Guía de Prácticas de Laboratorio

ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO
FACULTAD: CIENCIAS
ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA
GUÍA DE LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA

PRÁCTICA No. 01
“OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE CORTES DE TEJIDOS Y ÓRGANOS DEL
SISTEMA LINFOIDE”
1. DATOS GENERALES:
FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

19/11/2019 26/11/2019
2. DOCENTE: BQF. Irvin Tubon. PhD.
3. OBJETIVO(S)
a. GENERAL
 Identificar estructuras de tejidos y órganos del sistema lindoide.
b. ESPECÍFICOS
1. Diferenciar los órganos, células y estructuras del siistema linfoide para su

evaluación anatómica a través de la observación microscópica.
2. Reconocer la organización histológica característica de los órganos linfoides
profundizando en su arquitectura y en las características citológicas de las
células linfoides.
4. METODOLOGÍA
Luego de las instrucciones del profesor los estudiantes procederan con las actividades
prácticas, que se basan en la observación de cortes histológicos de tejidos de órganos
del sistema linfoide.
5. EQUIPOS Y MATERIALES
Conexión a internet y ordenador personal.
6. MARCO TEÓRICO
El sistema linfoide aparece representado en esta práctica como un conjunto de

preparados de órganos periféricos que incluyen tejidos MALT (apéndice y amígdala) y
órganos encapsulados como ganglio linfático y bazo, así como uno de los organos
centrales (timo). Con las secciones tenidas con HE no podemos diferenciar con
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facilidad los componentes del tejido linfoide difuso y nodular pero sí apreciar las células
más características y abundantes, los linfocitos.
7. PROCEEDIMIENTO
Ingresar a la página web https://www.uv.es/histomed/practicas/09-linfoide/09-

linfoide.htm y observar las estructuras de los tejidos linfoides que se describen.
8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Al finalizar la práctica el estudiante estará en la capacidad de diferenciar de manera
adecuada las estructuras de los órganos linfoides.
9. BIBLIOGRAFÍA
https://www.uv.es/histomed/practicas/09-linfoide/09-linfoide.htm
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FACULTAD: CIENCIAS

PRÁCTICA No. 02
“AGLUTINACIÒN (GRUPOS SANGUÌNEOS) SISTEMA ABO Y ANTI-D (ANTI-RHO)”
1. DATOS GENERALES:

26/11/2019 03/12/2019
3. OBJETIVO(S)
a. GENERAL
 Demostrar la reacciòn antìgeno-anticuerpo en antìgenos de

superficie (aglutinaciòn).
b. ESPECÍFICOS
1. Idemtificar los antìgenos de superfice del sistema ABO (Landsteiner) en

eritrocitos humanos mediante el uso de antisueros para determinar el grupo
sanguìneo.
2. Discutir la importancia de la identificaciòn del grupo sanguìneo en la pràctica
clìnica.
4. METODOLOGÍA
prácticas.
Placas portaobjeto, làpiz demogràfico, palillos de madera, lanceta estèril, torundas con
alcohol.
Suero anti-A, Suero anti-B, Factor Rh.
6. MARCO TEÓRICO
Introducciòn
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Grupo sanguìneo es cada uno de los diversos tipos en que se ha clasificado el tejido
sanguìneo en relaciòn con la compatibilidad delos hematìes (eritrocitos o glòbulos rojos)
y suero de un individuo donador de sangre con los hematìes y suero de otro individuo
que la recibe. La determinaciòn de estos grupos, que al principio se limitaban a la
selecciòn de donantes y receptores para la trasnfuciòn sanguìnea se ha extendido a la
determinaciòn de la paternidad y a la identificaciòn en criminologìa.
Estos grupos son cuatro, segùn la clasificaciòn que hizo Landsteiner, clasificaciòn hoy
universal, y se denominan: O,A,B,AB. Se caracterizan por las diferentes combinaciones
de dos aglutinògenos existenetes en los globulos rojos y de dos aglutininas contenidas
en el suero.
El factor RH es el aglutinògeno encontrado en 1940 por Landsteiner y Weiner en los
glòbulos rojos en primates (Macacus rhesus) y que tmabièn existe normalmente en 85%
de los humanos, que por esta causa se denomina Rh positivos. La sangre deèstos
transfundida a los Rh negativos(15%), provoca en el suero de estos ùltimos la formaciòn
de anticuerpos, que en sucesivas transfuciones pueden destruir los glòbulos rojos del
donante RH+invalidando asì la transfusiòn ycreando efectos adversos. Tambièn en el
embarazo, un feto Rh+ puede provocar en la madre Rh- producciòn de aglutininas que
podrìan ser la causade la enfermedad hemolìtica de los recien nacidos. El factor Rh està
constituido por un complejo de seis antìgenos fundamentales, formado por tres pares
de genes alelos: Cc, Dd, Ee. El antìgeno de mayor poder sensibilizantes es el D, le
siguen en importancias el e y el E.
La determinaciòn de grupos sanguìneos del sistema ABO se efectùa enfrentando los
hematìes problema con antisueros de especificidad conocida: anti-A, anti-B y anti-A,B
(grupo 0). La presencia del antìgeno D (Rh) se determina enfrentando los hematìes
problema en un medio proteìnico alto, con suero anti-D (Rh). La aglutinaciòn o no
aglutinaciòn de los hematìes ensayados, indica la presencia o ausencia del
correspondiente antìgeno de los mismos. La variante Du, forma dèbil del antìdeno D
(Rh), puede detectarse mejor incubando la suspensiòn de hematìes con suero anti-D
(Rh), efectuando a continuaciòn la prueba de la antiglobulina (Coombs).
Tipificaciòn sanguìnea.
Un grupo sanguìneo es una de las clasificaciones de la sangre de acuerdo con las
caracterìsticas presentes o no en las superficies de los glòbulos rojos y en el suero de
la sangre. Las dos clasificaciones màs importantes para descubrir grupos sanguìneos
en humanos son los antìgenos ( el sistema ABO) y el factor Rh. El sistema ABO fue
descubierto por Landsteiner en 1901.
GRUPO A GRUPO B GRUPO AB GRUPO O
Grupo de sangre cuyos Grupo de sangre cuyos Grupo de sangre cuyos En este grupo
glòbulos rojos tienen el glòbulos rojos tienen el glòbulos rojos tienen los sanguìneo los glòbulos
antìgeno A y, en la que antìgeno B y, en la que dos antìgenos A y B, rojos no tienen ningùn
en su plasma en su plasma pero su plasma no tiene antìgeno, pero el
encontramos el encontramos el anticuerpos. plasma tiene los
anticuerpo anti-B. anticuerpo anti-A. anticuerpos Anti-A y
Anti-B.
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Compatibilidades
Si a una persona con un tipo de sangre en particular, se le transfunde sangre deotro tipo
puede enfermar gravemente e incluso morir, poruqe se produce la aglutinaciòn de los
eritrocitos en la sangre por la uniòn del antìgueno presente en la superficie del eritrocito
con el anticuerpo disuelto en el plasma del paciente que recibe la sangre.
GRUPO SANGUÌNEO AB positivo GRUPO SANGUÌNEO O negativo

