La ovulación es la liberación en el momento adecuado de un ovocito maduro y competente

desde el ovario hacia el oviducto, donde se produce la fertilización. Es importante destacar

que la ovulación está estrechamente relacionada con la maduración de los ovocitos, lo que
demuestra la interdependencia de estos dos procesos paralelos, ambos esenciales para la
fertilidad femenina. Iniciado por las gonadotropinas hipofisarias, el proceso ovulatorio está
mediado por factores paracrinos intrafoliculares de las células de la teca, la pared y el
cúmulo granuloso, así como por el propio ovocito. El resultado es la inducción de la
expansión del cúmulo, la proteólisis, la angiogénesis, la inflamación y la contracción del
músculo liso, que son necesarios para la ruptura folicular. Estas complejas redes de
comunicación intercelular y los genes ovulatorios esenciales han sido bien definidos en
modelos de ratón y están altamente conservados en primates, incluidos los humanos. Es
importante destacar que los descubrimientos recientes en la regulación de la ovulación
resaltan nuevas áreas de investigación.
La ovulación de un ovocito desde el ovario hacia el oviducto para la fertilización es un
proceso estrictamente regulado que involucra múltiples sistemas fisiológicos para
garantizar la liberación oportuna de solo oocitos de alta calidad en el momento adecuado.
Dentro del ovario, cada ovocito, del que se depende para crecer y adquirir la capacidad de
ser fertilizado y formar un embrión viable, un proceso conocido como adquisición de la
competencia de desarrollo del ovocito, se encuentra en un folículo rodeado de células
somáticas. Una vez que crece y adquiere competencia, el ovocito se libera en el oviducto a
través de la culminación de la remodelación dinámica del tejido, conocida como ovulación.
La ovulación es provocada por la oleada de LH de la hipófisis a mitad del ciclo; sin
embargo, sorprendentemente, todavía se están revelando las moléculas efectoras
responsables de la liberación final del ovocito del folículo. Curiosamente, muchos genes
importantes de la ovulación también están vinculados a la competencia de los ovocitos, lo
que sugiere que estos procesos están coordinados, tal vez como una medida de "punto de
control", para garantizar que los ovocitos liberados posean el mayor potencial de desarrollo.
El folículo preovulatorio contiene tres linajes de células somáticas principales y distintas.
Las células de la teca son células estromales ováricas especializadas separadas de las capas
de la granulosa por la membrana basal folicular, mientras que dos sublinajes de células de
la granulosa están separados entre sí por el antro folicular (Fig. 1). Estos sublinajes de
células de la granulosa divergen durante el crecimiento folicular, a través de influencias
físicas y bioquímicas, que surgen del contacto cercano con la pared folicular para formar
células murales de la granulosa o con el ovocito para formar células del cúmulo. Es
importante destacar que la comunicación directa, así como las interacciones paracrinas
entre el ovocito y las células somáticas, son necesarias para la ovulación. En respuesta al
pico de LH, la estructura del folículo se remodela radicalmente para permitir la ovulación y
se produce una serie de procesos paralelos esenciales. Estos incluyen la disolución de la
membrana basal folicular, la neovascularización, la formación de una matriz única en el
complejo de células del cúmulo que rodea al ovocito (expansión del cúmulo) y la
reanudación de la división meiótica del ovocito. Los productos genéticos esenciales que
median estos procesos involucran un conjunto de redes de señalización intrafolicular
secundarias, así como una variedad de proteínas efectoras esenciales [como las proteasas y
la matriz extracelular (ECM) recién sintetizada].

enes esenciales que coordinan la ovulación y la maduración de los ovocitos dentro del
folículo ovárico. (1) La especificación de las células del cúmulo se produce cuando los
factores secretados por ovocitos (OSF) diferencian sus células de la granulosa adyacentes
en el linaje de células del cúmulo. Las células del cúmulo se comunican directamente con el
ovocito y viceversa a través de proyecciones transzonales (TZP). (2) El pico de LH se une a
los receptores de LH (LH-R) expresados en las células de la granulosa mural y activa las
quinasas ERK1/2, que a su vez inducen la expresión y secreción de ligandos similares al
factor de crecimiento epidérmico (EGF-L), así como producción de una cohorte de factores
de transcripción, incluida la proteína de unión al potenciador CCAAT (C/EBP) α/β y el
receptor de progesterona (PGR). (3) Los EGF-L inducen la producción de proteínas de la
matriz del cúmulo, como la pentraxina 3 (PTX3) y la hialuronano sintasa 2 (HAS2), que
provocan la expansión del complejo de ovocitos del cúmulo (COC). Las células de la
granulosa producen un conjunto de genes inflamatorios [prostaglandina sintasa 2 (PTGS2)],
matriz (versicano) y proteasa [una desintegrina y metaloproteinasa con motivos de
trombospondina (ADAMTS-1)] que son esenciales para la ovulación y que son
biomarcadores de la calidad del ovocito.
