Universidad Austral de Chile

Facultad de Ciencias
Instituto de Ciencias Químicas

Título del Informe: Extracción de Licopeno y Determinación de su Espectro de Absorción UV-

Visible
Nombre: Yohnny Martínez - Millaray Méndez Fecha de entrega: 22-11-2023

1. Introducción (5,0 puntos)

Los fitoquímicos o fitonutrientes son compuestos de las plantas, que cumplen un rol de protección y
defensa para esta. Asimismo, poseen propiedades biológicas beneficiosas para la salud. El grupo de
fitoquímicos se compone de los carotenoides, los flavonoides, indoles e isotiocianatos. En este laboratorio
identificaremos el carotenoide, licopeno (Waliszewski, K. N, 2010)
El licopeno es empleado como protector contra la fotosensibilidad absorbiendo la luz durante la
fotosíntesis por las plantas que lo contienen (Waliszewski, K. N, 2010). Este se encuentra presente en la
sandía, la papaya, el albaricoque, en el pomelo rosa, en menor medida en las zanahorias rojas y en lo
tomates siendo este ultimo la verdura que contiene una mayor cantidad de licopeno ( Periago, M. J.,2001).
Los resultados beneficiosos del licopeno se deben a su capacidad antioxidante, logrando capturar especies
reactivas de oxígeno (EROS), disminuir el estrés oxidativo y el peligro de oxidación de estructuras
celulares como el ADN, proteínas y lípidos por lo que también actúa como un prevencionista de
enfermedades cardiovasculares, osteoporosis y cáncer (Periago, M. J.,2001).

Figura 1. Estructura química del licopeno predominante en los vegetales (Periago, M. J.,2001).

Su fórmula molecular está dada por C40H56 presentando 13 enlaces dobles. El licopeno se puede
encontrar de dos maneras, en su forma cis y trans, siendo esta última la más presente en la naturaleza
con un 95% del contenido total del caroteno en los vegetales (Periago, M. J.,2001). Sin embargo, el trans-
licopeno presenta una estructura más rígida con una cadena más larga mientras que el isómeros cis-
licopeno al ser una molécula más corta se puede solubilizar fácilmente, por ende, su absorción y
transporte a nivel celular se ve favorecido (Periago, M. J.,2001).
El licopeno es entre el 80 a 90% del total de carotenoides presente en los tomates maduros, por lo que
en este laboratorio se pretende aislar el licopeno del tomate para luego analizarlo mediante
espectroscopía UV-VIS.
Los compuestos en solución coloreada presentan una longitud de onda específica a la que absorberán,
dependiendo de en qué isómero se encuentre la molécula como ocurre con los cis y trans. Para determinar
que compuestos están presentes en una muestra se puede utilizar la espectroscopía.
La espectroscopía estudia la radiación electromagnética y su acción en los compuestos químicos. Esto se
logra analizando la cantidad es luz que se transmite a través de la muestra lo que se conoce como
transmitancia o porcentaje de transmitancia (Castillo A., 2023).

Ecuación 1
Donde I es la intensidad de la luz después de pasar a través de la muestra e I0 es la intensidad de la luz
antes de atravesar la muestra. Mientras que la absorbancia A se puede determinar de tres maneras:

Ecuación 1, 2 y 3 ecuaciones para calcular la absorbancia a partir de la transmitancia.

Como se dijo anteriormente la longitud de onda absorbida también es medible, esto se puede llevar a
cabo mediante la espectroscopia. El instrumento utilizado es el espectrofotómetro UV-VIS el cual mide la
cantidad de luz absorbida en función de la longitud de onda otorgando así un espectro de absorción con
el cual se puede trabajar para determinar ciertos compuestos (Castillo A., 2023).
El proceso para generar este espectro es el siguiente: una fuente de luz produce un haz de luz. En este
instrumento se encuentran dos fuentes, una que emite luz UV y otra luz visible. El haz atraviesa la
muestra con disolvente, esta absorbe solo ciertas longitudes de onda. La luz que atravesó la muestra
llega a un detector el cual detecta la cantidad de luz que golpea y la longitud de onda que absorbió
(Castillo A., 2023).