Receptor Universal Donador Universal
Puede recibir glòbulos rojos de cualquier grupo Dado que los eritrocitos de este grupo sanguìneo
sanguìneo, ya que no tiene ningùn tipo de no poseen ningùn tipo de antìgeno en la superficie
anticuerpo en el plasma. del glòbulo, pueden ser transfundidos a cualquier
persona sin desencadenar la reacciòn antìgeno-
anticuerpo.
Enfermedaddel Rh
Es provocada por una madre con Rh negativo. Los anticuerpos formados durante el
embarazo en la sangre materna destruyen los eritrocitos Rh positivos del feto. Si la
madre piensa tener un según hijo deberà aplicarse una “vacuna” que elimina los anti-
Rh, inmunoglobina Rho(D) que es un medicamento utilizado para prevenir la
isoinmunizaciòn de RhD en madres con RhD negativo y para tratar la pùrpura
trombocitopènica idiopàtica en personas con Rh positivo. A menudo se administra tanto
durante como despuès del embarazo.
Eritroblastosis Fetal
La inmunoglobulina Rho (D) debe ser aplicada dentro de las 72 horas despuès del parto,
ya que si se tiene un segundo hijo con Rh positivo la madre producirà anti-Rh en exceso
que destruirà los globulos rojos del feto, produciendo una enfermedad llamada
eritroblastosis fetal, si es que el hijo nace, dado que por la producciòn en exceso de los
anti-Rh el hijo puede morir intrauterinamente.
Importancia Clìnica
Los grupos sanguìneos Rh tienen un inetrès clìnico similar a los grupos ABO dada su
relaciòn con la enfermedad hemolìtica del recièn nacido y su importancia en la
transfusiòn.
 Si el paciente es Rh positivo, puede recibir sangre Rh positivo o Rh negativo.
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 Si el paciente es Rh negativo, puede recibir unicamente sangre Rh negativo.
7. PROCEDIMIENTO
1. Limpiamos la zona de punciòn con una torunda impregnada con alcohol.

2. Realizamos la punciòn con la lanceta.
3. Depositamos de forma separada 3 gotas de sangre sobre la placa
portaobjeto.
4. Colocamos una gota de cada uno de los reactivos de forma separada en
cada gota de sangre ( Suero anti-A, Suero anti-B y Factor Rh).
5. Mezclamos cada mezcla con los palillos de madera, evitando contaminaciòn.
6. Observamos la aglutinaciòn.
8. INTERPRETACIÒN DE RESULTADOS
Si al tèrmino del periodo de reacciòn no existiese ningùn sigo visible de aglutinaciòn,

se interpretarìa como una reacciòn negativa a ese antisuero.
En cambio, si la reacciòn es positiva, se observa que los hematìes aglutinan en
segundos. Sin embargo, paradetectar los subgrupos màs dèbiles de A debe agitarse
un perido màs largo de tiempo, puesto que el suero anti-A puede aglutinar con cierta
demora. La ausencia de aglutinaciòn de los sueros anti-A, B confirmarà a la sangre
del grupo O.
Al finalizar la pràctica el estudiante estarà en la capacidad de realizar la tipificaciòn

de grupos sanguìneos mediante pruebas de aglutinaciòn sencillas.
10. BIBLIOGRAFÌA:
ARCE MENDOZA, Alma Yolanda; ROSAS TARACO, Adrriàn Geovanni; RODRIGUEZ