Esta mini-revisión resumirá nuestra comprensión actual de los eventos celulares dentro del
ovario que median la ovulación, con un enfoque particular en aquellos procesos que
también influyen en la maduración de los ovocitos y/o la adquisición de competencia de
desarrollo. La mayoría de los estudios que revelan productos genéticos específicos
esenciales para la ovulación han utilizado modelos de ratones, en particular, ratones
modificados genéticamente con mutaciones genéticas nulas sistémicas [knockout (KO)] o
deleciones genéticas específicas temporales y específicas de células en ovocitos o células
de la granulosa. Los estudios que utilizan modelos de ratón para identificar productos clave
de genes ovulatorios se enfatizan en todo momento, y se destacan los estudios que
demuestran mediadores ovulatorios en primates no humanos y/o humanos. Lo que surge es
que hay fases clave de la foliculogénesis que deben completarse para coordinar con éxito la
ovulación y la maduración de los ovocitos. (1) El linaje de células del cúmulo se diferencia
de la capa granulosa y se establece una comunicación bidireccional con el ovocito. (2) El
pico de LH inicia múltiples cascadas de señalización que se originan en las células de la
granulosa que ponen en marcha procesos paralelos de maduración de ovocitos y expresión
de genes ovulatorios. (3) Los factores derivados de la granulosa y de las células del cúmulo
actúan en conjunto para romper el vértice folicular y liberar un ovocito completamente
maduro. Cada una de estas fases secuenciales es necesaria tanto para la maduración como
para la liberación de ovocitos y, por lo tanto, es esencial para la fertilidad femenina.
El ovocito dicta la especificación de las células del cúmulo
Las células de la granulosa que rodean directamente al ovocito son un sublinaje específico,
definido como "células del cúmulo". Las células del cúmulo y la granulosa se originan a
partir de un progenitor común en los folículos preantrales que se diferencian a medida que
los compartimentos celulares se separan físicamente por la formación del antro, lo que da
como resultado el complejo de ovocito del cúmulo (COC), rodeado de líquido folicular con
capas de granulosa que recubren la pared del folículo (Fig. 1 ). El COC forma un complejo
visiblemente distinguible, que comprende de tres a cuatro capas de células del cúmulo (un
total de ~2000 células), estrechamente empaquetadas en capas concéntricas que envuelven
al ovocito. Las células del cúmulo tienen una respuesta hormonal y un destino distintos en
relación con las células de la granulosa mural y desempeñan un papel único y crítico,
proporcionando un entorno de nicho para el desarrollo del ovocito pluripotente y
manteniendo su detención meiótica. Si se elimina la vestidura del cúmulo, incluso de forma
aguda en las horas finales de la maduración, la competencia de los ovocitos humanos para
fertilizar y desarrollarse normalmente en embriones se ve gravemente comprometida (1).
Es el ovocito el que dirige activamente las células somáticas que lo rodean hacia el linaje
del cúmulo. Dos morfógenos secretados por ovocitos, el factor de crecimiento y
diferenciación 9 (GDF9) y la proteína morfogenética ósea 15 (BMP15), regulan la
expresión génica del cúmulo. Una característica definitoria es la represión del gen Lhcgr
que codifica el receptor de LH (LH-R) por estas señales derivadas de los ovocitos (2), de
modo que las células de la teca y la granulosa mural de los folículos preovulatorios
expresan la proteína LH-R a niveles típicamente de un orden de magnitud. mayor que las
células del cúmulo. Simultáneamente, GDF9 y BMP15 activan la expresión de genes
metabólicos clave específicos de cumulus, como las enzimas de glucólisis (3) y las enzimas
de biosíntesis de colesterol (4), que son mediadores esenciales de la viabilidad y
competencia de los ovocitos. La importancia de los factores de crecimiento secretados por
los ovocitos en la especificación del fenotipo del cúmulo se muestra cuando las células de
la granulosa mural tratadas in vitro con GDF9/BMP15 responden adoptando el perfil de
expresión génica de las células del cúmulo (5). Del mismo modo, la eliminación del ovocito
de los AOC o el tratamiento con antagonistas de la acción de GDF9/BMP15 da como
resultado la inducción de la expresión génica específica de la granulosa y la pérdida de la
expresión génica específica del cúmulo (6, 7). En los seres humanos, los factores secretados
por los ovocitos son igualmente importantes para especificar el linaje del cúmulo; sin
embargo, surgen intrigantes diferencias en la bioactividad y la importancia relativa de
GDF9 frente a BMP15. Mientras que la BMP15 de roedores es relativamente inactiva, en
los humanos es el más activo de los dos factores (8). Se ha propuesto que la abundancia
relativa de GDF9 y BMP15 podría ser un factor determinante entre la monoovulación y la
poliovulación (9) y, por lo tanto, la elucidación de las acciones específicas de especie de los
factores de crecimiento de ovocitos es un área importante de investigación.
Dado que las células del cúmulo brindan apoyo metabólico y nutricional al ovocito, una
asociación íntima con las células del cúmulo es esencial para la supervivencia y el
desarrollo saludable del ovocito. Las proyecciones celulares extendidas por las células del
cúmulo atraviesan la zona pelúcida del ovocito, formando contactos directos con el ovocito,
con uniones comunicantes terminales que conectan el cúmulo y las membranas plasmáticas
del ovocito. Recientemente se han informado nuevas complejidades en esta comunicación
intercelular. La formación de las proyecciones transzonales depende de las señales del
ovocito (10) y puede implicar la fusión de membranas entre el ovocito y las células del
cúmulo (11). Las uniones comunicantes terminales permiten el tránsito de moléculas
pequeñas (∼1 kDa) entre el ovocito y el citoplasma de la célula del cúmulo (12), y el
intercambio de contenidos citoplasmáticos entre las células del cúmulo y el ovocito se
demuestra cuando los tintes fluorescentes inyectados en un tipo de célula se vuelven
rápidamente visible en ambos (11, 13). Los metabolitos de la glucosa se transportan, ya que
los ovocitos no pueden metabolizar la glucosa de forma independiente y dependen de las
células del cúmulo para realizar la glucólisis y transferir el piruvato de forma intercelular
para la producción de energía en las mitocondrias del ovocito (14). Otras moléculas
endógenas que se transportan desde las células del cúmulo hacia los ovocitos incluyen
ATP, cAMP y GMP cíclico (cGMP), que son necesarias para mantener la detención de los
ovocitos en la profase I de la meiosis (también conocida como etapa de vesícula germinal).
