymus Vulgaris.

Selección y limpieza
Se seleccionó el tomillo de acuerdo a sus características físicas separando
material con signos de degradación, se eliminó cuidadosamente las raíces y la
tierra adherida.

Secado
Para facilitar el proceso de extracción, se realizó un secado natural bajo el sol a
temperatura ambiente entre 20° a 23°C y se molió usando un molino eléctrico.
 Destilación
El aceite esencial de tomillo se aisló mediante destilación por arrastre de
vapor.

• Se utilizo 20 g del material vegetal molido seco en 300 ml de agua destilada

y se puso a reflujo aproximadamente 2 horas.

• El aceite obtenido se extrajo con diclorometano y se secó sobre cloruro de

calcio anhidro.

• Se obtiene un aceite de color amarillo brillante y se almacena en una

botella de vidrio oscuro a 4 °C.
 Hidrodestilacion
• 20 g de tomillo seco se sometieron a hidrodestilación (HD) durante 2 h con
300 ml de agua destilada utilizando un aparato tipo Clevenger de acuerdo
con la Farmacopea Europea (1975).

• El aceite obtenido se extrajo con diclorometano y se secó sobre cloruro de

calcio anhidro.

• Se obtiene un aceite de color amarillo brillante y se almacena en una botella

de vidrio oscuro a 4°C.
 Cromatografía en capa fina
• Para elegir el eluente en cromatografía en columna, se realiza una cromatografía
en capa fina.

• Se utilizo silica gel con benceno y cloroformo (3:1 v/v).

• Se visualizaron los compuestos por la luz UV a 254 nm.

• Los resultados mostraron 2 puntos Rf: 0.52 y Rf: 0.36

 Cromatografía en columna del aceite esencial

• Se utilizo el aceite esencial sobre gel de sílice (malla 35-70) con benceno:
cloroformo (3: 1 V/V) como fase móvil.

• Se obtuvo un Rf = 0.52 en la fracción principal y una fracción menor con Rf =

0.36.

• El proceso se repitió varias veces para recoger la cantidad suficiente de cada una
de las fracciones para análisis adicionales.

• Finalmente, se tomaron los espectros IR, 1H NMR y MS de las fracciones

purificadas.
 Separación de timol del aceite esencial

• El aceite esencial crudo se enfrió en nitrógeno líquido y se separó en un solido

cristalino.
• Se realiza cromatografía de capa fina (TLC)
 Fase estacionaria: gel de sílice
 Fase móvil: benceno: cloroformo (3:1 V/V)
• Mostró una fracción con Rf = 0,52.
• Se purifica el solido por el método de sublimación.
 Caracterización de los componentes

TIMOL CARVACOL LINALOOL

• Rf = 0.52 • Rf =0.52 Rf=0.36

• Separado por enfriamiento • Separado por
del crudo aceite esencial cromatografía de
en nitrógeno líquido. columna.
 Cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC)

Modelo Waters Alliance

Columna capilar ACE C18 (4.6 × 250 mm, 5

μm).
Velocidad de flujo 1.0 ml/min
Preparación de la muestra

10 mg de aceite esencial en un matraz volumétrico de 100 ml y se diluyo con

ACN: H2O (80:20) (100 μg/ml).

Preparación de soluciones estándar

• Las soluciones madre de timol (3 mg/ml) y carvacrol (0,3 mg/ml) se

prepararon por separado en ACN: H2O (80:20).

• Para la curva de calibración se prepararon soluciones de 15-90 μg/ml para

timol y 2-9 μg/ml a partir del stock.
 Resonancia magnética nuclear (RMN)

Modelo Espectrómetro Mercury-300BB

Disolvente CDCl3
Espectro 1H 300,06 MHz
Espectro 13C 75,45 MHz
 Espectrómetro de masas (MS)

Modelo Vannian Mat 311-A

Voltaje de ionización 70 eV
Temperatura de fuente de iones 150°C
Intervalo de masa 50 a 550 m/z