TOVAR, Luis Edgar. Pràcticas de inmunologìa general aplicada y veterinaria 2007.
COSSIO ANDIA, Eddy,et al. Tipificaciòn del grupo sanguìneo ABO y el factor Rh en la
poblaciòn de Totora-Cochabamba gestiòn 2012. Revista Cientìfica Ciencia Mèdica,
2013, vol. 26,no 1, p. 25-27.
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FACULTAD: CIENCIAS

PRÁCTICA No. 03
“ESTIMACIÒN DEL ÌNDICE OPSONOCITOFÀGICO ( FAGOCITOSIS)”
1. DATOS GENERALES:

10/12/2019 17/12/2019
3. OBJETIVO(S)
a. GENERAL
 Evaluar la funciòn fagocìtica de PMN y macròfagos mediante opsonizaciòn de

microorganismos.
b. ESPECÍFICOS
1. Adquirir destrezas en la separaciòn de PMN y macròfagos a partir de sangre

venenosa.
2. Comprender en la pràctica el proceso de opsonizaciòn y desactivaciòn del
complemento.
4. METODOLOGÍA
prácticas.
Tubos para colecciòn de muestras de sangre, heparina, PBS, Sal balanceada de Hank,
jeringa, medidor de pH, centrìfuga, hemocitòmetro, micropipetas, baño termostatizado,
autoclave, mechero, asa para cultivo microbiano, colorante de Wright, agua destilada,
microscopio.
6. MARCO TEÓRICO
La ingestiòn de microorganismos por parte de cèlulas fagocìticas es un proceso activo

que requiere la producciòn de energìs por la cèlula fagocìtica. La internalizaciòn de
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microorganismos cubiertos con anticuerpos y con molèculas del complemento tiene
lugar ràpidamente despuès de que su superficie hace contacto con los
polimorfonucleares (PMN) y macròfagos.
El tèrmino fagocitosis generalmente se limita a la evaluaciòn del paso inicial de la
destrucciòn bacteriana. El fundamento del mètodo para evaluar la fagocitosis es
simple. Los leucocitos son incubados con bacterias u hongos ( Staphylococcus aureus
o Candoda albicans), los cuales van a ser opsonizados por molèculas como el
componente C3b de complemento o por anticuerpos opsònicos. Posteriomente, el
microorganismo opsonizado va a ser fagocitado por los PMN o el macròfago, las cèlulas
son teñidas con el colorante de Wright y se determinarà el ìndice opsonocitofìgico en
cada muestra.
7. PROCEDIMIENTO
Tècnica para evaluaciòn dela fagocitosis

1. Extraer de 5 a 10 mL de sangre venenosa con y sin heparina.
2. Se dejan sedimentar los tubos de la muestra y un testigo po 2h y en hielo.
3. Separar el plasma y el suero, respectivamente. Las cèlulas con restos de plasma
se lavaràn tres veces con PBS pH 7.2 (2mL aproximadamente cada vez),
resuspender y centrifugar a 1200 rpm por 8 min cada vez.
4. Despuès del ùltimo lavado resuspender en 2 mL de RPMI 1640 o en su defecto
soluciòn balanceada de Hank.
5. Contar el nùmero de cèlulas por ,ililitro realizando una diluciòn 1:10, ajustar a
una concentraciòn de 2x10 cèlulas/mL.
6. Despuès de se`parar el suero aquel se divide en dos porciones de 1 mL cada
una.
7. El suero A se coloca en un baño de agua a 56 grados centìgrados por 30 min.
8. Se prepara una suspensiòn de Staphylococcus aureus ( una asada del
microorganismo en 2 mL de PBS).
9. Preparar la mezcla como se muestra en el cuadro siguiente.
Mezcla nùmero 1 Mezcla nùmero 2

Suero activado (sueroB) 0.5mL Suero inactivado (suero A) 0.5mL
Suspensiòn cèlulas blancas 0.5mL Suspensiòn cèlulas blancas 0.5mL
Suspensiòn bacteriana 0.5mL Suspensiòn bacteriana 0.5mL
10. Incubar las mezclas a 37 grados centìgrados por 30 min.