Los altos niveles de AMPc, generados en las células del cúmulo por la adenilato ciclasa
activa y transferidos al ovocito a través de uniones comunicantes, mantienen el complejo
del factor promotor de la meiosis de las proteínas del ciclo celular en un estado inactivo
(15). El cGMP derivado del cúmulo, también transferido a través de uniones gap, inactiva
el cAMP que metaboliza la fosfodiesterasa 3A en los ovocitos, lo que contribuye aún más a
los niveles elevados de cAMP en los ovocitos (16). Por lo tanto, las células del cúmulo
desempeñan un papel fundamental en la dirección de la progresión de los ovocitos a través
de la meiosis.
Varios estudios demuestran que cuando la calidad del ovocito o la comunicación entre el
ovocito y el cúmulo es deficiente, no se produce la ovulación. Por ejemplo, la conexina-37
es una proteína de unión comunicante requerida para la transferencia directa de moléculas
pequeñas entre el ovocito y las células del cúmulo, y en ratones mutantes nulos que carecen
de conexina-37, se forman algunos folículos preovulatorios grandes pero no ovulan, y la
maduración nuclear del ovocito es deficiente (17). Esto indica que las respuestas normales
al pico de LH no pueden ocurrir sin una comunicación sostenida entre los ovocitos y las
células somáticas circundantes. Curiosamente, los productos genéticos involucrados en las
modificaciones de la cromatina de los ovocitos también influyen en la ovulación. Por
ejemplo, para la viabilidad de los ovocitos se requieren dos componentes del complejo
cullin ring-finger ubiquitina E3 ligasa 4, que se une directamente y regula la actividad de
diez once enzimas de translocación. La eliminación específica de ovocitos de la proteína de
unión a daños en el ADN 1 (DDB1) o la proteína de unión a daños en el ADN 1 y las
subunidades del factor 1 asociado a CUL4 (DCAF1) en ratones da como resultado una
expresión reducida de GDF9 y BMP15, expresión de genes ovulatorios alterada y
expansión del cúmulo , y redujo drásticamente la tasa de ovulación (18). Del mismo modo,
cuando la metilación de histonas y el silenciamiento transcripcional se evitan mediante la
eliminación específica de ovocitos de la histona metiltransferasa Mll2, se bloquea la
ovulación y los ovocitos quedan atrapados en folículos grandes, intactos pero luteinizados
(19). Por lo tanto, los genes que controlan la calidad del ovocito también influyen en la
capacidad de liberación de ese ovocito. Esta coordinación está regulada, al menos en parte,
por GDF9/BMP15, pero probablemente también involucre mecanismos adicionales
actualmente desconocidos que median la comunicación entre el ovocito y las células
somáticas que lo rodean. Esta elegante diafonía biológica entre la célula germinal y las
células somáticas puede actuar como un punto de control para garantizar que los ovocitos
sanos y viables sean los más competentes para desencadenar su propia liberación durante la
ovulación.
El aumento de LH activa una cascada de mediadores ovulatorios
El aumento de LH de la hipófisis es el desencadenante que pone en marcha y coordina tanto
las etapas finales de la maduración del ovocito como la ruptura folicular. La LH circulante
se une a LH-R, un receptor acoplado a proteína G clásico, en las células de la granulosa
mural de los folículos maduros, lo que desencadena la activación de múltiples vías de
señalización intracelular, incluidas la proteína quinasa A, Erk1/2, la proteína quinasa C y
Ras [revisado recientemente en Richards y Ascoli (20)]. Estas distintas cascadas de
señalización son efectoras de aspectos específicos de la maduración del ovocito y la ruptura
folicular (Fig. 1).
La activación del aumento de LH de la vía Erk1/2 o MAPK es el efector descendente clave
que es absolutamente necesario tanto para la maduración de los ovocitos como para la
ovulación. Así lo demuestra el fenotipo de infertilidad de ratones con inactivación de Erk1
y Erk2 en células de la granulosa (21). Los folículos ováricos de los ratones con doble
mutación exhiben una ausencia total de las respuestas normales inducidas por LH, en las
que >75 % de los genes diana de LH estaban desregulados, incluida una expresión
dramáticamente alterada de los genes específicos de las células del cúmulo y la granulosa.
Como tal, los ovarios se vieron gravemente afectados sin expansión del cúmulo y la falla de
los ovocitos para sufrir la descomposición de la vesícula germinal y reanudar la meiosis.
Paralelamente, no se produjo la ovulación, las células de la granulosa no se luteinizaron y
no hubo un aumento detectable en la producción de progesterona (21). Estos defectos tanto
en la progresión de la meiosis como en la ruptura folicular demuestran que estas quinasas
relacionadas actúan juntas en las células de la granulosa para mediar en aspectos esenciales
tanto de la maduración del ovocito como de la ovulación.
