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Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46

Artículo de revisión

Medicina transfusional: actualización sobre antígenos, anticuerpos y pruebas

serológicas en perros y gatos
Rebecca Zaremba, DVMa,b,*, Aimee Brooks, DVM, MS, DACVECCa,b,
Elizabeth Thomovsky, DVM, MS, DACVECCa,b

Palabras clave: ABSTRACTO

tipificación de sangre

pruebas cruzadas
Las transfusiones de glóbulos rojos se han convertido en un componente integral en el tratamiento de pacientes anémicos y
antígeno
el número de transfusiones continúa aumentando año tras año tanto en medicina veterinaria como humana. Aunque son
anticuerpo
cruciales, las transfusiones de glóbulos rojos no son benignas y pueden provocar reacciones adversas graves. Por lo tanto,
laboratorio estándar
ensayo inmunocromatográfico en
determinar la unidad de donante más adecuada para la transfusión puede resultar un desafío. A medida que evoluciona la
tubo de gel con tira medicina transfusional, se documentan mayores cantidades de antígenos de la superficie sanguínea y los protocolos de
reacción de transfusión prueba previos a la transfusión se vuelven más complejos. Para comprender mejor este campo en evolución, esta revisión
presenta la inmunología básica de las pruebas previas a la transfusión, incluidas las metodologías de tipificación sanguínea y
pruebas cruzadas, y su aplicación en la medicina canina y felina.
aDepartamento de Ciencias Clínicas Veterinarias,
Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad © 2019 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.

Purdue, West Lafayette, IN, EE. UU.

bFacultad de Medicina Veterinaria de la Universidad

Purdue, West Lafayette, IN, EE. UU.

Introducción Antecedentes y terminología

La primera transfusión exitosa documentada de glóbulos rojos (RBC) en
cualquier especie fue una transfusión experimental de perro a perro realizada en
1665 por el Dr. Richard Lower. A principios del siglo XX, el Dr. Reuben Ottenburg
realizó transfusiones experimentales en gatos como parte de la investigación
sobre el tipaje sanguíneo.1Hoy en día, las transfusiones de glóbulos rojos son una
terapia fundamental y potencialmente salvavidas tanto para pacientes humanos
como veterinarios. Sin embargo, las transfusiones de glóbulos rojos no están
exentas de riesgos potenciales.2,3La complicación más importante relacionada con
una transfusión de glóbulos rojos es una reacción transfusional hemolítica aguda
(AHTR). Durante una AHTR, el sistema inmunológico del receptor destruye de
forma aguda los glóbulos rojos transfundidos del donante. Se informa que las
tasas publicadas de AHTR durante las transfusiones de glóbulos rojos en perros
están entre 0,2% y 1,0%, pero estas cifras pueden ser una subestimación.3,4,5Dado
que las AHTR son causadas por incompatibilidades inmunológicas entre el
donante y el receptor, es mejor evitarlas mediante detección previa a la
transfusión. Para seleccionar la prueba de detección pretransfusión más adecuada
para un paciente, es imperativo comprender las opciones, la inmunología
subyacente y las limitaciones de cada prueba.
* Autor correspondiente.
Dirección de correo electrónico:rzaremba@purdue.edu (R. Zaremba).
Abreviaturas:NeuAc, ácido acetilneuramínico; AHTR, reacción transfusional hemolítica aguda; ABRI,
Recursos Internacionales de Sangre Animal; CMAH, hidroxilasa del ácido citidina monofosfato-N-
acetilneuramínico; DEA, antígeno eritrocitario canino; NeuGc, ácido glicoilneuramínico; HBOC,
transportadores de oxígeno acelulares basados en hemoglobina; IMHA, anemia hemolítica mediada por
inmunidad; ICS, Tira Inmunocromatográfica; IgG, Inmunoglobulina G; IgM, Inmunoglobulina M; MAC,
Complejo de Ataque de Membrana; PCV, volumen de células empaquetadas; PBS, solución salina
tamponada con fosfato; PCR, reacción en cadena de la polimerasa; RBC, glóbulos rojos; SL, ensayo de
aglutinación en tubo de laboratorio estándar
Las pruebas serológicas de compatibilidad transfusional se basan en el uso de
anticuerpos (históricamente derivados del suero) para detectar la presencia de un
antígeno.
Antígenos y aloantígenos
Unantígenodenota cualquier estructura que induce una respuesta inmune en un
individuo, generalmente mediante la producción de anticuerpos dirigidos contra el
antígeno. Los antígenos suelen ser proteínas, carbohidratos o lípidos en la superficie de
las células a las que se pueden unir los anticuerpos. La porción específica del antígeno
que está unida al anticuerpo se llamaepítopo.Varios anticuerpos diferentes pueden
reconocer diferentes ubicaciones (epítopos) en una sola proteína en la superficie de una
célula. Una mezcla de anticuerpos que reconocen el mismo antígeno en diferentes
epítopos se denomina mezcla policlonal (o anticuerpo policlonal) y generalmente se
elabora exponiendo un animal al antígeno y recolectando su suero. Por el contrario, una
muestra que contiene múltiples copias (clones) de un solo tipo de anticuerpo que es
todas idénticas y todas se unen exactamente al mismo epítopo en ese antígeno es una
mezcla monoclonal (o anticuerpo monoclonal). Los anticuerpos monoclonales suelen
producirse en el laboratorio mediante la replicación de los linfocitos que producen el
anticuerpo específico en un animal huésped.6,7Si bien las pruebas serológicas para
antígenos específicos en un eritrocito pueden utilizar anticuerpos policlonales o
monoclonales, los anticuerpos monoclonales son más específicos para un antígeno en
particular.
A diferencia de un antígeno en un patógeno (por ejemplo, una bacteria), que se espera que
induzca consistentemente una respuesta inmune en todos los individuos, los antígenos en la
superficie de los glóbulos rojos a menudo se denominan aloantígenos.AloantígenosSon
marcadores “propios” ante los cuales el individuo normalmente no reacciona. Sin embargo, estos
aloantígenos pueden producir una respuesta antigénica en el sistema inmunológico de un
individuo diferente (no propio). Los aloantígenos de interés para los fines de este artículo son los
que se encuentran en los glóbulos rojos del donante o del receptor. Los aloantígenos de glóbulos
rojos comunes que pueden inducir una reacción inmune significativa en un receptor de
transfusión son la base de los sistemas de tipificación sanguínea utilizados en humanos y
animales.

http://dx.doi.org/10.1053/j.tcam.2018.12.005 1938-9736/©
2019 Elsevier Inc. Todos los derechos reservados.
 R. Zaremba et al. / Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46 37

