Universidad Nacional de San Agustín

Facultad de Medicina
Departamento de Morfología Humana

Técnicas especiales

Mg. Cinthya Jeymi Lovon Luque

 TÉCNICAS ESPECIALES PARA OBSERVAR CÉLULAS VIVAS O
ESTUDIAR LAS FUNCIONES DE SUS COMPONENTES

▰ EXTERIORIZACIÓN Y TRANSILUMINACIÓN: Consiste en anestesiar

el animal para sacar al exterior sus órganos como el intestino
delgado. Para estudiar la circulación de sangre en el mesenterio y el
proceso de ovulación en el ovario exteriorizado
 TÉCNICAS ESPECIALES: CÁMARAS
TRANSPARENTES
▰ Utilizan cámaras transparentes para
estudiar diferentes fenómenos
biológicos y patológicos, como la
circulación de la sangre, el
crecimiento vascular tumoral. etc.
▰ FIGURA 7 (A) se representa un
conejo con una cámara transparente
de CLARK y CLARK en la oreja.
▰ Figura 7 (B), tenemos una rata con
otro tipo de cámara, la de ALGIRE y
LEGALLAIS.
https://www.jove.com/t/51900?language=Spanish
 TÉCNICAS ESPECIALES: CÁMARAS
TRANSPARENTES
▰ A) Fotografía de una rata en cuya
cámara anterior de su ojo derecho se
ha implantado un embrión

▰ B) Ojo de otra rata en la que se ha

transplantado un ovario en la cámara
anterior del ojo
 TÉCNICAS ESPECIALES: CULTIVO
CELULAR

▰ Para el estudio de procesos

vitales de crecimiento,
Respuesta a fármacos y
hormonas
▰ Ventaja de la técnica de
cultivo celular, es el control
de las condiciones
fisicoquímicas y fisiológicas
 TÉCNICAS ESPECIALES:
MICROMANIPULACIÓN
▰ Reducen la amplitud de los
movimientos permitiendo
el desplazamiento de
microagujas, micropipetas
y microelectrodos en el
campo microscópico
(microdisección,
microcirugía )
 TÉCNICAS ESPECIALES: Para aislar
estructuras celulares

▰ CENTRIFUGACIÓN
Separación de una muestra a
través de la rotación de un
objeto en un eje central los que
genera una fuerza centrífuga.
Se requiere de ultracentríguga
con refrigeración
TÉCNICAS ESPECIALES:
CENTRIFUGACIÓN

Gradiente de Gradiente de
densidad con DENSIDAD con
sacarosa (MASA) cloruro de Cesio
ZONAL
 CITOQUÍMICA E HISTOQUÍMICA

Conjunto de técnicas que

tienen por finalidad mostrar in
situ en células y tejidos la
ubicación de componentes
químicos
Métodos químicos
Métodos físicos
Métodos Químicos Métodos Físicos

Carbohidratos Microespectrofotometría
Proteínas Historradiografía
Enzimas Autorradiografía o radioautografía

Ácidos Nucleicos Microincineración

Inmunohistoquimica -
Minerales Inmunofluorecencia

Difracción de rayos X
 MÉTODOS QUÍMICOS

Para reconocimiento de
CARBOHIDRATOS
Utiliza método PAS, ácido
peryódico (oxidante) y reactivo
de Schiff (derivado incoloro de la
fucsina básica) que se torna color
púrpura o magenta en contacto con
los grupos aldehídos.
 MÉTODOS QUÍMICOS

Corte por congelación

Coloración Sudán negro, Sudan III

Los lípidos son solubles en alcohol y xilol, por

ello se utiliza material congelado.
Para montaje, se usan medios de montaje
hidrosolubles, como el glicerol/PBS (1:1).
Los cortes que se obtienen con el CRIOSTATO
se pueden utilizar en el diagnostico de
material patológico, tomado en
intervenciones quirúrgicas y el resultado se
obtiene en el transcurso de la operación.
 MÉTODOS QUÍMICOS

Para colorear PROTEÍNAS

• Reacciones generales: Colorean globalmente a las

proteínas en un tejido
• Reacciones de grupo: Identifican un corto número
de grupos reactivos específicos
• Reacciones especificas: Para grupos químicos
particulares propios de determinados aminoácidos.
Como por ejemplo el grupo fenol
▰ Para demostración genérica de proteínas es:
Ninhidrina más reactivo de Schiff.
▰ Resultado: Grupos amino (NH2) de color rojo púrpura
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Métodos químicos: ENZIMAS

