MICROSCOPIA

Dr. Guillermo Bornaz Acosta

 MICROSCOPÍA

• Los microscopios tienen un poder de

ampliación, que permite visualizar
objetos pequeños y un poder de
resolución (capacidad de ver por
separado dos puntos cercanos) que
permite observar con nitidez.
• Para observar un tejido al microscopio,
debe cortarse en láminas muy finas y
luego teñirse.
HISTORIA DE LATEORÍA CELULAR
 El descubrimiento de la célula
• Las características asociadas con la vida, dependen de las
actividades que ocurren dentro de las células.

• Los organismos de una célula se llaman unicelulares, y dentro de

esta célula se llevan a cabo todas las actividades de vida del
organismo unicelular.

• Los organismos más grandes están formados por muchas células y

son llamados organismos multicelulares, y las actividades de estos
organismos se dividen entre sus muchas células.
 • En 1639 observó finos cortes de
• Fue a partir de la invención del corcho y lo que vio le recordó a las
microscopio que empezó el estudio de la celdillas de un panal de abejas, de allí
el nombre de células.
célula.

• A pesar que Hooke no observó

• Los primeros microscopios se hicieron células vivas, se le considera la
alrededor del año 1600. primera persona que observó e
identificó las células.
• En 1590, los artesanos holandeses Hans y
Zacharias Jansen, improvisaron el primer
microscopio compuesto.

• Robert Hook, científico inglés, mejoró el

microscopio compuesto.
• Años más tarde de las observaciones de Hooke, Anton Leeuwenhoek,
comerciante holandés, construyó el microscopio simple, con una sola lente. El
mismo ampliaba 200 veces el objetivo, a diferencia del de Hook que solo
aumentaba 30 veces los objetos.

• Leeuwenhoek a partir de 1676 empezó a observar organismos simples, bacterias

y células sanguíneas.
 EVOLUCIÓN MICROSCOPIO
S. XVII - XVIII

S. XIX - XX
 LA TEORÍA CELULAR
LAS PRIMERAS OBSERVACIONES MICROSCÓPICAS
• Robert Hooke

Termino Célula
 Cell

• Anton van Leeuwenhoek

 LA TEORÍA CELULAR
ESTABLECIMIENTO DE LA TEORÍA CELULAR
• Matthias J. Schleider & Theodor Schwann
1. La célula es la unidad estructural de los
seres vivos.
• Rudolph Virchow
2. La célula es la unidad funcional de los seres
vivos.
3. La célula es la unidad reproductora

• Santiago Ramón y Cajal: Demostración de la teoría celular en el tejido

nervioso
 El microscopio compuesto de luz
• El desarrollo de la Teoría Celular
se basó en las observaciones de
muchos científicos. La mayoría de
estas observaciones se hicieron
usando el microscopio.
• Desde que se propuso la Teoría
Celular se ha aprendido mucho
acerca de las células: se han
descubierto los organelos celulares
, se han estudiado su función y su
estructura, gracias al uso del
microscopio.
• Los microscopios son
instrumentos ópticos que actúan
como una extensión del sentido
de la vista, que nos permite la
observación de objetos que a
simple vista no se pueden ver.
• En un microscopio compuesto,
el aumento total de observación
se obtiene multiplicando el
aumento del ocular por el
aumento del objetivo.
• El ocular generalmente es de 10
aumentos o 10X y el poder de
resolución de los objetivos
puede ser de 4X, 10X, 40X y
100X.
• El microscopio compuesto está formado por dos lentes
montadas en cada extremo de un tubo hueco
 MICROSCÓPIO ÓPTICO
Utilizan luz y permiten una ampliación de 1000 veces lo
observado y un poder de resolución de 500 veces mayor
que el ojo humano.
 Objetivos

Ocular: sostiene las lentes que aumentan la magnificación (10X)