Elantigenicidadde una sustancia en particular se refiere a qué tan fuerte
es capaz de estimular la respuesta inmune adaptativa mediante la
producción de anticuerpos o interacciones con células T. Cuanto más
antigénica es la sustancia, mayor es la respuesta.8
Anticuerpos y aloanticuerpos
Unanticuerpoes una proteína que está unida a la superficie de los linfocitos B,
producida por las células plasmáticas y secretada libre al plasma, o montada en
las superficies mucosas.9Cada anticuerpo está formado por 2 cadenas pesadas y 2
cadenas ligeras (Figura 1).
La clase y propiedades del anticuerpo determinan su efecto sobre la respuesta
inmune. Por ejemplo, la inmunoglobulina M es un fuerte mediador de la
aglutinación entre glóbulos rojos, debido a su confirmación por pentámero (Figura
1). Los anticuerpos que se analizan en la medicina transfusional pueden ser de
varias clases diferentes, pero a menudo se les denomina "aloanticuerpos". Al igual
que los aloantígenos, los aloanticuerpos pueden estar presentes en individuos
sanos y no causar problemas con la sangre de ese individuo, pero pueden
reaccionar con tipos de sangre extraños. Esto contrasta con los "autoanticuerpos"
que atacarán a los antígenos de las propias células de un individuo.
La presencia o falta de aloanticuerpos, así como el grado de respuesta inmune que
inducen, dicta si la sangre se puede transfundir o no sin pruebas previas a la transfusión.
En algunos casos, pueden estar presentes aloanticuerpos, pero si producen una
respuesta inmune débil o inexistente cuando se exponen al antígeno, se consideran de
“baja importancia clínica”. Por ejemplo, aunque la investigación10-12indica que pueden
existir aloanticuerpos preexistentes contra ciertos tipos de sangre (p. ej., antígeno
eritrocitario de perro [DEA] 7) en la transfusión-na€iEn los perros, se considera
ampliamente que carecen de aloanticuerpos naturales clínicamente significativos. Esto
ha llevado a la práctica de referirse a la primera transfusión canina como “segura”, lo que
significa que el riesgo de una reacción hemolítica aguda significativa es bajo en un perro
que recibe una transfusión por primera vez de cualquier donante. Sin embargo, incluso
en perros, la exposición a antígenos transfundidos reconocidos como extraños por el
sistema inmunológico conducirá inevitablemente a la formación de aloanticuerpos
dentro de los 3 a 7 días posteriores a la exposición.2,13Esto hace que las transfusiones
posteriores en cualquier especie tengan cada vez más probabilidades de provocar una
reacción.2,3,13Por el contrario, los humanos y los gatos tienen aloanticuerpos naturales
contra antígenos no sanguíneos desde la infancia. Estos
Los aloanticuerpos reaccionan con la sangre de otros individuos de la misma especie incluso
durante la primera transfusión, lo que hace que las pruebas previas a la transfusión en estas
especies sean críticas antes de la transfusión.
Aglutinación
La detección de aglutinación como evidencia de entrecruzamiento de los glóbulos
rojos por anticuerpos es la base de muchas formas de pruebas previas a la transfusión.
También es evidencia de la presencia de autoanticuerpos en estados patológicos, como
la anemia hemolítica inmunomediada (IMHA).
Aglutinación,Considerado un signo distintivo de que se están produciendo
reacciones de antígenos y/o anticuerpos, tiene lugar cuando los anticuerpos se unen a
antígenos en más de un eritrocito, entrecruzándolos y dando como resultado la
agrupación de esos eritrocitos. Si bien las interacciones débiles sólo pueden ser visibles
microscópicamente (microaglutinación), grandes cantidades de anticuerpos pueden
producir una macroaglutinación muy visible (Figura 2). La aglutinación crea grupos de
células similares a uvas que no se dispersan cuando se diluyen con solución salina. Esto
debe distinguirse de la interacción electrostática de los eritrocitos que provoca la
formación de rouleaux; tales interacciones aparecen como apilamiento de glóbulos rojos
que se dispersan con la dilución.14
La sangre felina en particular es propensa a la formación de rouleaux. Diferenciar
los rouleaux de la aglutinación es importante para evitar falsos positivos al evaluar
la incompatibilidad de la sangre.15
La temperatura cambiará la afinidad de unión de las interacciones de
anticuerpos y/o antígenos y afectará si se produce o no aglutinación. Se cree
que las “aglutininas” (anticuerpos que causan la aglutinación) más
importantes son las que se producen a la temperatura corporal (37°C),
(“aglutininas calientes”). Sin embargo, algunas reacciones de aglutinación
sólo se observan a temperatura ambiente o más fría (“aglutininas frías”). La
importancia clínica de las crioaglutininas en medicina veterinaria está bajo
investigación adicional. En medicina humana, las aglutininas frías se
consideran menos importantes que las aglutininas calientes ya que
clínicamentereacciones significativas tienen lugar a temperaturas corporales
normales.1,16Por lo tanto, la temperatura a la que se realizan las pruebas
previas a la transfusión es importante al evaluar la fuerza de las
interacciones entre anticuerpos y/o antígenos y puede no reflejar con
precisión lo que sucede en el cuerpo si se realizan a temperaturas más frías.

Figura 1.Estructura de anticuerpos y aglutinación.

Los anticuerpos están compuestos por 2 cadenas pesadas y 2 ligeras. El tipo de cadena pesada determina la clase de inmunoglobulina (IgM, IgG, IgA, IgD o IgE) y también se unen en la "cola" del anticuerpo para crear
la región Fc específica de la clase. Las regiones de las cadenas ligera y pesada que forman los “brazos” del anticuerpo contienen las regiones variables que determinan la especificidad de unión al antígeno (región Fab'). La
unión de anticuerpos a antígenos en múltiples glóbulos rojos mantiene físicamente juntos a los glóbulos rojos mediante entrecruzamiento y crea el signo microscópico y macroscópico de aglutinación. Como se ilustra
anteriormente, la IgM es particularmente buena para inducir la aglutinación porque su estructura pentámera expone más sitios Fab' para la reticulación.
38 R. Zaremba et al. / Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46

Figura 2.Aglutinación
La aglutinación es el resultado de una reacción antígeno/anticuerpo que puede identificarse de forma macroscópica (macroaglutinación, A) o visible microscópicamente (microaglutinación indicada por flechas negras,
B).

Inmunología de la destrucción de glóbulos rojos
Las reacciones transfusionales agudas son la complicación de mayor
preocupación cuando se transfunden glóbulos rojos. Ocurren cuando un
aloanticuerpo preformado clínicamente significativo reconoce y se une a un
aloantígeno en un eritrocito. Esta unión de anticuerpos "marca" la célula para su
destrucción (Fig. 3). El sistema inmunológico puede destruir las células marcadas
mediante fagocitosis (los glóbulos rojos son fagocitados y digeridos por una célula
inmunitaria), o mediante hemólisis, donde la membrana celular se rompe y el
contenido celular se escapa. La fagocitosis suele ocurrir en el bazo y el hígado y
está mediada por neutrófilos y macrófagos. El contenido de las células fagocitadas
es parcialmente digerido por el sistema inmunológico, lo que produce los signos
clásicos de hemólisis extravascular (ictericia, bilirrubinuria). La hemólisis de los
eritrocitos marcados con anticuerpos se desencadena por la liberación de factores
citotóxicos de otras células inmunitarias, como las células asesinas naturales, o
por la activación del complemento.
El complemento es un mecanismo importante de hemólisis intravascular observado
en reacciones transfusionales agudas. La hemólisis intravascular hace que el contenido
de los glóbulos rojos se derrame al torrente sanguíneo, lo que provoca
hemoglobinemia y hemoglobinuria. Dado que la capacidad de desencadenar el
complemento y provocar hemólisis indica que se están produciendo interacciones
anticuerpo-antígeno, la hemólisis también se considera un resultado "positivo" de
incompatibilidad junto con la aglutinación en muchas pruebas de detección de
transfusiones. La cascada del complemento es una reacción en cadena de zimógenos,
similar a las cascadas de coagulación o de enzimas digestivas. El complemento puede
ayudar en la destrucción de los glóbulos rojos de varias maneras. La primera es “marcar”
las células (de manera similar a la forma en que los anticuerpos “marcan” u opsonizar las
células) para la fagocitosis por parte de los macrófagos y otras células inmunes. El
complemento también actúa para atraer más células inflamatorias al sitio de activación,
facilitando la destrucción. Finalmente, el complemento puede lisar directamente las
células ensamblando el complejo de ataque a la membrana; El complejo de ataque a la
membrana creará poros en una célula y alterará su membrana (Fig. 3).
Si la hemólisis se produce secundaria a una transfusión, esto se considera una AHTR,
que es una reacción de hipersensibilidad de tipo II. Estas reacciones son clínicamente
significativas y ocurren minutos u horas después de una transfusión, lo que resulta en la
destrucción de las células transfundidas. Normalmente, con un AHTR, está presente un
anticuerpo preformado contra el antígeno transfundido.