Una de las respuestas clave aguas abajo del aumento repentino de LH mediada por las
cinasas ERK1/2 es la inducción transcripcional de ligandos similares al factor de
crecimiento epidérmico (EGF) (EGF-L) anfirregulina, epirregulina y betacelulina en las
células de la granulosa. La secreción de estos ligandos por las células de la granulosa es
esencial para activar el receptor de EGF (EGFR) en las células del cúmulo e iniciar la
respuesta ovulatoria en el AOC (22), transmitiendo así de manera efectiva la señal de
aumento de LH al AOC, que carece de LH-R y por lo tanto, la capacidad de respuesta
directa. Existe una redundancia funcional entre anfiregulina, epirregulina y betacelulina, de
modo que los ratones mutantes nulos para cada uno de estos genes individuales son fértiles.
Sin embargo, la inhibición de su receptor común (EGFR) bloquea la inducción de la
ovulación por la gonadotropina coriónica humana (hCG), y los ovocitos permanecen
detenidos en la profase meiótica y atrapados en folículos rodeados por capas de cúmulos
compactos (23, 24). Por lo tanto, la secreción inducida por LH de EGF-L de células de la
granulosa transactiva el EGFR en las células del cúmulo para mediar tanto en la expansión
del cúmulo como en la maduración de los ovocitos. Es la separación física de las células del
cúmulo del ovocito lo que afecta la maquinaria reguladora de la meiosis al evitar la
transferencia de AMPc y GMPc de las células de la granulosa al ovocito. Específicamente,
la activación de LH-R de la adenilato ciclasa da como resultado el cierre de uniones gap,
posiblemente a través de la fosforilación de las proteínas conexinas (25) y la pérdida de
comunicación transzonal directa que ocurre con la expansión del cúmulo. En consecuencia,
los niveles de cAMP y cGMP disminuyen dentro del ovocito. La disminución de cGMP
libera la inhibición de la fosfodiesterasa 3A, lo que conduce a una mayor degradación de
cAMP en el ovocito, la liberación de la actividad del factor promotor de la meiosis y la
reanudación de la meiosis (20).
Otros genes aguas abajo de la activación de ERK1/2 son esenciales, específicamente para la
ruptura folicular. Se ha demostrado en estudios con ratones KO que dos factores de
transcripción, la proteína de unión al potenciador CCAAT (C/EBP) α/β, dependen de la
inducción por Erk1/2 y son muy importantes para la ovulación (21). La combinación de
CEBPaKO y CEBPbKO específico de la granulosa conduce a una falla total en la ovulación
similar a la Erk1/2 KO (26), lo que demuestra que estos dos factores de transcripción juntos
son mediadores clave de la ruptura folicular. A diferencia de los mutantes dobles Erk1/2,
CEBPa/gcbKO tienen cierto grado de expansión de cúmulos y maduración normal de
ovocitos con ovocitos que progresan a la metafase II después del tratamiento con hCG (26).
Por lo tanto, las funciones principales de C/EBPα/β parecen ser mediar las respuestas
ovulatorias en el compartimento de la granulosa en lugar de regular las acciones ovulatorias
en el COC.
El receptor de progesterona (PGR) también se induce de forma aguda después del pico de
LH a través de la transactivación mediada por la proteína de unión al elemento de respuesta
de la proteína quinasa A/cAMP y la señalización dependiente de Erk1/2 (21). Una vez
inducida en las células de la granulosa mural por la LH, la PGR, un factor de transcripción
del receptor de esteroides, se activa de inmediato por la alta concentración local de
progesterona (P4), se traslada al núcleo e inicia la transcripción de los objetivos posteriores
críticos para la ruptura folicular. Los ratones con una deleción dirigida del gen Pgr [PGR
KO (PRKO)] presentan un crecimiento folicular y una luteinización normales, pero un
bloqueo completo y específico de la ovulación (27). El papel de la PGR se limita a mediar
en la ruptura folicular, ya que la activación de la expansión del cúmulo y la meiosis de los
ovocitos se produce normalmente, y los ovocitos extraídos de los folículos de PRKO
pueden fertilizarse. El papel clave de la PGR en la ruptura folicular está muy conservado
entre los vertebrados, incluidos los monos rhesus (28, 29) y los humanos (30). La
eliminación del ARNm de PGR en los folículos preovulatorios dominantes de los macacos
rhesus también da como resultado un fenotipo anovulatorio completo (28). Clínicamente,
los antagonistas de PGR, como RU486 (mifepristona), acetato de ulipristal y valaprisán,
pueden bloquear la ovulación y son anticonceptivos efectivos (31, 32). Aunque la PGR es
esencial para la ruptura folicular, la P4 influye en la maduración de los ovocitos,
independientemente de la PGR, en algunas especies. Por ejemplo, el tratamiento con
agonistas de la progesterona puede promover la maduración de los ovocitos a la metafase II
en los folículos del macaco rhesus, incluso en ausencia del pico de LH (33).