Brazo: sostiene el cabezal
Objetivos: sostienen las lentes de magnificación (4X, 10X, 40X y
100X)
Platina: sostiene las laminillas (portaobjetos y cubreobjetos)
Macrométrico: mueve la platina hacia arriba o hacia abajo
Micrométrico: enfoca la imagen
Condensador: regula la cantidad de luz que pasa sobre la muestra
Base: sostiene el microscopio.
Observación de microorganismos

1. Fundamentos del microscopio óptico

1.1 El microscopio de campo claro
1.2 Tinción de microorganismos para su observación al
microscopio de campo claro
1.3 Microscopio de contraste de fases
1.4 Microscopio de campo oscuro
1.5 Microscopio de fluorescencia

2. Microscopio confocal de barrido con láser

3. Fundamentos del microscopio electrónico

3.1 Microscopio electrónico de transmisión
3.2 Microscopio electrónico de barrido
 Recorrido
de la luz

Aumento
Imagen
visualizada

ojo

Lente ocular

Imagen intermedia
(invertida respecto
a la muestra)

Lente objetivo

Muestra

Ninguno Condensador

Fuente de luz

Microscopio óptico
 Tinción de células para
la observación microscópica

Extensión de una fina capa

de células sobre el porta

Adición del colorante

lavado y secado

Secado al aire

Se coloca una gota de aceite

de inmersión sobre el porta y
se observa con el objetivo de
Fijación por flameado del porta
100X
 Tinción de Gram
Tinción del frotis
Previamente fijado al calor,
Paso 1 con cristal violeta
Durante 1 minuto.
Todas las células se tiñen
de color azul-violeta.

Añadir Lugol,
Paso 2 dejar actuar 2 minutos

Todas las células siguen

de color azul-violeta.
Gram +

Decolorar con alcohol

Las células Gram +
Paso 3 siguen de color azul-violeta.
Las Gram negativas
se decoloran.

Tinción de contraste
Con safranina 2 minutos.

Las células G+
se ven azul-violeta.
Paso 4 Las G- rosas o rojas.

Gram -
• El poder de magnificación de un
microscopio es importante, al igual
de su capacidad para distinguir
detalles de las muestras y el poder
de resolución.
• El microscopio de campo oscuro está
• Para poder ver los detalles de los
organelos de las células hace falta
de un poder de resolución alto.
• Cuando el objeto o muestra no
tiene color o es transparente, se
usa tintes para colorear algunas
partes de las células
• El microscopio de contraste de fases
• Algunos microscopios tienen una
lente especial de alta
magnificación llamada también
lente de inmersión de aceite. Para
el uso de esta técnica se echa una
gota de un aceite especial
directamente en el portaobjeto
sobre la muestra.
Se mueve el objetivo hasta que toque el
aceite. El aceite cambia el ángulo en
que entra la luz aumentando el poder de
resolución del objetivo.
provisto de un condensador que hace
que los rayos luminosos no penetren
directamente en el objetivo, sino que lo
iluminan oblicuamente. La muestra
aparece como puntos luminosos sobre
un fondo oscuro. Se utiliza para analizar
elementos biológicos transparentes.
posee un dispositivo capaz de realizar
una interferencia de los rayos lumínicos
que atraviesan la muestra, interpretada
por el ojo como diferencias en el
contraste. Permite estudiar células y
tejidos vivos sin necesidad de algún tipo
de tinción.
Microscopio de
Campo Claro
Alga verde
(eucariota)
Microscopio de
Fluorescencia
Bacteria filamentosa
Teñida con naranja
de acridina
Microscopio de Contraste
de Fases
Saccharomyces cerevisiae
Microscopía
Confocal por Láser
Cianobacteria
filamentosa
Microscopio láser
de barrido confocal
 Sonda filogenética Colorante fluorescente

Microscopio de fluorescencia
Tinción células con sondas filogenéticas unidas a un
colorante fluorescente
FISH aplicado a bacterias nitrificantes de aguas residuales