2. Objetivos (5,0 puntos) (máx.. 100 palabras)

• Aislar licopeno y otros carotenos desde 50g de tomate maduro homogeneizado
• Aplicar la técnica de placa sílice gel para observar la presencia de diferentes carotenoides en el
tomate.
• Utilizar la placa de silica gel para la separación del licopeno de los otros carotenoides presentes
en la muestra.
• Analizar espectro de absorción del licopeno UV-VIS.
• Identificar la molécula de licopeno y su comportamiento espacial, si es una molécula cis-licopeno
o trans-licopeno mediante un espectrofotómetro UV-VIS

3. Materiales y equipo (10,0 puntos)

Materiales
• Matraz Erlenmeyer 250ml 1
• Embudo Buchner 1
• Matraz de Kitasato 1
• Balanza 1
• Embudo de decantación de 250ml 1
• Algodón
• Embudo analítico 1
• Capilar 1
• Placa de gel sílice (5x10,5) cm 1
• Vaso precipitado 50ml 2
• Vidrio de reloj 1
• Pipeta Pasteur 1
• Tubo de ensayo 2
• Argolla para soporte 1
• Probeta de 50ml 1
• Probeta de 100ml 1
• Vial ámbar 1
• Soporte universal 1
• Balón de fonde redondo 1

Reactivos
• Tomate maduro homogenizado 50g
• Acetona 100ml
• Hexano 150ml
• Agua destilada
• Sulfato de sodio anhidro
• Diclorometano: éter de petróleo (50:50v/v) 5ml
• Éter de petróleo: acetato de etilo (80:20v/v) 10ml

Equipos
• Rotavapor
• Cámara de luz ultravioleta
• Espectrofotómetro UV-VIS
• Placa agitadora

4. Experimental (10,0 puntos)

Parte 1
En primer lugar, se molieron 5 tomates maduros en una licuadora. Esto para que al momento de juntarlo
con el solvente se homogenicen de mejor manera. Se pesaron 50g del tomate molido directamente en
un matraz Erlenmeyer de 250ml. Siguiente a esto se le adicionó 50 ml de cetona con una probeta de 50
ml y se dejó el matraz en una placa agitadora durante 10 minutos. Pasados los 10 minutos se filtró al
vacío trasvasijando la mezcla a un embudo Buhner, de esta manera se separa la fase líquida que la que
contiene el licopeno de la fase sólida. El tomate filtrado se pasó nuevamente al matraz, se le añadió 25ml
de acetona, se mezcla en la placa agitadora por 5 minutos y nuevamente se filtra al vacío. Este
procedimiento se repite una vez más con 25 ml de cetona y finalmente la fase líquida almacenada en el
matraz de Kitasato se utiliza en el procedimiento 2.
Parte 2
Se midió el volumen de acetona almacenada en el matraz, de 140 ml, este al ser demasiado fue dividido
en dos decantaciones. En un embudo de decantación de 250ml se trasvasijó solo 70ml de la muestra se
le añadió 70 ml de hexano y 30 ml de agua destilada. Esta solución se agita hasta notar que al abrirlo no
salen vapores de la mezcla y se deja reposar unos 5 minutos para que las fases orgánicas (hexano y
carotenos) e inorgánicas (acetona más agua) se separen. Al notar que decanto un líquido opaco y arriba
hay una solución acuosa anaranjada se elimina la primera fase para dejar solo la solución acuosa que
sería el hexano con los carotenos, esta solución se trasvasija a un vaso precipitado y se repite el
procedimiento con los 70 ml de acetona filtrada que quedó para luego juntarla con la muestra ya lista del
vaso precipitado. Como puede contener algo de agua aún se le añade sulfato de sodio anhidro el cual
absorbe el agua que quedó. Se deja reposar unos 5 minutos para después filtrarlo en un embudo analítico
con algodón y pasarlo directamente a un balón de fondo redondo de 100ml. Este se llevó al rotavapor
que estaba a una temperatura de 40°C y se dejó secar.

