UANL

UNIVERSIDAD
AUTÓ NOM A DE
NUEVO LEÓN

Laboratorio Patobiología,
Sección de Biología Celular
Departamento de Patología, Facultad de Medicina, UANL.
QCB Claudia Irene Sánchez Santillán
 SISTEMAS OPTICOS ESPECIALES

Campo Oscuro

Contraste de Fases

Fluorescencia

Estereoscopio
Fibroblasto en cultivo celular,
observado con:

a) M. Campo claro

b) Contraste de Fases

c) Contraste diferencial
interferencial
 SISTEMAS OPTICOS ESPECIALES

Campo Oscuro

Contraste de Fases

Fluorescencia

Estereoscopio
 MICROSCOPIA DE CAMPO OSCURO
Fundamento:
-Consiste en bloquear los rayos centrales del haz de luz y dirigir de
manera oblicua los rayos periféricos hacia el portaobjetos con la
muestra.

- El condensador tiene una parte opaca en el centro

-Sólo los rayos que chocan con la muestra son

desviados hacia arriba y captados por la lente objetivo
Tipos de condensadores de campo oscuro:
MICROSCOPIA DE CAMPO OSCURO
Características:
 El objeto aparece brillante en un campo
oscuro
 Células y partículas muy pequeñas sin
tinción
 Se distinguen bordes y contornos brillantes
 Se puede apreciar el movimiento
browniano de las partículas
Desventajas:
Inadecuada preparación de la muestra
Alto costo del microscopio
No se pueden observar estructuras celulares
internas

Utilidad:
Microbiología (Treponema pallidum)
Autoradiografías
Cristales en orina
 Imagen obsevada en un Microscopio de Campo Oscuro (b)

a b
 SISTEMAS OPTICOS ESPECIALES

Campo Oscuro

Contraste de Fases

Fluorescencia

Estereoscopio
 MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASES

FUNDAMENTO:
Convierte las diferencias en los índices de
refracción de los componentes celulares
en diferencias de intensidad (de acuerdo
con su composición química)

COMPOSICION:
 Condensador de Contraste de Fases.
Contiene una lente opaca con una
ranura circular (Diafragma anular) que
permite el paso de un cono de luz que
ilumina el campo microscópico.

 Objetivo
con un anillo claro a nivel del plano focal
posterior llamado Placa de Fase.
 MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASES
Cuando el cono de luz atraviesa un espécimen biológico transparente,
cambia su velocidad retardándose un cuarto de longitud de onda en
relación a la luz que no lo atraviesa. Posteriormente, los rayos directos son
adelantados ¼ de longitud de onda al atravesar la placa de fase.

Se observan contrastes claros y oscuros.

Campo Claro

Contraste de fases
 Tipos de diafragma anular en el
condensador Objetivos que contienen el anillo de fase

UTILIDAD:
Observar células o tejidos no teñidos (vivos), componentes intracelulares,
motilidad intracitoplásmica (mitocondrias, cromosomas, vacuolas), cilios y
flagelos.
 SISTEMAS OPTICOS ESPECIALES

Campo Oscuro

Contraste de Fases

Fluorescencia

Estereoscopio
 MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

FUNDAMENTO:
Es la capacidad de ciertas substancias (fluorocromos) de excitarse con
radiación de longitud de onda corta (luz ultravioleta), y emitir radiación de
mayor longitud de onda (luz visible)

ARREGLO DEL MICROSCOPIO:

Fuente de luz (Radiación UV)
Filtros de excitación y de barrera

CARACTERISTICAS:
El objeto a estudiar se observa coloreado (de acuerdo al tipo de fluorocromo)
en un campo oscuro (no marcado)
Tipos de Microscopio de Fluorescencia
Longitudes de onda de excitación y de emisión Aplicación:
de algunos marcadores fluorescentes • Diagnóstico e investigación
bacteriología, virología,
Fluoróforo Excitación Emisión parasitología…
(nm) (nm) • Distribución intracelular de
Fluoresceína 500 520 moléculas
Indo-1 350 405/480
Naranja de acridina 490 530/640 Desventajas:
Calceína 495 520 • Costo de reactivo y equipo
Rodamina 500 540 • Personal especializado
Verde de Calcio 506 526 • Los resultados no son
Azul de Evans 550 625 100% específicos
MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA
Tinción fluorescente del citoesqueleto (verde), vesículas sinaptonémicas (rojo)
y núcleo (azul)
 SISTEMAS OPTICOS ESPECIALES

Campo Oscuro

Contraste de Fases

Fluorescencia

Estereoscopio
 MICROSCOPIO ESTEREOSCOPICO
• Se le conoce como una Lupa

• Microscopio cuya utilidad es observar a detalle estructuras

macroscópicas o que no deben ser destruidas

• Ofrece una visión tridimensional

• Tiene una o dos platinas  por lo general una opaca y una

transparente

• La luz capada por el objetivo es reflejada o transmitida

• Aumentos de lentes objetivos: 0.6, 1.2, 2.5, 4 y 5 X

• Lente Ocular: 8, 10, 15 o 20X

APLICACIÓN:
Embriología, Microdisección, oftalmología, neurocirugía,
odontología, microbiología…
MICROSCOPIO ESTEREOSCOPICO