11. Se centrifugan los tubos a 1300 rpm por 5 min con la finalidad de concentrar la
muestra. Se realiza un frotis de ambas mezclas.
12. Se realiza la tinciòn de Wright. Se coloca el colorante de Wright y se deja por 1
min, trnascurrido este tiempo y sin lavar, se le agrega PBS y se deja por 5min,
al finalizar el tiempo el portaobjetos se lava con agua destilada y se deja secar.
13. Observar al microscopio.
14. Calcular el ìndice opsonocitifàgico con la siguiente expresiòn.
% cèlulas fagocìticas de suero activado

10=
% cèlulas fagocìticas de suero inactivado
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Al finalizar la práctica el estudiante estará en la capacidad de determinar el ìndice

opsonocitofàgico y evaluar la fagocitosis de leucocitos activados.
9. BIBLIOGRAFÍA
ARCE MENDOZA, Alma Yolanda; ROSAS TARACO, Adrrian Geovanni; RODRIGUEZ

TOVAR, Luis Edgar. Prácticas de inmunología general aplicada y veterinaria. 2007.
STOLLERMAN GH, RYTEL M, ORTIZ J: Accessory plasma factors involuved in the
bactericidial test for type-specific antibody to group A Streptococci. II. Human plasma
cofactor (s) enhancing opsonization of encapsulate organisms. J Exp Med.
1963,1;117:1-17.
LEON AP, OSOLLO G, CANO C: Natural innate immunity for Brucella melitensis. i.
relation with properdin, complement, bactericidial properties of serum and the formation
of specific antibodies. Rev Inst salubr Enferm trop. 1962,22:145-72
MESSNER RP, LAXIDIAL T, QUIE PG, WILLIAMS RC Jr: Serum opsonin, bacteria, and
polymorphonuclear leukocyte interactions in subacute bacterial endocarditis. Anti-
gamma-globulin factors and their interaction with specific opsonins. J Clin Invest.
1968,47(5):1109-20.
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FACULTAD: CIENCIAS

PRÁCTICA No. 04
“AISLAMIENTO DE NEUTRÒFILOS, OPSONIZACIÒN DE ANTÌGENO Y
EVALUACIÒN DE LA RESPUESTA INFLAMANTORIA”
1. DATOS GENERALES:

10/12/2019 17/12/2019
3. OBJETIVO(S)
a. GENERAL
 Aplicar diferentes principios para la evaluaciòn de la respuesta inflamatoria de

neutròfilos aislados.
b. ESPECÍFICOS
1. Aislar neutròfilos a partir de sangre perifèrica mediante la aplicaciòn de

gradiente de densidad y centrigugaciòn.
2. Evaluar la respuesta inflamatoria de neutròfilos por medio de la mediciòn de
su reacciòn con zimosan A opsonizado y sales de tetrazolio.
4. METODOLOGÍA
prácticas.
Tubos para la recolecciòn de sangre, heparina, agua inyectable, cloruro de sodio,
cloruro de potasio, fosfato monobàsico de potasio, fosfato dibàsico de potasio,
glucosa, bicarbonato de sodio, filtros de jeringa 0.22 um, sal de tetrazolio soluble
(WST-1), zimosan A, hemocitòmetro, micropipetas, jeringas, baño marìa,
microplacas de 96 pocillos, lector de microelisa, àcido acetilsalicìlico, centrìfuga,
Ficoll Hypaque plus.
6. MARCO TEÓRICO
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El uso de diversos agentes formadores de gradientes, ha permitido el aislamiento de
leucocitos ( neutròfilos y especialmente cèlulas mononucleares) y trae consigo uno delos
mejores mètodos, ya que ahora se sabe que estas cèlulas de la sangre pueden aislarse
de manera sencilla empleando agentes como Ficoll-Hypaque, Ficoll-Diatrizoato, y,
sacarosa; las cuales contienen una densidad aproximada de 1.077. esta densidad
permite la separaciòn òptima de monocapascelulares cuyas poblaciones estaràn
integradas por neutròfilos, linfocitos y monocitos. Los linfocitosy monocitos son
catalogados como cèlulas mononucleares, tan importante funciòn se sabe que
desempeñan estas cèlulas en diversas enfermedades que su aislamiento para la
comprensiòn del papel ha sido perfeccionado desde hace ya varios años. Las primeras
tècincas se basaban solamente en el aislamiento de monocitos, dada su capacidad de
adherirse a las superficies de vidrio (fibra de vidrio), permitìa un mètodo simple y sencillo
de aislarlos.
7. PROCEDIMIENTO
Se aìslan neutròfilos utilizando Ficoll- Paque y centrifugaciòn, para lo cual a un tubo de
ensayo adecuado se añaden heparina ( 5000 Ul/mL), sangre venenosa y soluciòn
modificada de Hank´s en proporciòn (3 cuidando que el àngulo de adiciòn sea siempre
de 60 grados, los tubos se centrifugan a 1500 rpm durante 30 min. La fracciòn de
neutròfilos es entonces elevada con su equivalnte a 3 volùmenes de soluciòn modificada
de Hank`s, se centrifuga y descarta el sobrenadante, se adiciona una gota de NH4Cl
0.83% y soluciòn modificada de Hank`s y se centrifuga. Una vez culminado el proceso
de aislamiento de neutròfilos se agrega 1mL de soluciòn modificada de hank`s al pallete
y se realiza el contaje de hemocitòmetro, al final los neutròfilos se suspenden a la
densidad de 107 cèlulas/mL utilizando un volumen adecuado de soluciòn modificada de
Hank`s.
Poeteriormente, se colocan en cada pocillo de una microplaca de 96 pocillos: 140 uL
de suspensiòn de neutròfilos, 100 uL de controles (positivos DMSO 5% y negativo Tritòn
X-100 0.1%) /referencia (àcido acetilsalicìlico a las mismas concentraciones de prueba)/
muestra de 10 uL de sal soluble de tetrazolio /WST-1). La mezcla anterior se incuba
durante 30 min a la temperatura de 37 grados centìgrados, finalmente, el color
desarrollado se mide a la longitud de onda de 450 nm mediante un lector de microplacas.
Se deben realizar al menos tres determinaciones por control/blanco/muestra. El càlculo
del porcentaje antiinflamatorio se calcula mediante la siguiente expresiòn:
%ANTIINFLAMATORIO= 100 - (AM X 100 )