Fig. 3.Opsonización y destrucción de glóbulos rojos.

Los anticuerpos o componentes del complemento se unen a los antígenos de los glóbulos rojos (opsonización) y esta interacción conducirá a 1 de 3 vías: (A)La región Fc del anticuerpo o componente del complemento
es reconocida por las células inmunitarias que median la fagocitosis. (B)Los anticuerpos o componentes del complemento unidos a los antígenos de los eritrocitos pueden activar la cascada del complemento. El resultado
final es la formación del complejo de ataque a la membrana (MAC), que crea poros en la membrana de los glóbulos rojos y provoca la lisis. (C)La región Fc es reconocida por las células asesinas naturales (células NK), así
como por los macrófagos, neutrófilos y eosinófilos. Esta interacción conduce a la liberación de granzimas (degrada los glóbulos rojos) o perforinas (crea poros en los glóbulos rojos) de las células inmunitarias, lo que
provoca apoptosis (muerte celular programada) y/o hemólisis.
 R. Zaremba et al. / Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46
en cantidades suficientemente grandes como para desencadenar la respuesta
inmune. Si bien puede ocurrir una hemólisis intra o extravascular (o ambas), la
hemólisis intravascular es particularmente peligrosa ya que también desencadena
una respuesta inflamatoria sistémica que puede resultar en disfunción de
múltiples órganos e inestabilidad hemodinámica. Los riñones son particularmente
vulnerables al daño causado por la pigmenturia creada por el hemo liberado
durante la hemólisis intravascular.17
No todos los pacientes con aloanticuerpos tienen un AHTR. Los animales con niveles
muy bajos de aloanticuerpos pueden no montar unainmediato respuesta a una
transfusión, pero regulará positivamente la producción de aloanticuerpos después de la
transfusión (es decir, una reacción transfusional retardada). De manera similar, cualquier
paciente expuesto a un aloantígeno de glóbulos rojos reconocido como extraño creará
anticuerpos contra el antígeno, generalmente dentro de los 3 a 5 días posteriores a la
exposición inicial. En ambos casos, esta producción de aloanticuerpos en respuesta a la
transfusión puede provocar una destrucción gradual de los eritrocitos transfundidos en
el transcurso de unos pocos días.12Por lo tanto, si bien es posible que no haya signos
clínicos de una reacción durante la transfusión, los glóbulos rojos transfundidos pueden
tener una vida útil más corta, lo que lleva a una rápida disminución del volumen de
células concentradas (PCV) post-transfusión y posiblemente a signos consistentes con
hemólisis retardada (ictericia). , pigmenturia). Las reacciones transfusionales tardías
generalmente no ponen en peligro la vida, pero la intensidad de la respuesta depende de
la cantidad y fuerza del anticuerpo y/o de la reacción del complemento.10,11Se remite a
los lectores a otros lugares para obtener revisiones más profundas del diagnóstico y
tratamiento de las reacciones a las transfusiones.3,18,19,20
Tipos de sangre
Los tipos de sangre son marcadores en la superficie de los glóbulos rojos que los
investigadores han identificado como inductores de una respuesta inmune en otros
individuos, es decir, son aloantígenos. Los tipos de sangre humanos ABO se componen
de antígenos de carbohidratos unidos a lípidos o proteínas en la superficie celular. Si bien
el sistema ABO es el más conocido en humanos porque causa las reacciones clínicamente
más significativas, se han descubierto en humanos más de 30 sistemas de tipos
sanguíneos de eritrocitos que contienen >300 variantes de antígenos, y se siguen
encontrando más.21,22Otros antígenos de glóbulos rojos humanos son proteínas,
moléculas de señalización celular o canales iónicos. Por lo tanto, los “tipos de sangre”
pueden tener muchas otras funciones para la célula además de ser reconocibles como
antígenos para el sistema inmunológico. Lo que convierte a un marcador de superficie de
glóbulos rojos en particular en un antígeno de “tipo sanguíneo” es simplemente el hecho
de que se ha descubierto un anticuerpo que reacciona ante él en una determinada
proporción de una población. En muchos casos, los antígenos del tipo sanguíneo se
identifican mediante la unión de anticuerpos años antes de que se conozca más
información sobre la función alternativa y/o la identidad del antígeno; en otros casos, ya
se sabe que el antígeno desempeña otra función en la célula en el momento en que se
identifica como tipo de sangre.
En un mundo perfecto, a un paciente se le transfundirían glóbulos rojos de un
donante que tuvieran exactamente los mismos marcadores de tipo sanguíneo que el
receptor para reducir el riesgo de que el receptor reconociera las células como extrañas.
Sin embargo, dada la cantidad y la complejidad de los tipos posibles, como se señaló
anteriormente, es poco probable en un entorno clínico tener la capacidad de realizar
pruebas, y mucho menos encontrar, sangre idéntica en un grupo de donantes
disponible. Por lo tanto, la tipificación sanguínea se centra en encontrar sangre
compatible mediante la detección de los tipos de sangre más antigénicos para minimizar
el riesgo de transfundir un antígeno que probablemente cause una reacción. Por
ejemplo, en el sistema ABO humano, la sangre "O" es compatible con los receptores de
tipo A y B, ya que carecen de anticuerpos contra la glicoproteína "O" (universal, no
modificada). Por tanto, una persona tipo A sería compatible con sangre tipo A u O,
aunque los antígenos no sean idénticos. Por eso los individuos tipo O se consideran
“donantes universales”.
Canino
La investigación original sobre los tipos de sangre caninos se realizó mediante
la administración intencional de transfusiones incompatibles a perros de
investigación y luego recolectando su sangre. El suero separado o “antisuero” de
39
tabla 1
Antígenos de glóbulos rojos caninos y significado clínico
Antígenos glóbulos rojos caninos Significación clínica
DEA 1 Alta antigenicidad, alta frecuencia, AHTR reportadas
DEA 3 Reacciones retardadas, no hemolíticas
DEA 4 Alta antigenicidad, baja frecuencia, informó 1 AHTR30
DEA 5 Reacciones retardadas, no hemolíticas
DEA 7 Reacciones retardadas, no hemolíticas
Dal Desconocido
Kai 1 Desconocido
Kai 2 Desconocido
Actualmente no es posible escribir DEA 3, 6 y 8 debido a la falta de antisueros disponibles.
esos perros contenían anticuerpos policlonales que luego se usaron in vitro para
identificar múltiples antígenos de glóbulos rojos que posteriormente se clasificaron bajo
el sistema DEA.2,23Originalmente, el sistema DEA describía los tipos de sangre 1.1, 1.2,
1.3, 3, 4, 5, 6, 7 y 8. Actualmente, el tipo de sangre está disponible comercialmente solo
para DEA 1, 4, 5 y 7.2,13,23,24(tabla 1), debido al suministro limitado de antisueros para las