Por lo tanto, el pico de LH es la señal endocrina sistémica que actúa sobre las células de la
granulosa ovárica para poner en marcha tanto la reanudación de la meiosis como la ruptura
folicular. Aunque LH-R inicia múltiples vías de señalización en las células de la granulosa
mural para desencadenar cambios foliculares masivos, la activación de LH-R de ERK1/2 es
la señal clave que conecta la ovulación y la calidad de los ovocitos. ERK1/2, a su vez,
genera cascadas de señalización bifurcadas (Fig. 1) que (1) inician la reanudación de la
meiosis y la maduración del ovocito y (2) inducen factores de transcripción que culminan
en complejos únicos, que median la expresión de un conjunto de genes ovulatorios. La
regulación de ERK1/2 de la maduración de los ovocitos es, al menos en parte, a través de la
inducción de EGF-L que son esenciales para la expansión del cúmulo, los cambios en
cGMP y cAMP y la reanudación de la meiosis de los ovocitos. Paralelamente, la activación
de ERK1/2 controla la ovulación a través de la inducción de los factores de transcripción
C/EBPα/β y PGR, esenciales para la inducción de genes efectores implicados en la ruptura
y remodelación del folículo ovárico. Mientras que los factores de transcripción C/EBP y
PGR inducidos por LH son críticos para la remodelación y la ruptura folicular,
específicamente al actuar en las células de la granulosa, no parecen tener funciones en la
regulación de la calidad de los ovocitos o la reanudación de la meiosis.

La producción de matriz y la remodelación proteolítica se combinan para liberar un ovocito

meióticamente maduro
A medida que el folículo responde a la oleada de LH, uno de los eventos visualmente más
impactantes e importantes es la expansión del COC. La masa de COC se expande varias
veces en volumen a través de la rápida inducción de genes que codifican proteínas
estructurales, proteoglicanos y enzimas sintetizadoras de glicosaminoglicanos, lo que da
como resultado la formación de una ECM altamente especializada que envuelve las capas
del cúmulo [revisado en Russell y Robker (34)]. Como las células del cúmulo no responden
directamente al pico de LH, la expansión de COC se activa a través de señales paracrinas
secundarias, a saber, los EGF-L de las células de la granulosa (22) y las prostaglandinas de
las células de la granulosa y del cúmulo (30). Es importante destacar que los factores
derivados de los ovocitos son una señal necesaria y permisiva para la expresión del gen del
cúmulo, como se detalla anteriormente, de modo que la expansión no puede ocurrir sin la
especificación requerida de las células del cúmulo mediada por el ovocito durante el
crecimiento folicular.
La expansión del AOC en los folículos periovulatorios implica la producción muy rápida de
un conjunto de proteínas de la MEC para formar una matriz única y especializada.
Curiosamente, esta matriz de cúmulo se genera mediante síntesis combinatoria e
intercalación de proteínas derivadas de cúmulo, suero y granulosa [revisado en Brown et al.
(35)]. La columna vertebral de la matriz del cúmulo expandido es el hialuronano (HA), una
gran cadena de disacáridos común a muchas ECM. La HA sintasa 2 (HAS2), una enzima
inducida en las células del cúmulo por EGF-L, FSH y prostaglandinas, ensambla las largas
cadenas de disacárido HA (hasta megadaltons) y las extruye al espacio extracelular.
Simultáneamente, el inhibidor de tripsina inter-α (IαI), un complejo proteico circulante
secretado por el hígado, ingresa al folículo, como resultado de una mayor permeabilidad
vascular, y forma enlaces covalentes con HA. La proteína 6 inducida por TNF-α
(TNFAIP6), secretada por las células del cúmulo, se une a HA a través de un dominio de
enlace y ayuda a catalizar la formación de enlaces IαI-HA. También secretada por las
células del cúmulo, la pentraxina 3 forma un complejo decamérico que interactúa con las
moléculas TNFAIP6 para entrecruzarse y estabilizar la matriz de HA. Las células de la
granulosa mural que responden al pico de LH secretan versicano (36), un proteoglicano
grande que se agrega con cadenas laterales de sulfato de condroitina que se incorpora a la
matriz del cúmulo a través de dominios de enlace de unión a HA (36). Simultáneamente
con su rápida producción de ECM circundante, las propias células del cúmulo adoptan un
aumento sorprendente en la capacidad adhesiva, así como en la actividad migratoria e
invasiva (37).
Los modelos animales de alteración de la matriz del cúmulo muestran con frecuencia una
ovulación alterada, lo que demuestra que la expansión de COC es un evento ovulatorio
crítico. Por ejemplo, el tratamiento de ratones con inhibidores de la vía sintética de HA (38)
u oligosacáridos de HA cortos que adsorben la actividad de unión a TNFAIP6 HA (39)
bloquea la expansión y la ovulación de COC. La pérdida de la síntesis de TNFAIP6 o IαI
da como resultado fenotipos casi idénticos, en los que la HA producida por las células del
cúmulo no se estabiliza y el COC no experimenta expansión in vitro o in vivo (40). La
interrupción de la unión de IαI a HA da como resultado una ovulación reducida de ~50%,
así como una deficiencia en la capacidad de fertilización (41). Los ratones mutantes nulos
Tnfaip6 (40) y una de las dos líneas de ratones nulos Ptx3 (42) también muestran una
ovulación significativamente alterada. Por lo tanto, las alteraciones de cualquiera de los
componentes de la matriz alteran la integridad estructural de la matriz del cúmulo y
bloquean la ovulación, lo que demuestra que la expansión del cúmulo es esencial para la
liberación de ovocitos.