Rojo: bacterias oxidadoras de amonio (NH3 → NO2-)

Verde: bacterias oxidadoras de nitritos (NO2- → NO3-)
 Oxidación anaerobia de metano en sedimentos marinos

Agregados de bacterias metanogénicas (rojo)

rodeados por bacterias reductoras de sulfato (verde)

Cada tipo celular está teñido con un colorante filogenético (FISH)

diferente

Bacterias
sulfato-reductoras Bacterias metanogénicas
Micrografía Láser Confocal de una
muestra de fango de aguas residuales
 EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO

14/3/2018 David Alberto Pacheco Montoya 39

 MICROSOPIA ELECTRÓNICA
CONCEPTO Y TIPOS
Un microscopio electrónico es aquél que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para
formar imágenes de objetos diminutos.
Los microscopios electrónicos permiten alcanzar una capacidad de aumento muy superior a los
microscopios convencionales (hasta 500.000 aumentos comparados con los 1000 de los mejores
microscopios ópticos) debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de
los fotones.

Existen dos tipos principales de microscopios electrónicos:

el microscopio electrónico de transmisión y
el microscopio electrónico de barrido.
 Microscopio Electrónico

Transmisión

Barrido
 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE
TRANSMISIÓN
• Utiliza un haz de electrones y tiene una capacidad de ampliación de 250.000
veces y un poder de resolución de 10.000 veces mayor que el ojo humano.
 Microscopio electrónico de
transmisión

14/3/2018 44
David Alberto Pacheco Montoya
 Imagen obtenida con microscopio
electrónico de transmisión

14/3/2018 45
David Alberto Pacheco Montoya
 Microscopio electrónico de barrido

46
14/3/2018 David Alberto Pacheco Montoya
 Imagen obtenida con microscopio
electrónico de barrido

14/3/2018 47
David Alberto Pacheco Montoya
 Comparación de los tipos de
Microscopios

Característica MO MET MEB

Portátil sí no no

Aumento X 2 500 X 500 000 X 20 000

Tamaño mínimo
120 nm 1 nm 10 nm
observable

Fotografía B/N y color B/N B/N

Observación
sí no no
in vivo

14/3/2018 David Alberto Pacheco Montoya 48

 3. TIPOS DE ORGANIZACIÓN
CELULAR

14/3/2018 David Alberto Pacheco Montoya 49

 El microscopio electrónico
• La invención del microscopio
electrónico en la década de los
años 30, ha permitido obtener una
mayor resolución y magnificación.
• El microscopio electrónico usa en
lugar de luz, un haz de electrones
para aumentar las imágenes.
• Existen dos tipos de microscopio
electrónico: el de transmisión y el
de rastreo.
El microscopio electrónico de
transmisión (MET)
• Para utilizar un microscopio electrónico
de transmisión debe cortarse la muestra
en capas finas, no mayores de un par de
miles de ángstroms (unidad de longitud
empleada principalmente para expresar
longitudes de onda, distancias
moleculares y atómicas, etc., 10-10 m)
• Algunos electrones rebotan o son
absorbidos por la muestra, otros la
atraviesan formando una imagen
aumentada del objeto.
• Los microscopios electrónicos de
transmisión pueden aumentar un objeto
hasta un millón de veces.
 El microscopio electrónico de
rastreo (MER) o barrido (MEB)
• Los electrones que llegan a la muestra • La magnificación del MER puede ser
la rastrean o escanean formando una
de 100.000 veces o más.
imagen ampliada del objeto.

• Los objetos que se observan con el

MER o MEB tienen una apariencia
tridimensional con lo que se puede ver
en detalle su superficie.

• Para la preparación de la muestra, toda

el agua contenida en el espécimen
tendrá que ser cuidadosamente
removida.

