CULTIVO DE

MICROORGANISMOS
MICROBIOLOGÍA
M. I. OSCAR E. RIVAS
 CULTIVO
MICROBIANO

UN CULTIVO ES EL
CRECIMIENTO DE
POBLACIONES
MICROBIANAS DE
FORMA CONTROLADA
EN UN MEDIO
ARTIFICIAL.
 MEDIO DE CULTIVO

DE MANERA GENERAL SE DENOMINA

“MEDIO DE CULTIVO” A CUALQUIER
MATERIAL QUE PRESENTE UNA ADECUADA
COMBINACIÓN DE NUTRIENTES PARA
PERMITIR EL CRECIMIENTO O EL INCREMENTO
DEL NÚMERO DE CÉLULAS DE UNA
POBLACIÓN MICROBIANA.
 UTILIZACIÓN

EN LOS LABORATORIOS DE MICROBIOLOGÍA

SE UTILIZA UNA GRAN VARIEDAD DE MEDIOS
DE CULTIVOS PARA MANTENER LAS CEPAS,
AISLAR O IDENTIFICAR MICROORGANISMOS
CON VARIAS FINALIDADES: DETERMINAR LA
EXISTENCIA DE CONTAMINACIÓN DE
ALIMENTOS, MEDICAMENTOS O
COSMÉTICOS; DIAGNOSTICAR ALGUNA
ENFERMEDAD, ELABORACIÓN DE VACUNAS
BACTERIANAS, ETC.
 CONSTITUYENTES BÁSICOS DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
FUENTES DE ENERGÍA
1.1 ORGÁNICAS: CARBOHIDRATOS, PROTEÍNAS,
POLISACÁRIDOS, GRASAS, ÁCIDOS
ORGÁNICOS, ETC.
1.2 INORGÁNICAS: EJ. AMONIO, NITRITOS,
AZUFRE, ETC.
1.3 LUZ.
 CONSTITUYENTES BÁSICOS DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO

COMPONENTES ESTRUCTURALES CELULARES

2.1 COMPONENTES PRINCIPALES:
• CARBONO, HIDRÓGENO, OXÍGENO, NITRÓGENO, AZUFRE, FÓSFORO,
POTASIO, MAGNESIO, CALCIO, HIERRO Y SODIO.
2.2 ELEMENTOS TRAZAS:
• COBALTO, ZINC, MOLIBDENO, COBRE Y MANGANESO.
 CONSTITUYENTES BÁSICOS DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO

COMPONENTES ESTRUCTURALES CELULARES

2.3 FACTORES DE CRECIMIENTO:
SE LLAMA ASÍ A CUALQUIER COMPUESTO ORGÁNICO QUE UN MICROORGANISMO REQUIERE
COMO PRECURSOR O CONSTITUYENTE DE SU MATERIAL ORGÁNICO CELULAR, PERO QUE NO
PUEDE SINTETIZARLO A PARTIR DE SUS FUENTES DE CARBONO MÁS SIMPLES, POR LO QUE SE LE
DEBE PROPORCIONAR COMO NUTRIENTE. EJ. AMINOÁCIDOS, PURINAS, PIRIMIDINAS Y
VITAMINAS.
CIERTAS BACTERIAS PATÓGENAS REQUIEREN SANGRE O HEME. EJ. GÉNERO HAEMOPHILUS.
• 3. AGUA
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS
 SEGÚN SU ESTADO FÍSICO

LÍQUIDOS
USUALMENTE SE DENOMINAN CALDOS YA
QUE CONTIENEN LOS NUTRIENTES
DISUELTOS EN AGUA. PERMITEN OBTENER
SUSPENSIONES CON UN ELEVADO NÚMERO
DE MICROORGANISMOS. EJ. CALDO
NUTRITIVO.
 SEGÚN SU ESTADO FÍSICO
SÓLIDOS
SE PUEDEN PREPARAR A PARTIR DE MEDIOS LÍQUIDOS A
LOS CUALES SE LES AÑADEN AGENTES SOLIDIFICANTES
COMO AGAR, GELATINA O SÍLICA GEL. SE UTILIZAN CON
FRECUENCIA EN EL AISLAMIENTO Y MANTENIMIENTO DE
LOS MICROORGANISMOS EN EL LABORATORIO. EJ.
AGAR NUTRITIVO.
AGAR: ES UN ALGA QUE SE CARACTERIZA POR SER
INERTE FRENTE A LOS MICROORGANISMOS Y PORQUE
ES LÍQUIDO A LA TEMPERATURA DE EBULLICIÓN Y
SOLIDIFICA ENTRE LOS 45-50ºC.
 SEGÚN SU ESTADO FÍSICO