Figura 2 Rotavapor

Lo que quedó pegado a las paredes del balón de fondo redondo son los carotenoides por lo que para
sacarlos se utiliza como máximo 2ml de una mezcla de diclorometano y éter de petróleo al 50% (50/50)
previamente hecha. Al tener la muestra ya disuelta esta se pasa a un vial y se guarda protegido de la luz
y bajo refrigeración.

Parte 3
La muestra bien procesada se siembra en una placa de sílice gel de 5x10,5 cm. Se le dibuja una línea
recta a 1 cm del borde de la placa, que fue la línea de siembra. Con un capilar se fue posicionando todo
el contenido del vial en la placa. Luego de sembrarla por completo se instaló en la cámara cromatográfica
o fase móvil que se compone de éter de petróleo: acetato de etilo (80:20v/v). Se dejó dentro de la
cámara hasta que la fase móvil avanzó hasta 7 milímetros antes del borde de la placa.
Luego de esto se retiró la placa de la cámara cromatográfica y se dejó secar a temperatura ambiente
durante 2 minutos. Con la placa ya seca se puede observar el licopeno por su coloración anaranjada y al
ponerlo bajo una luz UV-VIS se pueden observar otros carotenos incoloros de la muestra.
Figura 3 cámara cromatográfica Figura 4 placa de sílice gel en luz ultravioleta

Ya visualizado el licopeno y los otros carotenoides se raspa con una espátula la zona superior de la placa
de sílice donde está la franja naranja del compuesto de licopeno y se vierte en un vaso precipitado para
luego agregarle hexano que separará el licopeno de los restos de la placa. Hecho esto se filtró con una
pipeta Pasteur con algodón pasándolo a un tubo de ensayo.
Para finalizar la solución con licopeno y hexano se vierte en una cubeta de vidrio y se lee su espectro de
absorción en un espectrofotómetro de UV-VIS. El espectro se lee a una longitud de onda de 300 y 550
nm alcanzando casi una unidad de absorbancia.

5. Resultados (20,0 puntos)

En la tabla 1 se presentan los datos correspondientes a la absorción y longitud de onda, mientras que en la
gráfica 1 se exhibe el espectro de absorción del licopeno en relación con la longitud de onda, abarcando el
rango de 300 nm a 500 nm

Longitud de onda (nm) Absorbancia

300 0,336
310 0,132
320 0,114
330 0,18
340 0,185
350 0,278
360 0,202
370 0,266
380 0,15
390 0,174
400 0,256
410 0,301
420 0,406
430 0,462
440 0,533
450 0,582
460 0,571
471 0,619
472 0,619
490 0,416
500 0,363
520 0,067
540 0,008
500 0,004
Tabla 1. longitud de onda y absorbancia del licopeno por espectrofotometría UV-VIS

Gráfico 1 espectro de absorción UV-VIS, absorbancia v/s longitud de onda

Al realizar la separación del licopeno de los otros carotenos presentes en la muestra se puede obtener
una razón de frente o RF desde la placa de sílice gel sembrada con la muestra.
La cual está dada por:

Ecuación 5 razón de frente

Rf= 8.4/8.8=0.95

6. Discusión (20,0 puntos)

Los resultados obtenidos sugieren la presencia de Cis-licopeno, ya que se observa un aumento de la
absorbancia significativo en la región cercana a 360 nm, una característica distintiva de este isómero
(Clinton et al., 1996). Esto se ve respaldado al comparar nuestros resultados con el espectro de referencia
(figura 5). En dicha comparación, se evidencia que las bandas A-C del espectro corresponden a isómeros
cis del licopeno, mientras que las bandas E y D se atribuyen al trans- licopeno, ya que no muestran un
aumento en la región 360 nm. Por lo tanto, nuestro espectro exhibe una similitud evidente con las bandas
A, B y C del espectro de referencia, confirmando la predominancia de cis-licopeno en nuestra muestra.