pruebas. Si bien esto limita nuestra capacidad para detectar todos los tipos de sangre
conocidos en perros, esto puede tener una importancia clínica limitada ya que DEA 1 es
actualmente el único tipo de sangre comúnmente examinado que probablemente cause
un AHTR.
Dependiendo de la población estudiada, entre el 33% y el 60% de los caninos
son DEA 1 positivos.13,25Si bien trabajos anteriores habían subdividido la DEA 1 en
antígenos separados (DEA 1.1, 1.2 y 1.3), estudios recientes que utilizan un
anticuerpo monoclonal DEA 1 más nuevo describen el antígeno DEA 1 como un
patrón de herencia autosómico dominante con 4-5 alelos posibles.6,26Esto significa
que, en lugar de ser positivos o negativos para DEA 1.1, 1.2 o 1.3, los perros son
positivos o negativos para DEA 1, pero la fuerza de esa "positividad" depende de
qué forma del gen han heredado. Según este sistema, los perros son negativos
para DEA 1 o positivos en un rango de 1+ a 4+.6Actualmente se desconoce si un
donante de DEA 1(1+) causaría una reacción tan fuerte como un donante de DEA
1(4+) en un perro sensibilizado con DEA. Por lo tanto, al realizar la evaluación, es
más fácil considerar a todos los perros DEA 1 como negativos o positivos,
independientemente de la fuerza de la positividad.
Otros antígenos DEA de menor importancia clínica en perros incluyen 3,
4, 5 y 7. Aloanticuerpos existentes contra DEA 3, 5 y 73,23,27-29
Se han documentado casos, pero a diferencia de los aloanticuerpos DEA 1, no se
ha encontrado que causen reacciones transfusionales inmediatas. Se han descrito
reacciones tardías a las transfusiones, como una reducción de la vida útil de los
eritrocitos, después de transfusiones posteriores de sangre positiva para DEA 3, 5
o 7 a receptores sensibilizados.3,23,28,29
A diferencia de DEA 3, 5 y 7, un informe de caso ha demostrado que la
sensibilización a DEA 4 puede causar AHTR en transfusiones posteriores.30Sin
embargo, la DEA 4 es un antígeno de alta prevalencia en caninos (el 98% de los
perros son positivos para este antígeno).30Por lo tanto, para que un perro tenga
un AHTR mediado por DEA 4, el receptor tendría que ser DEA 4 negativo (2% de la
población) Y recibir una segunda transfusión de un DEA 4.
+ donante. Por lo tanto, es extremadamente improbable que se observe
clínicamente una AHTR relacionada con la sensibilización a la DEA 4. Por lo tanto,
debido a la improbabilidad de una reacción relacionada con DEA 4+ y la poca
frecuencia de DEA 4¡perros de la población, caninos negativos a DEA 1, 3, 5 y 7 y
positivopara 4 a menudo se describen como “donantes universales”.2,3,30
Si bien el sistema DEA fue la nomenclatura acordada para los tipos de sangre
canina en el taller internacional de inmunogenética canina en 1972, se siguen
descubriendo antígenos adicionales que no se ajustan al sistema DEA.31ElDalEl
antígeno fue descubierto en 2007 después de que un dálmata que recibía
repetidas transfusiones por insuficiencia renal crónica se sensibilizara a una
sangre con la que debería haber sido compatible con la DEA. Esta incompatibilidad
se observó durante el cruce con 80 posibles donantes compatibles con la DEA. La
causa de las reacciones observadas durante la prueba cruzada fue un nuevo
antígeno de glóbulos rojos que más tarde se denominóDal.12Investigaciones
posteriores han demostrado queDaltiene un modo de herencia autosómico
dominante y que las razas comúnmente utilizadas para la donación de sangre,
como galgos, labradores y dorados
40 R. Zaremba et al. / Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46
Los perros perdigueros fueron 100% positivos paraDal.En contraste, el 12% de los
dálmatas, el 42% de los dóberman y el 57% de los shih tzu en una población de 1130
perros eranDalnegativo, poniendoDal¡perros con mayor riesgo de sensibilización aDal
después de una primera transfusión.32Como tipificación sanguínea junto a la cama para
Dal actualmente no está disponible, se desconoce si y qué tipo de reacción a la
transfusiónDal-perro sensibilizado lo habría hecho si se le hubiera dadoDal+sangre
durante una segunda transfusión.
En 2017 se identificaron dos antígenos sanguíneos adicionales, Kai 1 y
Kai 2, que han sido evaluados en Estados Unidos y Corea del Sur.25,33Los
perros suelen ser Kai 1+/Kai 2¡ (94%), siendo sólo el 1% de los perros
(principalmente Lhasa Apsos) Kai 1¡/Kai 2+. Los perros no pueden ser
positivos tanto para Kai 1 como para 2, pero pueden ser negativos para
ambos.25Si bien no se han descubierto aloanticuerpos naturales contra el
sistema Kai, se detectaron aloanticuerpos contra Kai en perros previamente
transfundidos.25Aún no se ha determinado la importancia clínica de los
aloanticuerpos Kai en receptores sensibilizados.
A pesar de una comprensión cada vez mayor de los antígenos sanguíneos caninos,
es probable que aún queden muchos antígenos sin identificar. Esto hace imposible
“combinar perfectamente” una transfusión canina para prevenir reacciones. En un
estudio, incluso después de escribir y comparar extensamente para DEA 1, 3, 4, 7 yDal,4
perros aún se volvieron incompatibles con sus donantes originales en el momento de
una transfusión posterior, lo que indica que estos perros estuvieron expuestos a
antígenos adicionales no seleccionados.13En otro estudio, hasta el 46% de los perros
transfundidos eran incompatibles mediante pruebas cruzadas con sus donantes
originales compatibles con DEA 1 después de su primera transfusión.34
Además, los perros que nunca han recibido una transfusión aún pueden ser
incompatibles con la sangre de un donante mediante pruebas cruzadas. En una
población, el 17% (25 de 149) de las transfusiones na€iCinco perros fueron incompatibles
mediante pruebas cruzadas con al menos 1 de 3 posibles donantes DEA 1 y 7 negativos.
dieciséisEstos hallazgos enfatizan que la coincidencia del tipo de sangre por sí sola en
perros nono Garantizar la seguridad de las transfusiones debido a la presencia de
antígenos sanguíneos no probados y no clasificados.
Felino
El sistema de antígenos sanguíneos felinos más descrito es similar al sistema ABO utilizado
en humanos, caracterizando a los gatos como A, B o (raramente) AB. También al igual que los
humanos, los gatos han preformado aloanticuerpos contra otros tipos de sangre antes de
cualquier exposición a una transfusión. Sin embargo, a diferencia de los humanos, en los gatos
no existe un tipo de donante universal o “O”. Esto significa que los gatos DEBEN recibir una
transfusión de sangre de un tipo compatible, o es probable que se produzcan reacciones
transfusionales importantes que pongan en peligro su vida. Mientras que los débiles anticuerpos
anti-B de los gatos tipo A pueden provocar un retraso en la supervivencia de los glóbulos rojos,
los fuertes anticuerpos anti-A de los gatos tipo B pueden provocar reacciones mortales si reciben