SEMISÓLIDOS
CONTIENEN AGAR (<5-10%). SE
UTILIZAN CUANDO QUEREMOS
OBSERVAR MOVILIDAD BACTERIANA.
SE HACE EN TUBO Y SE UTILIZA LA
SIEMBRA EN PICADURA CON ASA
RECTA.
 SEGÚN LA NATURALEZA DE SUS
CONSTITUYENTES
MEDIOS NATURALES O COMPLEJOS
ESTÁN CONSTITUIDOS POR SUSTANCIAS COMPLEJAS
DE ORIGEN ANIMAL O VEGETAL Y USUALMENTE SE
COMPLEMENTAN CON EL AÑADIDO DE MINERALES Y
OTRAS SUSTANCIAS. NO SE CONOCEN TODOS LOS
COMPONENTES DEL MEDIO DE CULTIVO, NI LAS
CANTIDADES EXACTAS EN QUE ESTÁN PRESENTES. EJ.
EXTRACTO DE CARNE, EXTRACTO DE LEVADURAS.
 SEGÚN LA NATURALEZA DE SUS CONSTITUYENTES

MEDIOS SINTÉTICOS O QUÍMICAMENTE

DEFINIDOS
SE PREPARAN A PARTIR DE INGREDIENTES
QUÍMICAMENTE PUROS Y POR LO TANTO SE
PUEDE CONOCER EXACTAMENTE SU
COMPOSICIÓN CUALI Y CUANTITATIVA. POR
SU COSTO SÓLO SE EMPLEAN EN
PROCEDIMIENTOS ESPECIALES.
 SEGÚN SUS PROPÓSITOS DE USO
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
SE LLAMA ENRIQUECIMIENTO A CUALQUIER CULTIVO EN MEDIO LÍQUIDO QUE RESULTE EN UN
INCREMENTO EN EL NÚMERO DE UN TIPO DADO DE MICROORGANISMO EN RELACIÓN CON EL
NÚMERO DE OTROS TIPOS DE MICROORGANISMOS QUE PUEDAN ESTAR EN EL INÓCULO. UN MEDIO
DE ENRIQUECIMIENTO PUEDE CONTENER SUSTANCIAS QUE FAVOREZCAN EL CRECIMIENTO DEL
MICROORGANISMO QUE NOS INTERESA O QUE INHIBAN EL CRECIMIENTO DE LOS OTROS TIPOS DE
MICROORGANISMOS PRESENTES. LA SELECTIVIDAD DE UN CULTIVO DE ENRIQUECIMIENTO NO ESTÁ
DETERMINADA ÚNICAMENTE POR LA COMPOSICIÓN QUÍMICA DEL MEDIO USADO, SINO QUE EN UN
MEDIO DADO PUEDE SER VARIADA SIGNIFICATIVAMENTE MODIFICANDO OTROS FACTORES TALES
COMO: TEMPERATURA, PH, FUERZA IÓNICA, ILUMINACIÓN, AIREACIÓN ETC.
EJ. CALDO TETRATIONATO UTILIZADO PARA EL ENRIQUECIMIENTO DE LAS ESPECIES DEL GÉNERO
SALMONELLA PROVENIENTES DE MUESTRAS DE HECES, ORINA, AGUA O ALIMENTOS.
 SEGÚN SUS PROPÓSITOS DE
USO
MEDIOS SELECTIVOS
SON BÁSICAMENTE IGUALES A LOS DE
ENRIQUECIMIENTO, SE DIFERENCIAN POR SER
MEDIOS SÓLIDOS Y ESTÁN DISEÑADOS PARA EL
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
ESPECÍFICOS.
EJ. AGAR DESOXICOLATO CITRATO UTILIZADO
PARA EL AISLAMIENTO DE PATÓGENOS
ENTÉRICOS.
SEGÚN SUS PROPÓSITOS DE USO
MEDIOS DIFERENCIALES
NO CONTIENEN SUSTANCIAS INHIBIDORAS, ES DECIR,
PERMITEN EL CRECIMIENTO DE MUCHOS TIPOS DE
MICROORGANISMOS, PERO SI CONTIENEN
INDICADORES DE PRODUCTOS DERIVADOS DE LA
ACTIVIDAD METABÓLICA DE LOS MICROORGANISMOS
SOBRE ALGUNOS DE LOS COMPONENTES DEL MEDIO.
SE UTILIZAN PARA LA IDENTIFICACIÓN DE LOS
MICROORGANISMOS.
EJ.: AGAR BASE ROJO FENOL UTILIZADO PARA
DETECTAR FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS.
 SEGÚN SUS PROPÓSITOS DE USO
MEDIOS SELECTIVOS DIFERENCIALES
A VECES SE COMBINAN EN UN MISMO MEDIO LAS
CARACTERÍSTICAS DE SER SELECTIVO Y DIFERENCIAL.
EJ.: EL AGAR MACCONKEY CONTIENE SALES BILIARES Y
CRISTAL VIOLETA, QUE INHIBEN EL CRECIMIENTO DE LAS
BACTERIAS GRAM POSITIVAS. PERO COMO TAMBIÉN
CONTIENE LACTOSA Y UN INDICADOR DE PH PERMITE
DISTINGUIR ENTRE LAS BACTERIAS FERMENTADORAS DE
LACTOSA Y LAS QUE NO LO SON.
 CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO
LA MAYORÍA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SE ENCUENTRAN DESHIDRATADOS Y ÉSTOS SE DEBEN
CONSERVAR DE LA SIGUIENTE FORMA:
• FRESCOS, SECOS, SIN LUZ SOLAR Y ALGUNOS EN NEVERA (EJ. SALMONELLA).
• APERTURAS Y CIERRES LOS MENOS POSIBLES PARA QUE LOS PRODUCTOS NO CAPTEN
HUMEDAD.
CUANDO LOS MEDIOS SON PREPARADOS TANTO POR EMPRESAS COMO POR EL PROPIO
LABORATORIO, SE DEBEN ALMACENAR TENIENDO EN CUENTA:
• LA TEMPERATURA HA DE ESTAR ENTRE 2-8ºC. SE CONSERVARÁN ENTORNO A 4-6 SEMANAS.
• SI ES NECESARIO REFUNDIR, SE HARÁ AL BAÑO MARÍA O EN AUTOCLAVE 5 MIN.
 PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO

PUESTO QUE LA MAYORÍA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO SE ENCUENTRAN

DESHIDRATADOS, PARA SU PREPARACIÓN SERÁ NECESARIA LA ADICIÓN DE
AGUA DESTILADA O DESMINERALIZADA CON UN PH PRÓXIMO A 7. PARA
PREPARAR EL MEDIO DE CULTIVO SE UTILIZA UN ERLENMEYER LIMPIO Y
ENJUAGADO CON AGUA DESTILADA O DESMINERALIZADA. EL VOLUMEN DEL
ERLENMEYER DEBERÁ SER EL DOBLE DEL VOLUMEN DE MEDIO DE CULTIVO QUE
QUERAMOS PREPARAR.
PASOS A
REALIZAR

1. DEPENDIENDO DEL VOLUMEN

DE MEDIO DE CULTIVO QUE
VAYAMOS A PREPARAR, PESAR
EN UN VIDRIO DE RELOJ LA
CANTIDAD NECESARIA DEL
MEDIO DE CULTIVO
DESHIDRATADO
PASOS A
REALIZAR

2. MEDIR EN UNA
PROBETA LA CANTIDAD
DE AGUA DESTILADA
NECESARIA.
 PASOS A REALIZAR

3. AÑADIR PARTE DEL AGUA A UN ERLENMEYER

ADECUADO AL VOLUMEN QUE VAMOS A
PREPARAR.
4. AÑADIR AL ERLENMEYER EL MEDIO DE CULTIVO.
5. AGITAR HASTA LA DISOLUCIÓN PARCIAL Y
CALENTAR UN POCO.
 PASOS A REALIZAR

6. AÑADIR EL RESTO DEL AGUA QUE NOS

SERVIRÁ PARA LIMPIAR LA SUPERFICIE DEL
OBJETO UTILIZADO PARA PESAR.
7. COLOCAMOS EL ERLENMEYER SOBRE EL
MECHERO, APOYADO EN UNA REJILLA QUE
PERMITA LA DIFUSIÓN DEL CALOR Y
CALENTAMOS DURANTE UN TIEMPO QUE
VENDRÁ DETERMINADO EN EL PROSPECTO
DEL PRODUCTO.
PASOS A
REALIZAR

8. POR ÚLTIMO
DEBE PASAR POR
EL PROCESO DE
ESTERILIZACIÓN.
 ESTERILIZACIÓN

TODOS LOS MEDIOS DE CULTIVO SE PREPARAN EN ERLENMEYER, INDEPENDIENTEMENTE DE SI ES

SÓLIDO O LÍQUIDO. LO QUE DIFERENCIA SU PREPARACIÓN ES LA FORMA DE ESTERILIZAR:
MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS EN PLACA: SE PREPARAN Y ESTERILIZAN EN EL ERLENMEYER. PARA
LA ESTERILIZACIÓN SE COLOCA UN TAPÓN DE ALGODÓN ENVUELTO EN UNA GASA, TAPADO
CON PAPEL Y SELLADO CON UNA CINTA ADHESIVA.
MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS O LÍQUIDOS EN TUBO: SE PREPARAN EN EL ERLENMEYER Y SE
ESTERILIZA EN EL TUBO. LOS TUBOS SE LLENAN CON UN VOLUMEN QUE OSCILA ENTRE LOS 5-10
ML (UTILIZAMOS UNA PIPETA), SE TAPAN CON UN TAPÓN METÁLICO Y CUBIERTOS CON PAPEL Y
CINTA ADHESIVA. SE ESTERILIZAN COLOCADOS EN UNA GRADILLA, AUNQUE PARA AUMENTAR LA
SUPERFICIE SE SUELEN COLOCAR DE FORMA INCLINADA.