ADMSO
Donde: AM corresponde a la absorbancia de la muestra y ADMSO la absorbancia de
control.
Opsonizaciòn de Zymosan A.- Para la opsonizaciòn del zymosan se incuba con suero
fresco durante 30 min a 37 grados centìgrados en agitaciòn manteniendo la proporciòn
de 1mL de suero por cada 3mg de zymosan.
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Al finalizar la práctica el estudiante estará en la capacidad de aislar leucocitos, entender
el proceso de opsonizaciòn de antìgenos y la evaluaciòn de la respuesta inflamatoria de
neutròfilos aislados.
9. BIBLIOGRAFÍA
Berridge M V, Tan ANS, Mccoy KD, Wang RUI. The Biochemical and Cellular Basis of
Cell Proliferation Assays that Use Tetrazolium Salts. Biochemica.
1996;(4):14-9.
Tan As, Berridge M V. Superoxide produced by activated neutrophils efficiently reduces
the tetrazolium salt, WST-1 to produce a soluble formazam: a simple colorimetric assay
for measuring respiratory burst activation and for screening anti-inflammatory agents. J
Immunol Methods. 2000;238:59-68.
Choudhary MI, Jalil As Rahman A. Bioactive phenolic compounds from a medicinal
lichen, Usnea longissimi. Phytochemistry. 2005;66:2346-50.
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FACULTAD: CIENCIAS

PRÁCTICA No. 05
“CONTEO DE CÈLULAS Y DETERMINACIÒN DE LA VIABILIDAD CELULAR CON
AZUL TRIPÀN”
1. DATOS GENERALES:

07/01/2020 14/01/2020
3. OBJETIVO(S)
a. GENERAL
 Aplicar tècincas de contaje celular para evaluar viabilidad celular mediante la

aplicaciòn del colorante vital azul tripàn.
b. ESPECÍFICOS
1. Adquirir destrezas en la manipulaciòn y contaje celular mediante

hemocitòmetro.
2. Evaluar la vialbilidad celular de cèlular de cèlulas sanguìneas (PMC)
mediante la aplicaciòn de azul tripàn.
4. METODOLOGÍA
prácticas.
Càmara de Neubauermejorada, Alcohol etìlico al 70%, Viales cònicos Eppendorff
(1.5mL), Cubreojetos, azul del tripàn al 0.4%, Microscopio de luz, Micropipeta de 10 a
200 uL, suspensiòn celular (macròfagos/linfocitos), Puntas para micropipeta,
Refrigerador, Torundas de algodòn, Batas y guantes de làtex.
6. MARCO TEÓRICO
El estudio de las cèlulas que participan en la respuesta inmune es trascendental para
comprender los fenòmenos involucrados en dicha respuesta. Los linfocitos o los
macròfagos pueden aislarse mediante tècnicas de separaciòn en gradiente de
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densidad o por sus propiedades adherentes en superficie plàsticas o de vidrio,
respectivamente. Estas cèlulas son importantes para el inmunòlogo, ya que juegan un
papel fundamental en la respuesta inmune. Estas cèlulas responden funcionalmente
hacia sustancias extrañas; son relativamente fàciles de aislar, fraccionar y caracterizar.
Para observar, contar y determinar la viabilidad celular, es necesario mezclar las cèlulas
con azul tripàn. El azul tripàn es un colorante vital; es dcir, su reactividad se basa en el
hecho de que el colorante (cromòforo) està cargado negativamnte y no interactùa con
la cèlula a menos que la menbrana celular estè dañada. Esto ocurre cuando la cèlula
està moribunda o muerta. Por tanto, todas las cèlulas dañadas que excluyen el colorante
estàn viables (vivas). Cuando se manejan cèlulas vivas, la màxima viabilidad in vitro se
mantiene si las cèlulas se conservan en refrigeraciòn. En general, se acepta que la
viabilidad celular debe ser mayor al 85%.
Las cèlulas deben manejarse lo màs frescas posibles, y cumplir a tèrmino con el
propòsito de la pràctica o del experimento, si no, deben colocarse en medio de cultivo.
7. PROCEDIMIENTO
1. Limpiar y dsengrasar cuidadosamente la càmara de Neubauer con un
algodòn humedecido con alcohol.
2. Colocar un cubreobjetos sobre la càmara deneubauer.
3. Tomar cuidadosamente con la micropipeta 20uL de la suspenciòn celular y
depositarla en el vial cònico.
4. Agregar 20uL de azul de tripàn al frasco con las cèlulas y mezclar
cuidadosamente la suspenciòn mediante 2 a 3 aspiraciones suaves con la
micropipeta.
5. Tomar 10uL de la mezcla y agregarla en las pequeñas ranuras o muescas a
cada lado de la càmara.
Nota: el espacio que existe entre la càmara y el cubreobjetos se llenarà por capilaridad,
asì que no es necesario aplicar mucha fuerza a lamicropipeta.
6. Dejarque las cèlulas se “asienten” por 1min en la càmara y que las pequeñas
turbulencias producidas por la capilaridad de la muestra se detengan.
7. Observar la suspenciòn celular en el microscopio con el objetivo de 10x, de
20x y fimanlmente al de 40x.
8. Utilizar la cuadrìcula central, la cual consta de 25 pequeños cuadros ( y èstos
a suvez por 16 cuadros màs pequeños cada uno) delimitados por un rayado
triple.
9. Seleccionar los cuadros de cada esquina y el cuadro central.
10. Contar las cèlulas iniciando por los cuadros superiores izquierdo y derecho,
y luego los inferiores. Finalizar el conteo en el cuadro central. Realizar el
conteo siguiendo un patròn de grecas de izquierda a derecha y de arriba
abajo. Realizar un conteo doble, ya que la càmara de Neubauer tiene dos
àreas de conteo, una por cada lado.
11. No contar las cèlulas que estèn sobre los bordes externos (rayado triple) de
la cuadrìcula.
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12. Para el conteo total de cèlulas en la suspensiòn original se requiere la
siguiente fòrmula:
Nùmero total de cèlulas = Nùmeros de cèlulas contadas x 25