incluso 1 ml de sangre tipo A.35
A diferencia de los perros, se han caracterizado los genes que codifican el
sistema sanguíneo AB felino. Los gatos tipo A tienen enzimas funcionales citidina
monofosfato-N-acetilneuramínico hidroxilasa (CMAH) que convierten el ácido
acetilneuramínico (NeuAc) en ácido glicoilneuramínico. Los gatos tipo B tienen
mutaciones en el gen CMAH que reducen la función de la enzima, lo que provoca
una falta de conversión de NeuAc en la membrana de los glóbulos rojos. Los gatos
tipo AB tienen una función parcial de la enzima CMAH que conduce a cantidades
aproximadamente iguales de NeuAc y ácido glicoilneuramínico en la membrana
de los glóbulos rojos.36Existen pruebas genéticas para detectar mutaciones del
gen CMAH, pero actualmente es imposible distinguir entre los fenotipos A y AB.37
Además, 3 de 112 gatos que fueron evaluados genéticamente tenían fenotipos sanguíneos que
diferían del tipo de sangre predicho por su genotipo. Esto sugiere que existen mutaciones no
descubiertas que afectan la función de CMAH.37Si bien el genotipado de gatos puede ayudar a los
criadores a reducir los tipos de sangre no deseados en sus poblaciones, debido a los resultados
discordantes y la falta de disponibilidad, actualmente no puede reemplazar el tipaje sanguíneo
serológico en felinos.
Si bien el sistema AB es el sistema de tipificación sanguínea predominante en
los gatos, se han descrito antígenos adicionales fuera del sistema AB que causan
reacciones hemolíticas.38ElmikEl antígeno es el primer tipo de sangre no
perteneciente al sistema AB descrito en gatos. Fue descubierto en 2007 después
de unmik¡al receptor de trasplante renal se le administrómik+
sangre que conduce a una reacción de transfusión hemolítica. Cuando se examinaron 65
gatos tipo A de una población de donantes, se examinaron 3 gatos adicionales. mik¡y
tenía coincidencias cruzadas incompatibles conmik+gatos tipo A en la población.38Como
estos gatos donantes fueron todos transfusiones na€ive, esto implica que los
aloanticuerpos contramikocurren naturalmente en los gatos y podrían causar AHTR
durante la primera transfusión. Desafortunadamente, las pruebas demikno está
disponible como prueba de cabecera en este momento.
A pesar demikes el único tipo de sangre felino no AB descrito hasta ahora, los
estudios cruzados muestran evidencia contradictoria en cuanto a la probabilidad de que
otros antígenos desconocidos causen reacciones a las transfusiones en gatos. Un estudio
comparó 112 gatos y no encontró evidencia concluyente de incompatibilidad de tipo
sanguíneo no AB.37Sin embargo, otros 2 estudios retrospectivos encontraron que el 25%
de los gatos desarrollan resultados de compatibilidad cruzada incompatibles después de
una primera transfusión a pesar de que la transfusión sea sangre compatible con el tipo
AB, algunos tan pronto como 2 días después de la transfusión. Estos hallazgos pueden
ser secundarios a la transfusión demik+productos sanguíneos o antígenos que aún no se
han descubierto.39,40También hay resultados mixtos en cuanto a si usar sangre
compatible con el tipo y la compatibilidad cruzada para la transfusión felina es mejor que
usar solo sangre compatible con el tipo.39,41En estudios recientes, el hecho de que una
transfusión fuera compatible o no con pruebas cruzadas no predecía consistentemente
una reacción a la transfusión en el receptor. Por lo tanto, aunque existe evidencia clara
de que los gatos tienen aloanticuerpos naturales e inducidos contra antígenos de tipo
sanguíneo no AB, el riesgo de tener reacciones transfusionales clínicamente significativas
causadas por esos anticuerpos aún no está claro y parece ser poco común.
Debido a la disponibilidad limitada de sangre específica del tipo felino, así
como al retraso en el tipaje sanguíneo en casos críticos, se ha descrito con éxito la
xenotransfusión de gatos con sangre de perro.42-44Una revisión retrospectiva de
xenotransfusión en gatos no encontró evidencia de incompatibilidad importante
cuando se realizaron pruebas previas a la transfusión entre gatos y caninos
donantes, y no se informaron reacciones agudas graves en gatos que recibieron
una transfusión de sangre canina por primera vez.42,44Sin embargo, todos los
gatos destruyeron la sangre transfundida dentro de los 4 a 7 días posteriores a la
transfusión y cualquier gato que recibió una segunda xenotransfusión >6 días
después de la transfusión inicial tuvo reacciones anafilácticas significativas, a
menudo fatales. Publicaciones más recientes compararon muestras de sangre
felina y canina entre sí y encontraron que entre el 50% y el 75% de los gatos eran
incompatibles mediante pruebas cruzadas mayores, y casi el 100% de todas las
pruebas cruzadas menores eran incompatibles.43,45No se describieron la
transfusión ni el historial de salud de estos animales. Estos autores concluyeron
que, por lo tanto, no se puede garantizar la compatibilidad de la sangre canina en
todos los receptores felinos por primera vez. Como obviamente se prefiere la
transfusión de sangre felina compatible, la xenotransfusión con sangre canina
debe reservarse como técnica de emergencia para casos críticos y urgentes en los
que no se puede obtener sangre compatible con un tipo específico de especie. Los
profesionales nunca deben realizar una segunda transfusión de sangre de perro
después de 4 días de la xenotransfusión inicial al receptor felino, ya que puede ser
fatal.44
Métodos de tipificación de sangre
La tipificación de la sangre se puede realizar internamente o en un laboratorio
comercial. Las pruebas de laboratorio comerciales que utilizan el método del tubo de
referencia proporcionan información sobre tipaje sanguíneo más completa que la que
está disponible internamente y que a menudo se utiliza en los donantes de sangre. Los
kits comerciales de tipificación sanguínea disponibles actualmente incluyen pruebas de
aglutinación en tarjetas para DEA 1 canina y A, B y AB felina y ensayos de tiras
inmunocromatográficas (ICS) para los mismos tipos de sangre. También está disponible
una prueba en tubo de gel para felinos.
Los kits de aglutinación en tarjetas constan de áreas marcadas impregnadas de
anticuerpos monoclonales que se unen al antígeno de interés; anticuerpos para DEA 1 en
perros y para A y B en gatos. La sangre del receptor se mezcla primero con solución
salina tamponada con fosfato para mantener el pH y la osmolalidad de las células, luego
la mezcla se deja caer sobre la tarjeta donde se mezcla con el anticuerpo. Si el antígeno
está presente (es decir, el paciente tiene un resultado positivo para ese tipo de sangre),
debe producirse una aglutinación visible de los glóbulos rojos en la tarjeta, ya que están
entrecruzados por anticuerpos. El
 R. Zaremba et al. / Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46 41