Figura 5. representative UV-Visible absorption spectra of geometrical lycopene isomers (Clinton et al.,
1996)

Otro aspecto de relevancia es la observación de los picos de absorbancia específicos en el espectro de

licopeno, según mencionado en la literatura establece que un pico de absorbancia en 471 nm indica la
presencia de cis licopeno, mientras que un pico a 472 nm sugiere la existencia de trans-licopeno
(Degradation of lycopene, from all trans-lycopene to cis-lycopen, by heating | International Journal of
Current Research, s. f.). Al comparar nuestros resultados con los obtenidos por el grupo de Pablo Burgos
del grupo 1, quien además de presentar un aumento en la región de 360 nm característica del cis licopeno,
también registro un pico en 471 nm, reafirmando la presencia de dicho isómero. Contrariamente, en
nuestros resultados, los valores de absorbancia para 471 nm y 472 nm fueron iguales (0,619), lo que
impide la diferenciación clara entre cis y trans-licopeno utilizando este método.
Por otro lado, de acuerdo a la razón de frente obtenida se puede evidenciar que la molécula de licopeno
es totalmente afín con el éter de petróleo y el acetato de etilo siendo la primera de un carácter apolar
por consiguiente el licopeno es una molécula apolar

7. Conclusiones (20,0 puntos)

Este estudio a alcanzado con éxito el objetivo de determinar la naturaleza isomerica del licopeno presente
en la muestra analizada, confirmando que se trata de cis-licopeno. Además, este trabajo subraya la
importancia de emplear múltiples criterios de referencia. En lugar de depender únicamente de la
identificación basada en espectros específicos de cis o trans-licopeno, la inclusión de otros picos
característicos se revela como una estrategia crucial. Por lo tanto, garantiza una mayor precisión en la
identificación del tipo de licopeno que hay en la muestra.

También resulta intrigante destacar que la forma predominante del licopeno en el tomate es la variante
trans, constituyendo el 95 por ciento de su contenido de caroteno, mientras que el cis-licopeno representa
tan solo un 5 por ciento (Vista de PROPIEDADES QUÍMICAS, BIOLÓGICAS y VALOR NUTRITIVO DEL
LICOPENO, s. f.). La presencia de cis-licopeno en la muestra analizada parece ser resultado del azar, ya
que la única condición que aumentaría la probabilidad de su presencia seria la exposición a una
temperatura de 100 grados Celsius, lo cual no se aplicó en ningún momento durante el experimento.

8. Aspectos formales o Bibliografía (10,0 puntos)

Castillo A., Werlinger F., Velásquez J., Vidal J., Vallejos G. A. (2023) “Guía de Laboratorio Química Orgánica Aplicada, QUIM
160” Universidad Austral de Chile

Clinton, S. K., Emenhiser, C., Schwartz, S. J., Bostwick, D. G., Williams, A. W., Moore, B. J., & Erdman, J. W. (1996).
Cis-trans lycopene isomers, carotenoids, and retinol in the human prostate. American Association for Cancer Research.
https://aacrjournals.org/cebp/article/5/10/823/154582/cis-trans-lycopene-isomers-carotenoids-and-retinol

Degradation of lycopene, from all trans-lycopene to cis-lycopen, by heating | International Journal of Current Research.
(s. f.). https://journalcra.com/article/degradation-lycopene-all-trans-lycopene-cis-lycopen-heating

Periago, M. J., Martínez-Valverde, I., Ros, G., Martínez, C., & López, G. (2001). Propiedades químicas, biológicas y valor
nutritivo del licopeno. In Anales de Veterinaria de Murcia (Vol. 17, pp. 51-66). y

Vista de PROPIEDADES QUÍMICAS, BIOLÓGICAS y VALOR NUTRITIVO DEL LICOPENO. (s. f.).
https://revistas.um.es/analesvet/article/view/16461/15891

Waliszewski, K. N., & Blasco, G. (2010). Propiedades nutraceúticas del licopeno. salud pública de México, 52(3), 254-265.