Cuadrados contados (5)xdiluciòn original
13. Para determinar el porcentaje de viabilidad celular se requiere la siguiente

fòrmula:
Viabilidad celular (%) = Nùmeros de cèlulas viables x 100

Nùmero total de cèlulas viables y no viables
8. RESULTADOS
Mediante esta tècnica se puede estimar el nùmero de cèlulas en suspensiòn celular.
Las cèlulas muertas (no viables) apareceràn azuladas. Las cèlulas vivas (viables)
apareceràn transparentes y refringentes (a veces se observaràn con un tinte verdoso)
sobre un fondo gris azulado.
Al finalizar la práctica el estudiante estará en la capacidad de aplicar la técnica del azul
tripàn para la evaluación de la viabilidad celular.
Es azul de tripàn es carcinogènico, hay que tener cuidado al manejarlo. Utilizar guantes.
Si en el campo visual hay demasiadas células y es difícil contarlas, se debe realizar una
dilución de la muestra. Generalmente una dilución 1:2 en SSF es útil. Consultar con el
profesor o en su defecto técnico-docente sobre el tipo de dilución.
10. BIBLIOGRAFÌA
HAY,FC,WESTWOOD,OM: Practical immunology. 4 th ed. Blackwell. 2002.
JOHNSTONE,A,et al: Immunochemistry in practice. 2 nd ed. Blackwell Scientific
Publications. 1987.
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FACULTAD: CIENCIAS

PRÁCTICA No. 06
“PRUEBA DE NITROAZUL DE TETRAZOLIO (NBT)”
1. DATOS GENERALES:

21/01/2019 28/01/2019
3. OBJETIVO(S)
a. GENERAL
 Evaluar la funciòn delos PMN en tèrminos de producciòn de superòxido.
b. ESPECÍFICOS
1. Poner en pràctica lapropiedad de adherencia de los PMN.

2. Aplicar tècnicas de tinciòn sencillas para evaluar la funciòn de los PMN.
4. METODOLOGÍA
prácticas.
Lanceta,torunda de algodòn, alcohol 70%, placas portaobjetos, baño termostàtico,
palillos de madera, soluciòn salina estèril, piseta, NBT, metanol, agua destilada,
safranina, microscòpico.
6. MARCO TEÓRICO
La prueba de nitroazul de tetrazolio, grànulos de formazàn o NBT, es la prueba màs
empleada para medir la capacidad de los PMN para producir seperòxido (O- 2). Tal
prueba permite el diagnòstico de la enfermedad granulomatosa crònica, la cual se
caracteriza por la deficiencia hereditaria de una de las muchas subunidades de la
oxidasa que actùa sobre la fòrmula reducida del fosfato dinucleòtido de adenina
nicotinamida (NADPH, por sus siglas en inglès), comùnmente las proteìnas p91phox y
p47phox. El nitroazul de tetrazolio es un compuesto claro, amarillo, hidrosoluble que
produce formazàn, un compuesto coloreado azul oscuro, al sufrir reducciòn.la
incubaciòn de los PMN activados ( se logran a travès de su tratamiento con PMA, LPS
o incubàndolos con partìculas opsonizadas para simular fagocitosis) con NBT tiene
Página 16
como resultado la producciòn de O-2 por la reducciòn del colorante. Los PMN adquieren
el color azl al ser visualizados en el microscopio de luz simple. Esta prueba de detecciòn
es tan sencilla que se puede llevar a cabo con una gota de sangre.
7. PROCEDIMIENTO
1. Obtener una gota de sangre sin anticoagulantes del paciente y un testigo en
portaobjetos.
2. Incubar el portaobjetos en una càmara hùmeda por 20 min a 37 grados
centìgrados.
3. Se remueve el coàgulo formado con mucho cuidado raspando por las orillas del
coàgulo y levantarlo.
4. Lavar cuidadosamente la superficie con soluciòn salina estèril.
5. Cubrir completamente lapelìcula formada (los PMN se adhieren a la superficie
del portaobjetos y se eliminan los eritrocitos con lavados) con el medio de
incubaciòn o con el NBT solo.
6. Incubar por 30 min en càmara hùmeda a 37 grados centìgrados.
7. Secar y fijar con metanol absoluto por 1min y lavar con agua destilada.
8. Teñir con safranina 0.77% por 5 min, lavar con agua destilada.
9. Observar al microscopio, contar 100 cèlulas y sacar el porcentaje de cèlulas de
formazàn positivas.
Al finalizar la pràctica el estudiante estarà en la capacidad de evaluar la funciòn delos
PMN para producir superòxido.
9. BIBLIOGRAFÌA
NATHAN DG,BAEHNEM RI, AND WEAVER DK: Failure of Nitro Blue tetrazolium
reduction in the Phagocytic Vacuoles of Leukocytes in Chronic granulomatous Disease.
J Clin Invest. 1969,48:1895-1904
BAEHNER RL, KARNOVSKY MJ, AND KARNOVSKY ML: Degranulation of Leukocytes
in Chronic Granulomatous Disease. J Clin invest. 1968,47:187-192.
Página 17
FACULTAD: CIENCIAS