Las prostaglandinas son otra clase importante de moléculas de señalización intrafolicular
críticas para la ovulación, al menos en parte, a través de su influencia en la expansión del
cúmulo (43). La enzima que cataliza la producción de precursores de prostaglandinas a
partir de los lípidos de la membrana, la prostaglandina sintasa 2 (Ptgs2; también conocida
como ciclooxigenasa 2), se induce fuerte y rápidamente en las células de la granulosa
después del pico de LH en la mayoría de las especies de mamíferos, desde roedores hasta
macacos rhesus (44) y humanos (30). La eliminación del gen Ptgs2 en ratones da como
resultado una expansión defectuosa del cúmulo, reducción de la ovulación e infertilidad
femenina (45). Asimismo, los fármacos antiinflamatorios no esteroideos, como la
indometacina, que inhiben la actividad de la ciclooxigenasa 2, también inhiben la
ovulación, lo que lleva al desarrollo de productos que utilizan dosis altas de fármacos
antiinflamatorios no esteroideos como anticonceptivos de emergencia (46, 47). La
prostaglandina predominante producida por las células de la granulosa es la prostaglandina
E2 (PGE2), que interactúa con el receptor PGE2 de tipo 2 (EP2) para inducir la expresión
de genes del cúmulo críticos para la ovulación (48), como TNFAIP6, en ratones, primates y
humanos. (45–47). Los ratones nulos para EP2 también tienen una ovulación reducida y
una expresión génica interrumpida del cúmulo (49), pero una fertilidad menos grave que los
ratones nulos para Ptgs2, que no producen prostaglandinas, lo que indica que la
señalización de PGE-EP2 es importante, pero otras prostaglandinas también median efectos
sustanciales. En primates y humanos, PGE2 y el receptor de PGE2 de tipo 1 y los
receptores de EP2 están implicados como los más importantes y se ha demostrado que
median aspectos de la ruptura folicular y la angiogénesis (50). Las clases de fármacos que
bloquean la interacción de la PGE con sus receptores también se han investigado en
modelos de ratones y primates con signos similares de posible eficacia bloqueadora de la
ovulación (51, 52).
Curiosamente, estos mismos procesos de expansión del cúmulo que son esenciales para la
ovulación también influyen en la maduración de los ovocitos. Por ejemplo, el proteoglicano
versicano posee dos dominios similares a EGF que estimulan la activación de COC a través
de la señalización de EGFR (53). La importancia de la expresión del gen cumulus para la
salud del ovocito se demuestra aún más mediante una variedad de estudios que muestran
que el nivel de expresión de genes clave del cumulus está directamente asociado con los
resultados del desarrollo de ese ovocito. Los genes cuya expresión se correlaciona
positivamente con resultados de ovocitos de alta calidad, es decir, embarazo y nacimiento
vivo en humanos, incluyen Has2, Tnfaip6, Ptx3, Vcan y varios otros (35, 54–58). La
reducción de la expresión génica de la matriz del cúmulo asociada con una competencia de
desarrollo deteriorada podría ser un reflejo de las señales deficientes de los ovocitos que
especifican la capacidad de respuesta del cúmulo o respuestas subóptimas de la granulosa al
aumento de LH. Independientemente, la expresión reducida del gen del cúmulo se
considera un marcador clave para la calidad del ovocito.
Además de los cambios dramáticos en el COC en la ovulación, todo el folículo sufre una
profunda remodelación, que incluye degradación proteolítica, inflamación y angiogénesis.
Se cree que las enzimas proteolíticas son responsables de la degradación de la pared del
folículo en el momento de la ovulación, ya que los inhibidores de la metaloproteinasa de
matriz de amplio espectro reducen la ovulación cuando se administran en la bolsa ovárica
(59) o en ovarios de rata perfundidos in vitro (60) o se inyectan en primates. ovarios (61).
Aunque es probable que las acciones redundantes de varias proteasas con especificidad de
sustrato superpuesta estén coordinadamente involucradas en la degradación de la matriz
[revisado Russell y Robker (34)], una desintegrina y metaloproteinasa con motivos de
trombospondina (ADAMTS-1) es una metaloproteasa que ha surgido para desempeñar un
papel individual importante en la mediación de la ovulación (62). La expresión del gen
Adamts-1 es inducida por PGR en folículos periovulatorios de roedores (27), monos (61) y
humanos (63), y este es probablemente uno de los mecanismos por los cuales PGR controla
la ovulación. La proenzima de ADAMTS-1 es sintetizada por las células murales de la
granulosa, pero la forma activa secretada se localiza selectivamente en la matriz y las
células del cúmulo del COC expandido (62). Versican es un sustrato diana de la proteasa
ADAMTS-1, y los ratones que carecen de ADAMTS-1 tienen una división reducida de
versican en sus AOC (62). Además, los ratones mutantes nulos de Adamts-1 tienen tasas de
ovulación muy reducidas y los ovocitos permanecen atrapados dentro de los folículos
luteinizados (64, 65), lo que sugiere que puede ser necesaria la escisión versicana para
liberar el AOC del folículo. ADAMTS-1 también puede influir en la calidad de los
ovocitos, ya que en humanos, la expresión de Adamts-1 en células del cúmulo y la
granulosa está asociada con la capacidad de fertilización de los ovocitos (66). Apoyando un
papel en la calidad de los ovocitos, los ratones nulos Adamts-1 han aumentado la
dismorfogénesis de los ovocitos, han reducido drásticamente las tasas de fertilización y han
aumentado la incidencia de cigotos aberrantes (65). No está claro cómo Adamts-1 podría
influir en la competencia de desarrollo de los ovocitos, pero esto podría ser a través de su
remodelación proteolítica de la matriz del cúmulo o acciones directas de sus dominios de
proteínas similares a EGF. Curiosamente, los factores EGF-L se sintetizan en las células de
la granulosa como proteínas de membrana integrales, y se requiere la escisión proteolítica
de estas formas precursoras para permitir la interacción con sus receptores afines en las
células del cúmulo (23). Fisiológicamente, es probable que los miembros de las familias de
proteasas de metaloproteinasas de matriz, ADAM y ADAMTS sean las enzimas de
procesamiento clave que regulan este evento.
