Índice

Índice ................................................................................................................................................. 2
Introducción..................................................................................................................................... 3
Objetivos........................................................................................................................................... 3
Materiales y Métodos .................................................................................................................... 3
Resultados ....................................................................................................................................... 4
Discusión.......................................................................................................................................... 7
Cuestionario .................................................................................................................................... 8
Conclusión ....................................................................................................................................... 9
Bibliografía ....................................................................................................................................... 9

Índice de tablas y figuras

Tabla I. Etiquetado de tubos y preparación de soluciones ......... ¡Error! Marcador no definido.
Tabla II.Determinación del punto Isoeléctrico de la albumina por adición de un ácido.
.............................................................................................................. ¡Error! Marcador no definido.
Figura 1. Solubilidad de la proteina en la experimentación ....... ¡Error! Marcador no definido.
Introducción
Punto isoeléctrico
La carga neta de las proteínas depende del pH. En el punto de neutralidad (punto
isoeléctrico, pI) las cargas acidas y básicas de las cadenas laterales de la proteína
están en equilibrio: la proteína ya no se desplaza a un campo eléctrico.
La carga total de la molécula proteica depende pues, del pH de la solución y del
número relativo de cada aminoácido en la molécula. Así, cuando el pH de la solución
es tal que la carga neta de la molécula proteica es cero, es decir, cuando el número
total de cargas negativas iguala al número total de cargas positivas presentes en la
molécula, se llama a este valor de pH, punto isoeléctrico o pH isoeléctrico (Koolman
& Röhm, 2004; Peña, et al., 2004).

Objetivos
Al término de la práctica, el alumno será capaz de describir el efecto de los solventes
sobre las propiedades electroquímicas de las proteínas de diferente PM de acuerdo
con las siguientes variables.
a) Propiedades electroquímicas de las proteínas.
b) Efecto del ácido acético sobre el punto isoeléctrico de una proteína.

Materiales y Métodos
Materiales
• 10 tubos de ensayo
• 1 gradilla
• 1 piseta
• 3 pipetas de 10 ml
• 1 pipeta de 5 ml
• 2 pipetas de 1 ml
• 3 propipetas verdes
• 2 propipetas azules
• Platina
• Proteínas al 0.5%
• Ac. Acético 0.01N
• Ac. Acético 0.1
• Ac. Acético 1.0N
• Albuminato de Sodio 0.1N

Métodos
Experimento No. 1
Determinación del punto Isoeléctrico de la Albúmina por adición de un ácido.
Fundamento Químico:
Con la adición de un ácido o una base a una solución protéica se alcanza un estado
en que hay el mismo número de aniones que de cationes. Este efecto, neutraliza la
carga de la proteína y tiende a precipitar. El pH que determina el número igual de
cargas de signos opuestos se denomina punto isoeléctrico.
Preparar una serie de tubos como se indica a continuación:
Tabla I. Etiquetado de tubos y preparación de soluciones

Ac. Acético Ac. Acético Ac. Acético Albuminato

Tubo pH Agua
0.01N 0.1 1.0N 0.1N
1 8.38 0.62 0 0 1.0
2 7.75 1.25 0 0 1.0
3 8.75 0 0.25 0 1.0
4 8.5 0 0.5 0 1.0
5 8.0 0 1.0 0 1.0
6 7.0 0 2.0 0 1.0
7 5.0 0 4.0 0 1.0
8 1.0 0 8.0 0 1.0
9 7.4 0 0 1.6 1.0
10 5.8 0 0 3.2 1.0

Mezclar bien y observar los cambios que presente la solubilidad de la caseína en

cada tubo.
Calcular el pH de cada tubo utilizando la ecuación de Hendersosn-Hasselbach.

Resultados
Experimento No. 1
Tabla II.Determinación del punto Isoeléctrico de la albumina por adición de un ácido.
TUBO pH SOLUBILIDAD
1 6.10 Alta
2 5.80 Alta
3 5.502 Alta
4 5.201 Alta
5 4.9 Alta
6 4.599 Nula
7 4.297 Nula
8 3.996 Nula
9 3.6958 Poca
10 3.3948 Alta
Para sacar el pH de los tubos se utilizó la ecuación de Handerson-Hasselbalch

Donde:
PH= acidez de una solución
PKa= logaritmo negativo de Ka
Ka=constante de la disociación acida

