TEORICO 1: microcopia y técnicas histológicas

MICROSCOPIO OPTICO DE CAMPO CLARO

Sistema mecánico: compuesto por una base donde está
la lampara y un estativo
Sistema óptico: compuesto por varios sistemas de lentes
Los rayos que salen de la lampara atraviesan las lentes
condensadoras que llegan hacia la plataforma platina
donde esta ubicada la muestra. Por encima de este
preparado están los lentes objetivos. Los rayos de luz
siguen hasta un prisma que refleja el cual se dirige hacia
las lentes oculares.
Las lentes objetivo tienen distintos aumentos y las lentes
oculares hasta 10x y 15x.

Unidades

Límite de resolución (d)

Distancia mínima que debe existir entre dos puntos del objeto para que se visualicen separados. Depende
de la longitud de onda de la luz utilizada y de la
apertura numérica propia de cada microscopio.
MICROSCOPIO OPTICO DE CAMPO OSCURO: Disco
opaco permite que SOLO los rayos periféricos de luz
atraviesen la lente condensadora y la muestra;
haciendo que muestren la superficie de la muestra
sobre un campo oscuro. Útil para observar muestras
sin técnica histológica, tejidos vivos, treponema
pallidum, partículas de radioautografia o cristales en
muestras de orina.

Microscopio de contraste de fase

Suifren un pequeño retardo de fase cuando pasan las ondas lumínicas por regiones de la célula o tejido
que presentan distintas densidades creando así diferencias de fase. La zona en que es mas gruesa la
muestra se vera mas oscura y la zona donde es menos densa se vera mas clara. La diferencia con un MO
de campo claro es que se utilizan anillos ópticos algunos ubicados entre la lente condensadora y la luz que
incide mientas que otros entre la lente objetiva y la imagen que observamos.

Microscopio de interferencia
Similar al de contraste de fase pero tiene la ventaja de que permite la cuantificacion de la masa de los
tejidos.
Las diferencias de fase de la luz permite ver el contaste de las estructuras con respecto al lugar en el que
están.
Microscopio de luz UV
Tiene lente especial de cuarzo, emite luz UV. La longitud de onda es menor que la de la luz visible con lo
cua se logra mayor poder resolutivo y menor limite de resolución.
La luz uv tiene la capacidad de ser absorbida por algunas moléculas especialmente por los ácidos
nucleicos, dentro de estos las bases nitrogenadas, purinas y pririmidinas y algunos aminoácidos.
Lo que emite se registra en una palca fotográfica ya que la luz uv no puede ser detectada por el ojo
humano y es dañina.

Microscopio de luz polarizada

Se puede obtener en un MOCC poniendo un filtro polarizador entre la luz que incide y la lente
condensadora yel filtro analizador entre la lente obetivo y el observador.
Algunas estructuras por su capacidad cristalina producen birrefringencia porque rotan el plano de la luz
polarizada. Ej: musculo estriado bandas isotrópicasI (claras no tienen birrefringencia ) o anisotrópicas A
(oscuras tienen birref)
Permite observar células vivas.

Microscopio de fluorescencia
Vit A y algunos nt emiten fluorescencia. Lampara de mercurio emite luz uv. Entre espejo dicroico y lente
objetivo hay filtro de emisión. Lente objetivo especial.
Microscopio confocal
Tipo especial de mo de fluorescencia. Calidad de imagen superior porque foco se realiza en un único plano
focal y se eliminan las demás informaciones. Tiene 2 tipos de lentes: lente fototubo y la lente objetivo por
debajo. Fuente luminosa es laser. Permite ver muestas biológicas en 3 dimensiones. E rayo laser ilumina o
escanear la superficie del preparado de manera que os fluorocromos excitados emiten su luz y esta luz
pasa por el orificio confocal que es recogica por un detector electrónico con una cámara concectada a una
pc. El orificio confocal permite pasar la luz proveniente de un único plano focal impiiendo que aparezcan
rayos de otros planos que hacne que a imagen quede desenfocada. Pueden buscar imágenes a partir de
distintosniveles de la muestra como una disección de la muestra y luego un programa de reconstrucción
3D se obtiene la imangen.

MICROSCOPIO ELECTRONICO de transmisión

No utiliza luz visible, su lambda es un haz de electrones captado por el ánodo. Resolución mil veces mayor
a la del MO.
Se calienta un filamento de tungsteno y se emite un haz de electornes captado por el ánodo. Lents son
bobinas electromagnéticas La mas cercana al ánodo es condensadora que aumenta y focaliza el haz en un
punto, ese haz atraviesa la muestra y luego llega a la 2da lente la objetiva. Emite haz electrónico y llega a
una tercera lente proyectora que pasa la figura a la pantalla de una pc o film fotográfico. No hay colores.
Se puede observar la ULTRAESTRUCTURA celular. Imagen bidimensional
Microscopio electrónico de barrido
Haz no atraviesa la muestra sino que barre la superficie de la misma. Ventaja: imagen obtenida es 3D.
Resolución menor al anterior (2,5 nm)

Microscopio de fuerza atómica

No óptico. Tiene un detector. Tiene una sonda puntiaguda que esta unida a un cantiléver, detecta a nivel
atómico la superficie de un preparado. Se puede utilizar para estudiar tejidos vivos. Cantilever tiene un rayo
laser que llega hasya el y luego hasa un diodo donde hay un foto detector con lo cual barriendo la
superficie de la muestrapuede estudiar a nivel atómico y molecular.