Figura 4.Tarjeta de tipificación sanguínea

(A)El control positivo muestra aglutinación, pero la prueba del paciente no muestra aglutinación. Esto se interpretaría como una prueba DEA 1 negativa. (B)El paciente canino
La prueba muestra una aglutinación similar a la del control positivo. Este paciente sería reportado como DEA 1 positivo. (C)Esta prueba de paciente felino muestra aglutinación en el cuadro tipo A, lo que
indica que el paciente es tipo A. Ninguno de los pacientes se autoaglutina, como lo demuestra la falta de aglutinación en el cuadro "pantalla de solución salina de autoaglutinación".

Las tarjetas son fáciles de usar y producen un resultado visual obvio positivo
(aglutinación) o negativo (sin aglutinación) (figura 4). Sin embargo, si el animal
presenta autoaglutinación, como en el caso de IMHA, la interpretación de los
resultados puede ser confusa. Una vez que la muestra comienza a secarse, la
aglutinación ya no se puede distinguir de la deshidratación y aglomeración de la
muestra, por lo que la prueba debe interpretarse inmediatamente. Aunque la
tipificación con tarjeta es razonablemente precisa, mostró la precisión más baja
(91,4%) en comparación con otros métodos de tipificación de sangre canina y
felina (ICS, ensayo de tubo de gel) en estudios recientes.46,47Por lo tanto, cuando
se tipifica con fines no urgentes, como la selección de donantes o la reproducción
de animales, se prefieren métodos de laboratorio comerciales más precisos.46,47
Una segunda opción para el tipaje sanguíneo interno es el ensayo ICS que impregna
una tira de papel con una línea de anticuerpo monoclonal para DEA 1 en perros o 2 líneas
con anticuerpos para Tipo A y B en gatos (Higo 5). La sangre del receptor se mezcla con
un tampón en un pocillo de prueba y luego se deja absorber la tira. Si los glóbulos rojos
se unen al anticuerpo dentro de la línea, quedan atrapados dentro de la línea de la tira.
La hemoglobina en los glóbulos rojos crea así una franja roja visiblemente más oscura, lo
que indica un resultado positivo (Higo 5). La presencia o ausencia de la franja roja puede
ser menos subjetiva en la interpretación que la aglutinación. Sin embargo, debido a que
el cambio de color depende de la presencia de hemoglobina para crear un resultado
visible, el cambio de color puede ser débil en animales severamente anémicos, creando
dificultades en la interpretación. Se ha demostrado que este método es 100% específico
para la detección de DEA 1 y tipos de sangre felino A, y 97,1% específico para felino tipo
B.46,47Por lo tanto, cuando la tira indicadora es positiva, la prueba se puede considerar
correcta (un verdadero positivo). Sin embargo, se demostró que el ensayo ICS tiene solo
un 88%, 97,7% y 95,7% de sensibilidad para esos antígenos, respectivamente, por lo que
es posible que se produzcan falsos negativos en raras ocasiones. También se supone que
este método se ve menos afectado por la autoaglutinación en comparación con otros
métodos en estudios recientes.46,48
el estándar de oro.24,46,47En esta prueba, los glóbulos rojos se incuban con
anticuerpos contra un tipo de sangre específico en un tubo, y luego se centrifugan
y se resuspenden para evaluar la hemólisis o aglutinación, similar a un ensayo en
tubo de compatibilidad cruzada (ver más abajo).
Se ha modificado una versión interna del método del tubo añadiendo
una matriz de gel de dextrano-acrilamida impregnada con un anticuerpo
contra el tipo de sangre de interés. La sangre del receptor se coloca encima
de la matriz y luego el tubo se centrifuga según las pautas del fabricante. En
estudios recientes, se demostró que un método de tubo a base de gel es la
prueba de cabecera más precisa (99,4 % de precisión en gatos, 100 % en
perros) para determinar el grupo sanguíneo DEA 1 y AB felino;
Desafortunadamente, esta prueba ya no está disponible por parte del
fabricante. Una prueba similar de otro fabricante no se ha comparado
directamente con otras metodologías, pero actualmente está disponible
para gatos.46,47En esta prueba, si las células pueden moverse libremente a
través del gel para sedimentarse en el fondo, entonces son un gato tipo B.
Sin embargo, si hay glóbulos rojos y aglutinados dispersos por todo el gel,
se considera un gato tipo AB.
Actualmente, Animal Blood Resources International es el único laboratorio comercial
en los Estados Unidos que realiza tipificación sanguínea extendida para caninos, con
tipificación DEA 1, 4, 5 y 7 disponible al momento de escribir este artículo. Actualmente
no es posible escribir DEA 3, 6 y 8 debido a la falta de antisueros.2,23Actualmente, la
tipificación para gatos está ampliamente disponible solo para los tipos de sangre A, B y
AB. Tipificación de los antígenos recién descubiertos Dal,Kai, ymikActualmente solo están
disponibles a través de instalaciones de investigación seleccionadas si hay anticuerpos
disponibles.24
Pruebas cruzadas
La compatibilidad cruzada es un método serológico que se utiliza para detectar incompatibilidades

entre la sangre del donante y del receptor. Detecta una reacción general entre un donante y un receptor

Si se requiere tipificación extendida (más allá de DEA 1 o felino A, B y AB), específicos y, por lo tanto, puede detectar reacciones de anticuerpos contra antígenos de tipos sanguíneos

generalmente se emplea el método del tubo, ya que se considera conocidos, así como aquellos que no se han analizado.
42 R. Zaremba et al. / Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46

Figura 5.tipificación sanguínea del ensayo ICS

(A)Ejemplo de un tipo de sangre DEA 1 positivo como lo indica la presencia de una línea roja en el campo “DEA 100espacio (flecha). (B)Ejemplo de un felino tipo A como lo indica la presencia de un
línea roja en el espacio “A” (punta de flecha) y falta de línea en el espacio “B” (punta de flecha abierta). Para todas las pruebas de ICS, debe estar presente una línea roja sólida en el espacio de control (indicada por la letra C)
para que la prueba sea válida.

mediante tipificación sanguínea.2,3Sangremecanografía puede determinar la presencia de un
conocido aloantígeno (es decir, DEA 1 está presente). A diferencia de,pruebas cruzadas puede
determinar si se está produciendo una reacción general de anticuerpos y/o antígenos contra los
glóbulos rojos en la muestra mezclada, pero NO identifica qué anticuerpo está reaccionando con
qué antígeno. La base de todas las pruebas cruzadas actuales implica mezclar muestras del
receptor y del donante y detectar anticuerpos que se unan a los antígenos de superficie de los
glóbulos rojos. El crossmatch generalmente se realiza en 2 partes: un crossmatch mayor y otro
menor.
En la prueba cruzada principal, los glóbulos rojos del donante se mezclan con el
plasma del receptor y se evalúan en busca de evidencia de unión de anticuerpos en el
plasma a los glóbulos rojos del donante, representada por hemólisis o aglutinación.3,49La
prueba cruzada menor es similar, pero mezcla plasma de donante con glóbulos rojos del
receptor para detectar anticuerpos en el plasma del donante que reconocen los glóbulos
rojos del receptor.3,49El objetivo final de las pruebas cruzadas es evitar reacciones
transfusionales inmunomediadas que resulten en hemólisis inmediata.3,50,51Sin embargo,
incluso con una prueba cruzada compatible, no se garantiza la supervivencia adecuada
de los glóbulos rojos y/o la eliminación completa de las reacciones a la transfusión, ya
que los títulos bajos de anticuerpos anti-RBC pueden no causar suficiente aglutinación
para la detección, pero aun así pueden provocar una reacción a la transfusión.2,3,49
Además, el cruce evalúa el estado inmunológico actual de las muestras; no se puede
utilizar para determinar la compatibilidad para futuras transfusiones. Incluso si se utiliza
el mismo donante que era “compatible” inicialmente, si el paciente tiene
Si posteriormente se sensibilizara a esa sangre, sería necesaria una segunda
prueba cruzada para detectarlo.2,3La interpretación de algunos ensayos también
puede verse obstaculizada por procesos patológicos que causan autoaglutinación,
como la IMHA.2,3Además, como se discutió conmikAunque las pruebas cruzadas
pueden detectar la presencia de aloanticuerpos preexistentes que no se detectan
mediante tipificación, no pueden determinar si esos anticuerpos realmente
causarán o no una reacción a la transfusión clínicamente significativa. Por último,
es importante recordar que estos métodos de detección no pueden prevenir otros
tipos de reacciones transfusionales, como la sobrecarga de volumen o la
contaminación de productos sanguíneos.
Generalmente se recomiendan pruebas de compatibilidad cruzada en todos los
gatos antes de la transfusión de glóbulos rojos y en cualquier perro con antecedentes de
transfusión previa o con antecedentes de transfusión desconocidos.2,3,37Debido a que
generalmente se dice que los caninos carecen de aloanticuerpos naturales contra otros
tipos de sangre, no es raro que los veterinarios renuncien a la tipificación y las pruebas
cruzadas de los perros antes de la primera transfusión. Una encuesta realizada en
hospitales universitarios y de referencia veterinaria indicó que sólo el 15% de los
profesionales realizaban pruebas cruzadas rutinarias con perros antes de la transfusión.
52Sin embargo, si bien el riesgo de AHTR no aumentó al evitar la prueba cruzada, el uso
de sangre compatible con la prueba cruzada puede mejorar la duración de la
supervivencia de los glóbulos rojos en el receptor. Un estudio retrospectivo en perros y 2
estudios en gatos han demostrado que la transfusión de sangre compatible con pruebas
cruzadas aumentó el PCV post-transfusión y mejoró
 R. Zaremba et al. / Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46 43