• La deshidratación es necesaria para

evitar que el agua de la muestra
contamine el microscopio
 El microscopio electrónico de barrido

• Permite observar
estructuras en tres
dimensiones.
 Teoría celular

• Todos los organismos vivos están formados por una o más

células. (la célula como unidad estructural).
• Las reacciones químicas de un organismo vivo, tienen
lugar dentro de las células. (la célula como unidad
funcional).
• Toda célula procede de la división de otra anterior. (la
célula como unidad de origen).
• Las células contienen la información hereditaria de los
organismos de los cuales son parte y esta información
pasa de la célula progenitora a la célula hija.
 TIPOS DE ORGANIZACIÓN CELULAR
Existen seres unicelulares y seres pluricelulares
La célula es la unidad estructural, fisiológica y reproductora
de los seres vivos
UNIDAD ANATÓMICA, su actividad es consecuencia de la
actividad de sus células: UNIDAD FISIOLÓGICA y se
reproduce a través de ellas: UNIDAD REPRODUCTORA.
PROCARIOTA
1. Muy simples y primitivas.
2. Membrana plasmática con repliegues
llamados mesosomas.
3. Se caracterizan por no tener un núcleo
propiamente dicho; esto es, no tienen el
material genético envuelto en una membrana
y separado del resto del citoplasma. Situado
en el nucleoide
4. Apenas tienen estructuras en su interior solo
el citosol contiene ribosomas
 Teoría celular
• En el siglo XIX los microscopios • 1839, Theodor Shwann, zoólogo
habían mejorado mucho. alemán, amplió la hipótesis y aumentó
que los animales también están
• 1831, Robert Brown, botánico formados por células. Propuso también
escocés, descubrió en células de que los procesos de vida de los
plantas la presencia de una organismos ocurren dentro de la célula.
estructura central, actualmente
conocida como núcleo. • 1855, Rudolf Virchow, médico alemán,
evidenció que las células se reproducen
• 1838, Matthew Schleiden, botánico para dar origen a nuevas células.
alemán, propuso la hipótesis de que
todas las plantas están formadas por
células.
• Después de muchas investigaciones, incluyendo las de Schleiden,
Schwann y Virchow, se desarrolló la Teoría Celular, resumida en las
siguientes afirmaciones

 Todos los organismos están formados por una o más células.

 La célula es la unidad básica de estructura y función de los

organismos.

 Las células nuevas provienen, por reproducción celular, de células

que ya existen.
Células procarióticas
(antes del núcleo – sin núcleo)

• Son células simples que no tienen

organelos rodeados de membranas.

• Son células pequeñas con un diámetro de

1 a 10 µm

• Comprenden bacterias y cianobacterias

(bacterias fotosintéticas).

• El material genético está concentrado en

una región, pero no hay una membrana
que separe ésta región del resto de la
célula.

• Se consideran las primeras formas de vida

sobre la tierra, existen evidencia que ya
existían hace unos 3500 millones de años.
Células Eucarióticas
(núcleo verdadero)

• Son células que tienen organelos

rodeados de una membrana.

• Son células más grandes que las

procarióticas, entre 10 a 100 µm de
diámetro.

• Comprenden todos los demás seres

vivos (plantas, hongos y animales)

• Poseen el material genético envuelto

por una membrana que forma un
órgano esférico llamado núcleo.

• El registro arqueológico muestra su

presencia en rocas de
aproximadamente 1.200 a 1500
millones de años de antigüedad
 TIPOS DE ORGANIZACIÓN CELULAR
1. Células características del resto de
EUCARIOTA
1. los organismos 1.
1. Su estructura es más evolucionada y
compleja que la de los procariotas.
2. unicelulares y pluricelulares,
animales y vegetales.
3. Tienen orgánulos celulares
4. Un núcleo verdadero separado del
citoplasma por una envoltura nuclear.
5. Su ADN está asociado a proteínas
(histonas y otras) y estructurado en
numerosos cromosomas.
TIPOS DE CÉLULAS