MICROSCOPIA VIRTUAL
Sistema digital que permite reemplazar la observación directa de un preparado histologico mediante un
MO. Se digitalizan las muestras mediante un escaner de muestras.
Permite el análisis de imágenes: mediciones. Por ejemplo: glomeruos se pueden medir en cantidad,
tamaño, etc.

TECNICAS HISTOLÓGICAS
Si bien las células y tejidos se pueden observar vivos, no se puede distinguir distintas estructuras a menos
que se realice una técnica histológica. Por ende, la observación de células pede ser:
- Directa vivas
- Muertos
- Componentes subcelulares  técnicas sofisticadas y microscopios electrónicos, entre otros.
Esto es necesario para comprender la microanatomia de cel, tejidos y órganos y correalacionar la estructura
con la función de la misma.

Métodos de observación directa de cel y tejidos vivos

- Cultivos celulares: se aíslan células y se las hace crecer por fuera del organismo, en un ambiente con
nutrientes y elementos necesarios para su desarrollo
- Tinciones vitales: se introduce un colorante en un animal vivo.
- Tinciones supravitales: cel o tejidos vivos por fuera del animal.

¿Cómo se realiza el estudio de tejidos muertos para microscopia óptica?  técnica histológica
1. Fijación: detiene los procesos celulares, impedir la desagracion enzimática, destruir microorganismos
y mantiene la estructura como cuando estaba vivo. Formalina (sc acuosa de formol 37%)
2. Deshdiratación: concentraciones crecientes de etanol, va desplazando el agua hasta llegar a alcohol
100%
3. Aclaración: xileno, xilol, tolueno. Desplaza el alcohol.
4. Inclusión: parafina soluble en xileno  seca  taco
5. Corte: microtomo o criostato . cortes de 5 a 15 micrones
6. Aclaración: xileno quita parafina
7. Hidratación: cc decrecientes de etanol
8. Coloración hye
9. Deshidratación: cc crecientes de etanol
 10. Montaje: cubreobjetos

Métodos histoquimicos

Métodos para SN

Sustancia de Nissl: REG de neuronas, nucleolos

Tejido sumergido en sal de plata y luego un

compuesto reduce a plata cero formando un
precipitado sobre los neurofilamentos. Observar
axones y dendritas
Metacromasia: colorante interactúa con alguna sustancia que esta en el tejido o célula y cambia su color.
Colorantes básicos monomericos como azul de toluidina polimerizan y cambian color de origen a rojo
porque interactúan con cargas polianionicas.

Reactivo de Schiff: leucofucsina incolora que forma un producto estable de color rojo con los aldehídos. Se
puede utilizar en PAS para hdc (convierte los OH en aldehídos, luego reactivo de Schiff se une a aldehídos)
y Feulgen para ADN interfase, cromosomas,

Métodos para lípidos (hye no porque con la técnica se van)

- Fijación con formalina
- Corte por congelación
- Sudan en alcohol diluido
- Inclusion en medio acuoso

Método para enzimas

- Especifidad de sustrato reactivo de captura : colorante o metales pesados
- Corte por congelación de tejido no fijado
- Producto de reacción visible que señala la localización de la enzima porque precipita y genera color
visible

Métodos inmunohistoquímicos

Inmunofluorescencia directa e indirecta

Hibridacion in situ
Radioautografia

Procesamiento de muestras para ME

1. Fijación con glutaraldehído + OsO4
2. Deshidratación con concentraciones crecientes de etanol
3. Aclaración con oxido de propileno
4. Inclusión con resina epoxi
5. Corte por ultramicrotomo
TEORICO 2

TEJIDOS
Conjunto organizado de células que tienen una función especifica
Si bien la célula es la unidad básica funcional del organismo, los tejidos son los encargados del
mantenimiento de las funciones corporales.
Cuatri tipos básicos de tejidos  forman órganos
- Tejido epitelial
- Tejido conjuntivo
- Tejido muscular
- Tejido nervioso

TEJIDO EPITELIAL
- Cubren las superficies libres del cuerpo como la piel o tapiza cavidades del organismo
- Células dispuestas de forma continua sobre una membrana basal y entre ellas hay escasa MEC
- Avascular  requiere de un tejido conecctivo que lo nutra, a través de la membrana basal, ya que
presenta vasos
- Uniones intercelulares  barrera para cubrir superficies ejemplo la piel
- Reviste cavidades y conductos int y ext
- Forma glándulas
- Posee células especializadas: función de receptores sensoriales

Clasificación de epitelios
 - Según función

- Según morfología

- Segn la cantidad de estratos celulares

Zona apical hacia luz

Zona basal
Características de las células epiteliales
Zónula adheres y macula adherens
(desmosoma)
Lamina basal: sitio de adhesión entre las células y tc. Capa definida de material electrodenso entre el te y tc
subyascente compuesta x filamentos finos, laminina, proteoglucanos, glicoprot, colageno 4. Entre lb y célula
hay un espacio electrolucido llamado lamina lucida que contiene las porciones ec de las moléculas de
asociación celular ppalment emiembros de las integrinas.