Tabla 2 las muestras mayores, menores y de control del paciente vienen precargadas con
Técnica estándar de ensayo de aglutinación en tubo de laboratorio para pruebas cruzadas gel de dextrano-acrilamida. De manera similar a la prueba en tubo descrita

1. Obtenga sangre tanto del donante como del receptor en un tubo de ácido
etilendiaminotetraacético (EDTA) y en un tubo sin aditivos. Si se utiliza una unidad de
eritrocitos almacenada, se puede extraer sangre del pigtail para realizar pruebas cruzadas.
2. Centrifugar y separar el plasma y el suero de los glóbulos rojos. Transfiera el
suero a un tubo aparte sin aditivo (tapa roja). Deseche el plasma del tubo de
EDTA.
3. Recoja 0,25-0,5 ml de glóbulos rojos del tubo de EDTA y agregue 1,5 ml de solución salina tamponada
con fosfato (PBS).
a. Centrifugar durante 45 segundos, decantar la solución salina y repetir 3 veces.
4. Resuspender las células en PBS para preparar una solución al 3%-5% para preparar una “suspensión de glóbulos
rojos” (aproximadamente 4 ml de volumen total).
anteriormente, el suero y los glóbulos rojos se separan y los glóbulos rojos se
lavan para eliminar cualquier autoanticuerpo que se una a los glóbulos rojos antes
de combinar los glóbulos rojos con el suero en el tubo. El gel permite que los
glóbulos rojos compatibles se filtren hasta el fondo del tubo después de la
incubación y centrifugación a temperatura ambiente, pero atrapa los glóbulos
rojos aglutinados encima o dentro del gel.41,44Una prueba incompatible está
indicada por la mayoría de los glóbulos rojos agrupados dentro de la matriz
suspendida o encima del gel después de la centrifugación (no llegan células al
fondo del pocillo) (figura 6). El número de células encima o dentro del gel se

5. Etiquete los tubos para realizar las siguientes mezclas:

a.Cruce importante:2 gotas de suero del paciente con 2 gotas de suspensión de glóbulos rojos del donante
b.Cruce menor:2 gotas de suspensión de glóbulos rojos del paciente con 2 gotas de suero de donante
C.Control:1 gota de suspensión de glóbulos rojos del paciente con 2 gotas de suero del paciente
6. Centrifugue todos los tubos durante 20 segundos y luego mezcle suavemente para resuspender el botón
celular.
7. Incubar todos los tubos durante 30 minutos a 35-39°C.
8. Centrifugue los tubos durante 20 segundos y luego observe si hay hemólisis en el tubo
y golpéelo para resuspender el botón celular.
9. Agregue una gota de suspensión a un portaobjetos y examine si hay aglutinación macroscópica o
hemólisis.
10. Evalúe la misma gota de suspensión microscópicamente a baja potencia.
11.Interpretación de resultados:
a. Si se observa hemólisis o aglutinación macroscópicamente, o si la aglutinación se
observa microscópicamente, el donante se considera incompatible.
b. Si el tubo de control es positivo para hemólisis o aglutinación se debe repetir la prueba
y si aún es positivo la prueba se considera incompatible.
clasifica en una escala de 0 a 4+ (siendo 0 un resultado compatible: no hay células
encima del gel).50
En general, se ha observado una concordancia moderada entre el tubo
de gel y el método SL estándar de oro; un estudio encontró una
especificidad relativa del 96 % (no se pudo determinar la sensibilidad debido
al bajo número de pruebas incompatibles).53Sin embargo, otro estudio
informó que todos los perros analizados (35 de 35) resultaron compatibles
mediante el ensayo en tubo de gel, pero el 45,7% (16 de 35) resultaron
incompatibles mediante la prueba SL estándar de oro.50Los autores
concluyeron que esto puede deberse a que la matriz del gel permite que
pequeñas cantidades (1+) de aglutinación se filtren a través del gel, mientras
que la prueba SL también pudo detectar estos agregados mediante
observación visual a nivel microscópico.12,53Se observaron niveles más altos
de concordancia entre el método SL y el método basado en gel cuando la
aglutinación fue más significativa (-3+).12,53