PRÁCTICA No. 07
“Determinaciòn de VDRL,PCR,ASTO,Fr-Làtex, Aglutinaciones febriles, fracciòn B-
HCG”
1. DATOS GENERALES:

21/01/2019 28/01/2019
3. OBJETIVO(S)
a. GENERAL
 Aplicar las tècnicas serològicas màs comunes en el campo clìnico para el apoyo
diagnòstico.
b. ESPECÍFICOS
1. Adquirir experiencia para la ejecuciòn de pruebas serològicas de

aglutinaciòn e inmunocromatogràficas.
2. Establecer posibles correlaciones de hallazgos positivos para las pruebas.
4. METODOLOGÍA
prácticas.
Jeringas, tubos para colecciòn de muestras de sangre, alcohol, torundas, placas
portaobjetos, reactivos: VDRL,ASTO,làtex,FR-PCR, aglutinaciones febriles, tiras
reactivas para detecciòn de beta-HCG.
6. MARCO TEÓRICO
VDRL (Determinaciòn cualitativa de reaginas plasmàticas IVD)
PRINCIPIOS DEL MÈTODO
Página 18
La prueba del VDRL (siglas que significan Veneral Disease Research Laboratory) es
una tècnica no treponèmica de aglutinaciòn en porta para la detecciòn cualitativa y
semicuantitativa de reaginas plasmàticas. La suspenciòn antìgenica, una mezcla de
lìpidos complejos, es aglutinada en presencia de reaginas presentes en la muestra del

paciente afectado por sìfilis.
SIGNIFICADO CLÌNICO
Las reaginas son un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes del
propioorganismo, en pacientes que sufren de infecciòn por treponema pallidum, agente
causal de la sìfilis. Este ,icroorganismo produce lesiones en el hìgado y corazon,
liberando al torrente circulatorio pequeños fragmentos de estos òrganos no reconocidos
por el propio individuo. El sistema inmunològico del paciente reacciona dando lugar ala
formaciòn de reaginas, anticuerpos frente a estos fragmentos. El ensayo es ùtil para
seguir la respuesta a la terapia antibiòtica.
PCR(Proteìna C reactiva)
PRINCIPIO DEL MÈTODO
La PCR- Làtex es una tècnica de aglutinaciòn en porta para la detecciòn cualitativa y
semicuantitativa de PCR en un suero huemano. Las partìculas de làtex recubiertas con
anticuerposb anti-PCR humana son aglutinadas por molèculas de PCR presentes en la
muestra del paciente.
La proteìna C-reactiva es una proteìna de fase aguda, presente en el suero de pacientes

sanos, la cual puede incrementarse significativamente en la mayorìa de procesos
infecciosos bacterianos y virales, tejidos dañados, inflamaciòn y neoplasias malignas.
El incremento de concentraciòn de esta proteìna se produce despuès de unas horas de
desarrollarse en la inflamaciòn pudiendo alcanzar niveles de 300mg/L en 12-24 horas.
ASTO
FUNDAMENTOS DEL MÈTODO
Los anticuerpos antiestreptolisina O se detectan en suero por su reaccipon con la
estreptolisina O absorbida sobre un soporte inerte de làtex. Los anticuerpos
antiestreptolisina reaccionan con la estreptolisina produciendo una aglutinaciòn vsible
macroscòpicamente.
El anticuerpo antiestreptolisina O se encuentra presente en casi todas las personas en