Son compuestos complejos, que

al destruirse rápidamente en los
tejidos separados del
organismo, deben fijarse
inmediatamente a temperaturas
inferiores a 0ºC y los cortes se
realizan en un criostato, que es
una especie de micrótomo
metido dentro de una
congeladora.
MÉTODOS QUÍMICOS: ENZIMAS
 MÉTODOS QUÍMICOS

Para reconocimiento de ÁCIDOS

NUCLEICOS
REACCIÓN DE FEULGEN
▰ Demuestra la presencia de DNA ljb
▰ Hidrólisis con ácido clorhídrico que
desprende las purinas de la
desoxirribosa quedando un grupo
aldehído libre que se colorea con el
reactivo de Schiff- PAS
▰ El ADN se tiñe de color púrpura
mientras el ARN no lo hace
 MÉTODOS QUÍMICOS: MINERALES

El HCl libera iones férricos

asociados a proteínas y estos
reaccionan con el ferrocianuro
potásico formando un precipitado
azul verdoso (azul de Prusia)

Se observa el hierro de color

turqueza
 MÉTODOS QUÍMICOS: MINERALES

▰ El tejido es tratado con

nitrato de plata, ésta
reemplaza al calcio y
luego es reducida por
exposición a luz intensa lo
que genera una coloración
negra
 Métodos Físicos: Microespectrofotometría

Fotómetro adaptado al microscopio

que mide la luz absorbida por una
determinada sustancia coloreada
(en el caso del microscopio de
campo claro) o sin colorear (en el
caso del microscopio de luz
ultravioleta) se puede determinar la
cantidad de dicha sustancia.
 Métodos físicos: HISTORRADIOGRAFÍA

-Se utilizan rayos X blandos

(de la mayor longitud de
onda) los que, al atravesar
un corte histológico, son
absorbidos por algunas
sustancias minerales.
-Uso en cortes de hueso
-Historradiograma
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Métodos físicos: AUTORRADIOGRAFÍA

▰ Se emplea isótopos radioactivos (tritio y

carbono 14) como marcadores de
moléculas (glucosa, aminoácidos, bases
nitrogenadas) de las células
▰ Se ubica los sitios de la molécula
marcada mediante radiaciones beta
emitidas por el isótopo.
▰ Las radiaciones impresionan la película
fotográfica colocada en el corte
histológico, se revela y se ubican los
isótopos radioactivo al MO o en ME
▰ Estudio de funciones de organoides
 Métodos físicos: Microincineración

▰ Distribución de sustancias minerales en los

tejidos, sometidos a altas temperaturas: 225°C,
para quemar sustancias orgánicas
▰ Lámina observada con el microscopio de campo
oscuro o de luz polarizada
▰ ESPODOGRAMA: Imagen de distribución de
sustancias minerales en los tejidos incinerados
▰ Ha resultado útil en el diagnóstico de silicosis
 Métodos físicos: Inmunohistoquímica-Inmunofluorescencia

▰ Uso de anticuerpos para

la detección de antígenos
presentes en las células o
en los tejidos
▰ La combinación de los
anticuerpos con enzimas
o con sustancias
fluorescentes se
denomina conjugación
 Métodos físicos: Inmunofluorescencia
▰ Para visualizar la reacción Ag-Ac, los Ac son conjugados a moléculas
fluorescentes o fluorocromos (tienen la propiedad de absorber radiación
luminosa de una longitud de onda determinada y después emitir radiación
luminosa de mayor longitud de onda)
▰ Existen muchos tipos de fluorocromos y cada uno de ellos posee un espectro de
absorción y emisión de luz muy definido y característico
▰ Se utiliza M. de fluorescencia.
 Métodos físicos: DIFRACCIÓN DE RAYOS X

 Se utilizan los rayos X que, al atravesar las mallas moleculares, se

difractan y proyectan un espectro de puntos y rayas. Este espectro, al
ser sometido al análisis matemático, revela la orientación de las
moléculas y la disposición de sus átomos dentro de ellas.
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https://sstti.ua.es/es/instrumentacion-cientifica/unidad-
de-rayos-x/difraccion-de-rayos-x.html
 CITOGENÉTICA

▰ Fish (hibridación in situ con

fluorescencia). Requiere tener sonda
adecuada, variante es el llamado pintado
cromosómico (painting) que permite
resaltar un cromosoma concreto,
incluyendo los fragmentos del mismo
que se hayan translocado a otras
posiciones.
▰ Otras técnicas:
-SKY (cariotipo multicolor multifish)
-CGH (Hibridación genómica comparada)
FUNDAMENTO DE LA PRUEBA FISH (Fluorescent in situ
hibridization)