Como los ratones nulos para ADAMTS-1 no tienen infertilidad anovulatoria completa,
mientras que los PRKO sí, la PGR debe tener funciones adicionales en la cascada
ovulatoria, además de la inducción de Adamts-1. Por ejemplo, PGR induce otros factores
de transcripción aguas abajo que son efectores críticos de la ovulación. El receptor activado
por proliferador de peroxisomas (PPAR) γ y el factor inducible por hipoxia (HIF) 1a,
HIF1b y HIF2a se identificaron como genes regulados por PGR a través de microarrays
(67). PPARγ se induce en células de la granulosa de ratón en respuesta a hCG pero no en
ratones PRKO (67). Cuando se evitó la expresión de PPARγ mediante la eliminación del
gen en las células de la granulosa periovulatoria, la ovulación se redujo en casi un 80 %, al
igual que los genes diana aguas abajo de PPARγ, incluidos Et-2, cGKII e IL-6 (todos
previamente identificados como aguas abajo de la regulación de PGR). ) pero no Adamts-1
(67). Asimismo, los factores de transcripción HIF se inducen en las células de la granulosa
en respuesta al pico de LH, pero no en los ratones PRKO (68). El tratamiento de ratones
con un inhibidor de HIF, equinomicina, junto con hCG, inhibió drásticamente la ovulación
(69), lo que indica que los factores de transcripción de HIF son mediadores esenciales de la
ovulación. Los genes diana de HIF, nuevamente conocidos por estar aguas abajo de PGR,
incluyen endotelina 2 (Edn2), Vegfa y Cxcr4. Estos genes, en particular, pueden mediar
cambios endoteliales vasculares y neoangiogénicos que contribuyen a la ovulación.
La angiogénesis en la vasculatura que rodea el folículo es esencial para la ovulación y se
regula principalmente a través de la inducción de la expresión del factor de crecimiento
endotelial vascular (VEGF) en respuesta al pico de LH en las células de la granulosa de la
mayoría de las especies. El bloqueo de la acción de VEGF y, por lo tanto, de la
angiogénesis provoca fallas en la remodelación de la pared del folículo y la ovulación y el
atrapamiento de ovocitos en folículos no rotos y poco luteinizados (50). Por lo tanto, la
remodelación angiogénica mediada por VEGF de la pared del folículo es necesaria para una
ruptura eficiente del folículo, incluso en primates. Además, estudios recientes muestran que
se requiere vasoconstricción para la ovulación, ya que los folículos ovulatorios de los
ratones que carecen de células musculares lisas vasculares no se rompen en respuesta a un
estímulo ovulatorio (70). Las endotelinas activadoras del músculo liso pueden ser un
iniciador importante de las contracciones del músculo liso folicular (y de la ovulación), ya
que las contracciones en tiras de tejido ovárico de rata pueden desencadenarse mediante el
tratamiento con endotelina 2 (Edn2) y los antagonistas de la endotelina bloquean la
ovulación (71). Una mutación nula de Edn2 en ratones provoca una reducción sustancial en
el número de ovocitos liberados en los oviductos, lo que indica que la contracción del
músculo liso u otras acciones de las endotelinas son importantes mediadores de la
ovulación (71). La expresión de endotelinas y la presencia de músculo liso dentro de la
capa de la teca se han documentado en folículos ováricos humanos (72). Edn2 se induce
fuertemente en las células de la granulosa en las etapas finales del período periovulatorio y
depende de la inducción intrafolicular de PGR (73). La inhibición de HIF por equinomicina
reduce la inducción de Edn2 y previene la vasoconstricción en la pared del folículo y el
adelgazamiento de la estructura del ápice folicular, ambos reversibles con Edn2 exógeno
(70), lo que indica que la regulación de los eventos vasculares del músculo liso puede ser el
mecanismo por el cual los HIF regulan ovulación.