ICS
duración del aumento de PCV en el receptor17,39,40en comparación con transfusiones de
tipo compatible, pero no de tipo cruzado. Las decisiones sobre la necesidad de pruebas
De manera similar a la metodología de prueba ICS utilizada para la tipificación
cruzadas en un caso clínico deben equilibrarse con la metodología de pruebas cruzadas
sanguínea, hay disponible comercialmente un ensayo de compatibilidad cruzada en el
utilizada y la urgencia del estado clínico del paciente, ya que es posible que no sea
lugar de atención (ICS) para perros y caballos.34,48Después de lavar los glóbulos rojos y
posible desde el punto de vista práctico o financiero realizar pruebas cruzadas con todos
mezclar los glóbulos rojos y el plasma con tampón en un pocillo, se deja que la mezcla
los receptores y donantes.
absorba una tira de papel impregnada con antiglobulinas anticaninas en un área de la
línea del detector. Las antiglobulinas anticaninas pueden detectar inmunoglobulina G,
Métodos de prueba cruzada
inmunoglobulina M y/o componente del complemento C3 unido a los glóbulos rojos y
atrapar estos glóbulos rojos dentro de la línea del detector, volviéndola roja
Ensayo de aglutinación en tubo de laboratorio estándar
(incompatible). En otras palabras, una línea roja indica que la interacción de la muestra
del donante y/o del receptor ha resultado en un recubrimiento de los glóbulos rojos con
Actualmente, el método estándar de oro de compatibilidad cruzada en los Estados
inmunoglobulinas o C3 y, por lo tanto, es incompatible (figura 7).34,48
Unidos es el ensayo de aglutinación en tubo (SL) de laboratorio estándar que
generalmente se realiza en un centro de patología clínica. Para obtener una descripción
Una ventaja informada de esta prueba según el fabricante es que grandes grupos de
de esta técnica tal como se realiza en nuestra institución, consulteTabla 2. En resumen, la
glóbulos rojos autoaglutinados no deberían poder absorber la tira de papel, lo que
técnica SL implica separar los glóbulos rojos y el plasma, lavar los glóbulos rojos (para
reduce las posibilidades de que la autoaglutinación (como en los casos de IMHA) cause
eliminar los autoanticuerpos) y mezclar los glóbulos rojos y el plasma del receptor y del
resultados falsos positivos.34,48,54Un estudio que utilizó el método ICS para evaluar la
donante en tres tubos separados: el primero para la prueba cruzada mayor, el segundo
compatibilidad con transfusiones en perros encontró que todos los perros
para la prueba cruzada menor y el tercero. tubo como control (sangre del receptor y
autoaglutinantes (norte =8) pudieron ser evaluados como compatibles con un donante
plasma del receptor) para detectar autoaglutinación. Después de combinar las muestras,
mediante la metodología de compatibilidad cruzada de ICS.34Actualmente, las pruebas
el contenido de cada tubo pasa por múltiples pasos de lavado, centrifugación e
ICS solo están disponibles para perros, pero el fabricante está desarrollando una prueba
incubación a 35-39°C. El objetivo de estos pasos es eliminar cualquier anticuerpo que no
felina.55
esté unido a un antígeno de glóbulos rojos y garantizar que las temperaturas sean
La comparación de los pros y los contras de cada tipo de prueba cruzada
apropiadas para la unión de la "aglutinina caliente". Luego, los tubos se califican
descrita se describe enTabla 3.
visualmente en cuanto a macroaglutinación, microaglutinación y hemólisis en una escala
subjetiva de 0 a 4+.2,3,49,50La hemólisis y/o aglutinación causada por la interacción
antígeno-anticuerpo indica incompatibilidad entre donante y receptor. Si se observa Resumen y direcciones futuras
hemólisis o aglutinación en el tubo de control del paciente incluso después de los pasos
de lavado, entonces el paciente se está autoaglutinando (como en IMHA) y la prueba no Si bien las pruebas con tubos todavía se emplean comúnmente para tipificar la
puede determinar con precisión la compatibilidad entre el paciente y el donante.50 sangre y realizar pruebas cruzadas en la medicina humana, los avances en la
seguridad y la tecnología de los bancos de sangre se están expandiendo. Las
técnicas automatizadas, como el uso de tecnología de microplacas para examinar
Ensayo de tubo de gel múltiples muestras simultáneamente en un corto período de tiempo, están
mejorando la eficiencia de la detección de donantes y pueden reducir los costos
La metodología del ensayo de tubo de gel es una prueba de compatibilidad cruzada en el asociados con la tipificación sanguínea y las pruebas cruzadas cuando se realizan
lugar de atención diseñada para usarse en la clínica. Tubos de ensayo utilizados para evaluar. a gran escala.56
44 R. Zaremba et al. / Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46
Figura 6.Ensayo canino en tubo de gel
(A)La mayoría de los glóbulos rojos (RBC) han viajado a través de la matriz y hasta el fondo del pozo. Esto es indicativo de una prueba cruzada negativa (compatible). (B)Los glóbulos rojos tienen
se aglutina y no puede migrar a través del gel, lo que indica una prueba cruzada positiva (incompatible).
Además, la tipificación sanguínea molecular mediante la reacción en cadena de la
polimerasa para detectar variaciones en el tipo de sangre humana en donantes y receptores está
permitiendo una tipificación sanguínea estandarizada, precisa y extendida en humanos.21,57
Combinadas con sistemas de gestión de bases de datos, las pruebas de reacción en cadena de la
polimerasa amplían enormemente la capacidad de almacenar y buscar rápidamente estos datos
en busca de productos sanguíneos compatibles, incluso en pacientes humanos con tipos de
sangre raros.57Además, la investigación de receptores sintéticos para que los antígenos de la
superficie celular reemplacen los anticuerpos monoclonales puede mejorar la coherencia y la
precisión en la detección de antígenos de glóbulos rojos.57
Si bien la medicina veterinaria va a la zaga de la medicina humana en cuanto a escala y
tecnología de bancos de sangre, la investigación futura sobre la estructura y función de los
antígenos de superficie de los glóbulos rojos en especies veterinarias mejorará nuestra
capacidad para caracterizar los grupos sanguíneos y, con suerte, conducirá al desarrollo de
técnicas moleculares para la tipificación sanguínea y las pruebas de compatibilidad. en nuestra
especie de interés. Una mayor disponibilidad de metodologías de prueba en más especies
mejorará el acceso a la tipificación sanguínea y las pruebas cruzadas. Finalmente, en una sinergia
entre la medicina humana y veterinaria, el trabajo continuo para mejorar la seguridad de los
portadores de oxígeno acelulares basados en hemoglobina en la medicina humana puede
conducir al desarrollo de productos que puedan reemplazar las transfusiones que contienen
glóbulos rojos en el futuro, especialmente en pacientes que han demostrado ser incompatibles.
con productos sanguíneos disponibles.57
Mientras tanto, se espera que el reciente aumento de las pruebas disponibles
comercialmente para tipificación sanguínea y pruebas cruzadas permita a los veterinarios
minimizar las reacciones a las transfusiones y hacer que las transfusiones de sangre sean más
seguras para nuestros pacientes. La importancia del acceso a metodologías precisas de
tipificación y pruebas cruzadas se ve subrayada por el descubrimiento de nuevos antígenos
eritrocitos tanto en perros como en gatos. Comprender las pruebas disponibles, así como las
limitaciones de estas pruebas para predecir y prevenir reacciones transfusionales clínicamente
relevantes, es importante para cualquier persona que administre productos de eritrocitos a
pacientes caninos y felinos.
Expresiones de gratitud
- Fotos de aglutinación cortesía del Dr. Craig Thompson, DVM,
DACVP, Universidad Purdue, West Lafayette, IN.
- Fotos de pruebas cruzadas de tipificación sanguínea con tarjeta y prueba de tubo de gel.
ensayo de DMS Laboratories, Inc., Flemington, Nueva Jersey,www.rapidvet.com
- Foto de tira inmunocromatográfica del tipo de sangre de perro, cortesía
del Centro de donación de sangre del IndyVet Emergency & Specialty Hospital,
Indianápolis, IN.
 R. Zaremba et al. / Temas en Companion An Med 34 (2019) 36-46 45

Figura 7.Prueba cruzada de ensayo ICS - Canino

(A)Ejemplo de una prueba cruzada mayor compatible. Esto se atribuye a la falta de cambio de color/línea roja en el espacio “XM” (flecha). (B)Ejemplo de cruce menor incompatible
fósforo. Esto se atribuye al cambio de color (débil)/línea roja en el espacio “XM” (punta de flecha). Debe estar presente una línea roja sólida en el espacio “C” (control) para que la prueba cruzada se
considere válida.

Tabla 3
Comparación de técnicas de Crossmatch

Técnica cruzada Ventajas Desventajas

Tubo de laboratorio estándar (SL) Se puede completar en cualquier práctica. No existe un protocolo universal para su cumplimentación y/o interpretación.
ensayo de aglutinación Puede usarse en cualquier especie Estándar de oro actual en Consume mucho tiempo (al menos 1 hora para completarlo) Requiere entrenamiento avanzado
medicina veterinaria Resultados subjetivos No es una reacción estable
Afectado por la autoaglutinación
Ensayo de tubo de gel Fácil de realizar sin necesidad de formación adicional Requiere 2 kits para realizar crossmatch mayor y menor
Tiempo para completar: 20-30 min Requiere Sólo disponible en especies caninas y felinas. Afectado por la autoaglutinación.
menos sangre que el método SL Reacción Concordancia moderada con el método SL.
estable No hay publicaciones disponibles que evalúen el uso en gatos. Requiere 2 kits
inmunocromatográfico Fácil de realizar sin necesidad de formación adicional para realizar pruebas cruzadas tanto mayores como menores.
tira (ICS) Tiempo para completar: 20-30 min Requiere menos sangre La interpretación se basa en el color y puede verse afectada por anemia
que el método SL grave, plasma ictérico y/o hemolizado.
Posible reducción de la probabilidad de falsos positivos Actualmente sólo disponible en caninos Aún
debido a la autoaglutinación no se ha comparado con el método SL

Materiales complementarios
El material complementario asociado con este artículo se puede
encontrar en la versión en línea en doi:10.1053/j.tcam.2018.12.005.
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