C1V1=C2V2
(0.1 N) (0.001l) =(x) (0.01l)
X= (0.1 N)(0.001l)/ 0.01 N = 0.01 N

Datos
Acido acetico Albuminato 1
ml
0.01N 0.1N
0.1 N
1.0 N

C1V1=C2V2
(0.1 N) (0.001l) =(x) (0.01l)
X= (0.1 N)(0.001l)/ 0.01 N = 0.01 N

TUBO 1

PH=
PH= 4.9+1.20
PH= 6.10

TUBO 2

PH=
PH= 4.9+0.903
PH= 5.80
C1V1=C2V2
(0.01N) (0.001L) =(x) (0.01L)
X= (0.01N) (0.001 L) /(0.01L)
X= 0.001N

TUBO 3

PH=
PH= 4.9+0.6020
PH=5.502
T
TUBO 4

PH=
PH= 4.9+0.3010
PH= 5.201

TUBO 5

PH=
PH= 4.9+ 0
PH= 4.9

TUBO 6

PH=
PH= 4.9+ -0.3010
PH= 4.599

TUBO 7

PH=
PH= 4.9+ -0.6020
PH=4.297

TUBO 8

PH=
PH= 4.9+ -0.9030
PH=3.996
C1V1=C2V2
(0.001L) (0.001N) =(x) (0.01L)
X= (0.001L) (0.001N) /(0.01L)
X= 0.0001N

TUBO 9

PH=
PH=4.9+ -1.2041
PH=3.6958

TUBO 10

PH=
PH= 4.9+ -1.5051
PH= 3.3948

¿Cuál es el punto isoeléctrico de la proteína?

Con base a los resultados el punto isoterico de la proteina se encuentra en un rango de 6
a3

Discusión
Dentro de los resultados de la practica se pudo observar que al colocar todos los
reactivos correspondientes se podían observar las proteínas solubles y las no
solubles a través de los métodos de “salting out” y “salting in” debido a que lo
encontrado, en presencia de sal la solubilidad de las proteínas disminuye lo cual
hizo que se pudiera observar una solidificación de las proteínas dentro del de
ensayo que contenía 2 ml de ácido acético y 1 ml de albumina disueltos en 7 ml de
agua destilada. Esto se da paso porque la sal se suele utilizar para precipitar las
proteínas (Green and Hughes, 1955). Las proteínas suelen estar en competencia
con los iones por la capa de solvatación, cuando las proteínas pierden la
competencia se le llama ”salting out” debido a que se separan las proteínas
llamándolas así no solubles y cuando las proteínas se encuentran en poca
presencia de sal se le llama ”salting in” y se identifica como proteínas solubles.
Después se utilizó la ecuación de Henderson-Hasselbalch la cual se suele utilizar
en el cálculo del pH en el laboratorio, pero nosotros la utilizamos para encontrar el
punto isoeléctrico de nuestras sustancias, esto porque la ecuación nos dice que pH
= pKa es decir Cuando el pH y el pKa son iguales se refiere a que se encontró el
punto isoeléctrico, lo cual nos hace referencia a que se tiene una carga neutra de
las proteínas ya que estas dependiendo de si su pH es acido o base tiene una carga
diferente y con la ionización se puede encontrar que cuando se neutraliza se
encontró el punto isoeléctrico y esto se puede observar con la ecuación antes
mencionada y anteriormente utilizada en los resultados de este reporte. (JS,
Sánchez-Díaz 2016) De manera más grafica se puede ver en esta página. (Figura
1) . La solubilidad de la proteina se ve influida por el pH, concentración salina, etc.
Las proteínas globulares son usualmente solubles en agua debido a que en estos
se encuentran puentes de hidrógenos los cuales son uniones de las moléculas a
través de sus átomos de hidrógenos teniendo en cuenta que estos contienen carga
positiva se conectan a un Oxigeno o un nitrógeno

Figura 1. Solubilidad de la proteina en la experimentación

Cuestionario
1.- Las proteínas Bence Jones precipitan a una temperatura mayor de 60°C. Las
Crioglobulinas precipitan a una temperatura de 4°C. La albúmina de huevo precipita
a una temperatura mayor de 90°C y también precipita a un pH menor de 4.5.
Explique el comportamiento de cada una de estas proteínas tomando en cuenta los
siguientes parámetros: Fuerza iónica del solvente, interacciones electrostáticas
soluto-solvente, agentes desacoplantes de la interacción soluto-solvente.
Las proteínas Bence Jones son cadenas ligeras de inmunoglobinas por lo que la
fuerza iónica del solvente estabiliza las proteínas evitando la
precipitación.(Fernando Oliver 2014)