Por lo tanto, se requieren C/EBPα/β y PGR para inducir varios genes ovulatorios críticos,
como HIF, PPARγ, Adamts-1, Edn2, Vegfa y Ptgs2, que a su vez contribuyen a la ruptura
folicular, probablemente a través de la inducción de la remodelación de la MEC.
vasoconstricción, angiogénesis y contracción del músculo liso. Asimismo, la PGR regula
aspectos de la inflamación en la ovulación (74), a saber, la producción de citocinas y la
infiltración de células inmunitarias, que caracterizan la ruptura folicular. Curiosamente, el
agotamiento de los leucocitos dendríticos, ya sea sistémica o localmente en el ovario,
redujo drásticamente las tasas de ovulación inducidas por hCG (75). La evaluación
detallada de la función ovárica mostró que la expansión del cúmulo era deficiente y que la
expresión del gen ovulatorio estaba reducida; sin embargo, la permeabilidad vascular
también se vio afectada y la expresión de Vegfc se redujo (75). Esto sugiere que las células
dendríticas influyen en la permeabilidad/función de las células endoteliales y de la
membrana basal vascular y la subsiguiente disponibilidad de los componentes del suero
para estabilizar la matriz del cúmulo expandido. Es importante destacar que los procesos
foliculares de vasoconstricción, angiogénesis, inflamación y contracción del músculo liso
en la ovulación parecen ser específicos de la ruptura folicular y no se han asociado con la
maduración meiótica de los ovocitos o la adquisición de competencia de desarrollo.
Direcciones futuras
La inducción coordinada de múltiples procesos fisiológicos celulares en el ovario vincula
estrechamente la ovulación con la adquisición de la calidad del ovocito. Ambos procesos
son desencadenados por el factor endocrino maestro, LH, que actúa sobre las células de la
granulosa mural para inducir una serie de proteínas efectoras derivadas de las células de la
granulosa, las células del cúmulo y la circulación, lo que permite la liberación de un
ovocito fertilizable. La ovulación es un proceso biológico rápido, estrictamente regulado,
altamente conservado y esencial; sin embargo, hay una serie de preguntas pendientes que
quedan por responder sobre cómo se controla (Fig. 2). Por un lado, la ovulación es
extremadamente difícil de observar in vivo y, aunque recientemente se han desarrollado
algunos métodos interesantes de ovulación in vitro (11, 76), tienen sus limitaciones. El uso
creativo de sistemas de imágenes y etiquetas biológicas más nuevos y avanzados debería
ser capaz de capturar más detalles sobre los eventos fisiológicos que ocurren en todo el
folículo en el momento exacto de la liberación del ovocito.
Los avances recientes brindan nuevos conocimientos sobre los mecanismos biológicos que
vinculan la ovulación y la calidad de los ovocitos, pero también conducen a nuevas áreas de
investigación. Están surgiendo nuevos modos de comunicación entre los ovocitos y las
células somáticas, pero es necesario diseccionar su regulación por mecanismos intrínsecos
al ovocito frente a factores maternos externos. La expansión del cúmulo es esencial para la
ovulación, y los genes de la matriz del cúmulo se identifican sistemáticamente como
biomarcadores de la capacidad de desarrollo de los ovocitos; sin embargo, no se comprende
la función de esta matriz única. La ovulación se puede observar in vitro utilizando algunos
sistemas de cultivo especializados, pero la visualización in vivo proporcionaría una visión
más holística de los eventos foliculares, como la vascularización y la inflamación. El
descubrimiento del factor inhibidor de la leucemia como mediador de la ovulación en
primates destaca que existen algunas diferencias con los modelos de ratón, que
probablemente también incluyen la bioactividad de los factores secretados por ovocitos.
La inducción intrafolicular de EGF-L, C/EBPα/β y factores de transcripción PGR y
prostaglandinas inflamatorias son mediadores fundamentales de los cambios necesarios en
la remodelación del tejido celular. La expansión del cúmulo es esencial para la ovulación,
pero no está claro exactamente cómo esta ECM extensa impulsa la ovulación. La actividad
proteolítica es esencial para la ruptura folicular, para escindir y, por tanto, activar los EGF-
L, así como para degradar las proteínas estructurales de la MEC; sin embargo, la identidad
de todas las proteasas esenciales aún está emergiendo. Curiosamente, la contracción
muscular está emergiendo como un posible mecanismo esencial adicional para que el
complejo de ovocito expandido se libere del vértice del folículo. La comprobación de la
importancia de este mecanismo, así como de otros mediadores moleculares, en primates es
fundamental para desarrollar nuevas estrategias para manipular clínicamente la ovulación.
Hallazgos recientes que indican reguladores de la ovulación específicos de primates (77)
resaltan la necesidad de seguir trabajando en esta área.
Es importante destacar que un diálogo entre el ovocito y las células somáticas que lo rodean
sincroniza la adquisición de la competencia de desarrollo del ovocito con su liberación del
folículo. Están surgiendo nuevos detalles, pero aún queda mucho por aprender sobre las
complejidades estructurales de esta comunicación bidireccional y la diversidad de
mensajeros. Este diálogo da como resultado la especificación del ovocito del fenotipo de la
célula del cúmulo, lo que permite la producción posterior de proteínas de matriz específicas
de la célula del cúmulo. Estos se integran con las proteínas de la matriz de la granulosa y el
suero para lograr la expansión del cúmulo, lo que interrumpe la comunicación directa entre
el ovocito y la célula del cúmulo y permite la reanudación de la meiosis. Con la
especificación de las respuestas de las células del cúmulo en la ovulación, el ovocito es
capaz, al menos en parte, de controlar su propia liberación, lo que potencialmente garantiza
que los oocitos ovulados sean aquellos con una alta competencia de desarrollo. Por lo tanto,
la ovulación es un proceso complejo con múltiples sistemas fisiológicos que contribuyen a
asegurar la liberación de un ovocito con el mayor potencial de desarrollo en el momento
adecuado para la fertilización y el establecimiento del embarazo.