LABORATORIO BIOQUMICA 1.

1 PROFESOR: NICOLAS FORRERO

TITULACIN DE AMINOCIDOS
Mara Fernanda Acevedo Ortiz
Jason Alexander Torres Parra
Qumica industrial, Jornada Noche, Corporacin tecnolgica de Bogot,
Colombia-Bogot D.C.

RESUMEN: se realiza la extraccin de casena en 100 mL de leche, la precipitacin se presta gracias a la reaccin
con cido actico, luego se realiza una disolucin con NaOH 1M, se agrega acetato de sodio, cido actico 0.1 M y
cido actico 0.01 M segn lo indicado y se toman datos de pH y absorbancia, para presentar un punto isoelctrico
de: 4.8, y un porcentaje de error de: 4.35%
PALABRAS CLAVE: Casena, extraccin, protena, absorbancia, pH

ABSTRACT: Casein is extracted in 100 mL of milk, precipitation is provided by the reaction with acetic acid, then a
solution is made with 1M NaOH, sodium acetate, 0.1 M acetic acid and 0.01 M acetic acid are added, Indicated and
taking data of pH and absorbance, to present an isoelectric point of: 4.8, and an error rate of: 4.35%
KEYWORDS: Casein, extraction, protein, absorbance, pH

INTRODUCCION: La casena es una protena PROCEDIMIENTO:

conjugada de la leche del tipo fosfoprotena que se
separa de la leche por acidificacin y forma una
masa blanca. Las fosfoprotenas son un grupo de
protenas que estn qumicamente unidas a una
sustancia que contiene cido fosfrico. En la casena
la mayora de los grupos fosfato estn unidos por los
grupos hidroxilo de los aminocidos serina y
treonina. La casena en la leche se encuentra en
forma de sal clcica (caseinato clcico). La casena
representa cerca del 77% al 82% de las protenas
presentes en la leche y el 2,7% en composicin de la
leche lquida. La casena est formada por alpha(s1),
alpha(s2)-casena, -casena, y kappa-casena
formando una micela o unidad soluble. Ni la alfa ni la
beta casena son solubles en la leche, solas o
combinadas.
La propiedad caracterstica de la casena es su baja
solubilidad a pH 4.6. El pH de la leche es 6.6
aproximadamente, estando a ese pH la casena
cargada negativamente y solubilizada como sal
clcica. Si se aade cido a la leche, la carga
negativa de la superficie de la micela se neutraliza
(los grupos fosfatos se protonan) y la protena neutra
precipita. En cambio es fcilmente dispersable en
lcalis diluidas y en soluciones salinas tales como
oxalato sdico y acetato sdico.
Preparacin de la muestra
Caliente en un vaso de precipitados de 100 mL,
40 mL de agua destilada con 20 mL de leche,
hasta 40C.
Agregue 1 mL de cido actico 1M hasta
observar la precipitacin de la casena.
Filtre el precipitado a travs de una cofia y
squelo con papel absorbente. Elimine el
sobrenadante.
Transfiera el precipitado (solido blanco) a un
vaso de precipitados de 50 mL, adicione 20 mL
de etanol al 95% y lave el precipitado agitando
por 5 minutos.
Descarte el etanol y agregue 20 mL de una
mezcla 1:1 de Eter etlico: etanol. Agite 5
minutos.
Filtre el contenido del vaso, y seque con papel
absorbente.
Pese 100 mg de casena y transfiralos a vaso
de 50 mL, adicione 15 mL de agua destilada y
2.0 mL de NaOH 1M; disuelva totalmente la
casena con ayuda de agitador de vidrio. Evite la
formacin de espuma.
Transfiera cuantitativamente la solucin a un
baln aforado de 20 mL, adicione 2.0 mL de
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cido actico 1M, y complete a volumen con 6 4,49 0,189

agua destilada, homogenice. 7 4,8 0,188
En caso que la solucin resultante presente 8 5,18 0,049
turbidez, filtre a travs de papel filtro. 9 5,74 0,024
10 5,64 0,038
Determinacin de PI de la casena Blanco 5,03 0
En diez tubos de ensayo grandes, debidamente
marcados, secos y limpios, adicione los ANALISIS DE RESULTADOS:
volmenes de los reactivos segn la siguiente
tabla:
CASEINA
Acetato cido cido pH 0.19
0.19
Tub 0.2 0.18
de Sodio actico actico (aprox
o
0,1M 0,1M 0,01M ) 0.15
1 0,5 9,5 - 3,2 0.11 0.11
2 1,0 9,0 - 3,6 0.1
0.08
0.07
3 1,5 8,5 - 3,8 Absorbancia
0.05
4 2,0 8,0 - 4,0 0.05 0.04
0.02
5 3,0 7,0 - 4,2
0
6 4,0 6,0 - 4,5 0
7 6,0 4,0 - 4,7
8 8,0 2,0 - 5,1
9 6,0 - 4,0 5,5 pH
10 8,0 - 2,0 6,1
11 6,0 2,0 2,0 Blanco

Aada en cada tubo1 mL de solucin de Determinacin del pI:

casena preparada en el paso anterior.
Medir el pH de cada tubo despus de la adicin pH m
de casena. -
3,8
Prepare la solucin blanco de la curva sin 0,54285714
adicionar casena. -
3,87
0,06666667
Agite y espere 5 minutos.
3,9 0,25384615
Mida la absorbancia de cada tubo a 640 nm,
4,03 0,30869565
agitando previamente.
4,26 0,05217391
-
RESULTADOS: 4,49
0,00322581
-
Muestra pH Abs 4,8
0,36578947
1 3,8 0,113 -
5,18
2 3,87 0,075 0,04464286
3 3,90 0,073 -
5,74
4 4,03 0,106 0,14000000
5 4,26 0,177 5,64 0,06229508
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5,03 -

Porcentaje de error:

4.64.8
%error= 100=4.35
4.6
pI
0.400 El porcentaje de error se puede deber a la mala
calibracin del pHmetro o errores comprendidos en el
0.200 procedimiento Extraccin de casena
0.000
m CONCLUSIONES
-0.200 El punto isoelctrico experimental de la casena fue:
4.8 con un porcentaje de error de 4.35%
-0.400

-0.600 Debido a las propiedades de precipitacin que

pH presenta la casena, es posible realizar una
medicin de su punto isoelctrico a partir de una
desestabilizacin por acidificacin.