2.- Mencione que propiedades fisicoquímicas de la albúmina le permiten

interaccionar y transportar cualquier compuesto incluyendo hidrofóbicos a través de
un medio acuoso.
La solubilidad en el agua, sitios de unión su peso molecular además de su
estabilidad
3.- El punto Isoeléctrico de la Gelatina es de 4.7 y el de la colágena es de 8.4. Se
sabe que la colágena es una proteína fibrilar precursora de la gelatina. Explique
porque hay una diferencia tan grande entre los puntos isoeléctricos de ambas.
Se debe por la desaminación es decir que se quita un grupo amino de una molécula
de manera parcial de la glutamina y asparagina que luego se convierte en acido
glutámico y aspártico para luego distribuirse en los aminoácidos que componen el
colágeno. (Kasalab 2021)
4.- El Ac. tricloroacético, el Ac. sulfosalicílico y el Ac. fosfotúngstico tienen la
propiedad de precipitar proteínas. Cuál es el mecanismo fisicoquímico de esta
precipitación.
La reducción de la solubilidad ocasionada por la reducción de la constante
dieléctrica o en otras palabras la polaridad del disolvente
5.- Especifique cual es el efecto del plomo sobre las propiedades electroquímicas
de las proteínas de la sangre.
Inactiva enzimas además de intoxicarlas además de concentrar ácido
deltaaminolevulinico lo que hace que se oxiden además de que altera las
membranas celulares ya que aumenta las especies que reaccionan en el
oxigeno (Martínez, S. A., Cancela, L. M., & Virgolini, M. B. 2011)
6.- Determine el efecto del litio cuando se encuentra en altas concentraciones sobre
las proteínas de las células nerviosas.
Genera mayormente efectos protectores en las zonas del cerebro haciendo que se
conserve más la materia gris, aumento de la generación de neuroblastos neuronas
y células de glía. A largo plazo puede generar patologías como alzhéimer o
Parkinson (Cade, John F.J. 1949)

Conclusión
Conforme lo realizado en la practica el estudiante se dedicó a entender lo que era
el punto isoeléctrico en el que lo interpreto como un punto neutro es decir misma
carga de electrones y protones lo cual en las soluciones elaboradas en el laboratorio
algunas se llegaban a dejar de ser solubles haciendo que se separara la proteína
logrando lo que llamaríamos punto isoeléctrico mediante las ecuaciones de
Handerson-Hasselbalch.

Bibliografía
• Koolman J., Röhm C.H. Bioquímica: Texto y atlas. Madrid, España:
Panamericana, 2004.
• Peña A., Arroyo A., Gómez A., Tapia R. Bioquímica. México: Limusa,
2004.
• Arreguín Espinosa, Roberto; , Barbarín; Castañón Olivares, Laura
Rocío La bioquímica del litio y su utilización en pacientes con desórdenes
mentales Journal of the Mexican Chemical Society, vol. 43, núm. 3-4,
mayo-agosto, 1999, pp. 133-136
• Kasalab,( julio 15 2021) GELATINA Y SU FUERZA GELIFICANTE
obtenido de: https://www.kasalab.com/gelatina-y-su-fuerza-gelificante-
bloom/?fbclid=IwAR1v6VvAYCEBLS6kOfCHLhoAj1j7BzQFeCEQ1BKksj
C6AY5Z0H5Cjrvv-fE
• Cade, J. F. Lithium salts in the treatment of psychotic excitement. Med.
J. Aust. 2, 349–352. https://doi.org/10.1080/j.1440-
1614.1999.06241.x (1949).
• Fenando Oliver. RECUPERACION Y PURIFICACION DE
MACROMOLECULAS. https://biotecnologiaindustrial.fcen.uba.ar/wp-
content/uploads/2010/03/04-PRECIPITACION-CEBI-
17_Junio_2014.pdf?fbclid=IwAR1msyRVgfx7sxIx462bHGm_UjqxzzYuK
6uDfS8FGGfg3WSmnZU_eqdtcyY (2014)
• Martínez, S. A., Cancela, L. M., & Virgolini, M. B. (2011). El estrés
oxidativo como mecanismo de acción del plomo. Implicancias
terapéuticas Oxidative stress as a mechanism of action of lead.
Therapeutic implications. Acta Toxicol. Argent, 19(2), 61-79.
• Green AA, Hughes WL. Protein solubility on the basis of solubility in
aqueous solutions of salts and organic solvents. Methods
Enzymol. 1955;1:67–90.
• JS, Sánchez-Díaz, et al. "Equilibrio ácido-base. Puesta al día. Teoría
de Henderson-Hasselbalch." Medicina Interna de Mexico 32.6 (2016).