tìtulos bajos, debido a que las infecciones estreptocòcicas son comunes. Sin embargo,
en tìtulo alto o creciente de antiestreptolisina O, indica una infecciònreciente producida
por un estreotococo beta hemolìtico de grupo A, como amigdalitis, escarlatina, sepsis
puerperal y erisipela.
FR-LATEX
Página 19
Los factores reumatoideos presentes en la muestra son capaces de aglutinar las
partìculas de làtex recubiertas con y-globulina humana. La turbidez causada por la
aglutinaciòn de las partìculas delàtex es proporcional a la concentraciòn de Fr en la
muestra y pude ser medida espectrofotomètricamente.
SIGNIFICACIÒN CLÌNICA
Los factores reumatoideos (FR) son un grupo heterògeno de autoanticuerpos dirigidos

contra el fragmento fc de la IgG. Generalmente pertenecen al tipo IgM aunque tambièn
se han hallado FR de todos los tipos de inmunoglobulinas (IgG,IgA,IgD e IgE). Los FR
se encuentran en un 70-80% de los pacientes adultos con artritis reumatoidea, en un
10% de jòvenes con artritis reumatoidea juvenil y en una variedad de otras
enfermedades del tejido conectivo tales como: LES, sìndrome de Sjogrems, esclerosis
sistemàtica, polimiositis, etc. Los FR son los autoanticuerpos màs comunmente
encontrados en pacientes con artritis reumatoidea y por ello representan la
determinaciòn serològica màs requerida para el diagnòstico de dicha enfermedad. Su
hallazgo aislado no determina la presencia de la enfermedad y es sòlo uno de los tantos
criterios necesarios (clìnicos, radiològicos y de laboratorio) para el diagnòstico de artritis
reumatoidea.
Aglutinaciones febriles
FUNDAMENTOS DEL METODO
El suero del paciente se pone en contacto con antìgenos especìficos. En este caso se
utilizan suspenciones de Salmonella o Brucella muertos. Si la muestra contiene los
anticuerpos correspondientes se producirà una aglutinaciòn visivble
macroscòpicamente.
Las bacterias del tipo Salmonella se consideran patògenos entèricos obligados.los
alimentos y el agua contaminados son los mecanismos de transmisiòn. La enfermedad
puede presentarse como gastroenteritis, septicemia con lesiones en diversos òrganos o
fiebre tifoidea. La Brucelosis se presenta en la mayorìa de los casos de anorexia, fiebre,
decaimiento y escalofrìos, pudiendo aparecer luego complicaciones importantes como
son las òseas y neuropsìquicas. A pesar de que el mètodo definitivo para establecer la
etiologìa de estas enfermedades es a travès del aislamiento del agente patògeno, esto
resulta difìcil debido a que la investigaciòn se realiza frecuentemente en perìodos tardìos
de la enfermedad y luego de una terapia antibiòtica. Por este motivo es de gran
importancia diagnòstica la detecciòn de los anticuerpos especìficos producidos en el
curso de cada una de estas patologìas. Una prueba aislada es de escaso valor, siendo
necesarias 2 o màs pruebas seriadas a fin de poner en evidencia cambios en el tìtulo
de anticuerpos.
Fracciòn B-HCG
La prueba Fecuntest strips es un inmunoensayo cromatogràfico ràpido para la detecciòn
de hCG en orina o suero. La membrana se encuentra recubierta con anticuerpos de
captura anti-hCG en la zona de prueba (T) y de cabra antiratòn en la
Página 20
zona de control (C). Durante la prueba, la muestra reacciona con las partìculas de oro
coloidal cubiertas con anticuerpos monoclonales de ratòn anti-hCg. La mezcla migra por
la membrana por capilaridad. Sie el resultado es positivo, se formarà una banda
coloreada con la partìcula compleja en la zona de prueba. La ausencia una banda
coloreada en la zona de prueba indica un resultado negativo. Como un control de
procedimiento, siempre aparecerà una banda de color en la zona de control
independientemente dela presencia de hCG en la muestra.
La gonadotropina coriònica humana (hcg) es una glicoproteìna producida por las cèlulas
trofoblàsticas de la placenta. Comienza a secretarse en la fase màs temprana de la
etapa gestacional y aumenta constantemente hasta alcanzar un pico, alrededor de 9
semanas despuès del comienzon delùltimo perìodo menstrual normal.
Su producciòn es ìndice de crecimiento placentario, hecho que permite establecer una
relaciòn directa entre la apariciòn de hCG y el diagnòstico de embarazo.
7. PROCEDIMIENTO
VDRL
Mètodo cualitativo
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad
del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50uL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles
positivos y Negativo, sobre cìrculos distintos de un porta de vidrio.
3. Homogenizar suavemente la suspensiòn de antìgeno VDRL antes de usar y
dispensar una gota (20uL) sobre cada una de las gotas anteriores.
4. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 160-180r.p.m. durante 4 min. El
eceso de tiempo de agitaciòn puede originar la apariciòn de falsos positivos.
Mètodo semicuantitativo
1. Realizar diluciones dobles de la muestra en soluciòn salina 9g/L.
2. Proceder para cada diluciòn, como en la prueba cualitativa.
Examinar mediante microscopio òptico (objetivo10x) la presencia o ausencia de
aglutinaciòn inmediatamente despuès de la agitaciòn.
Interpretaciòn
Tipo de aglutinaciòn Lectura Resultado
Agregados grandes o medianos R Reactivo
Agregados pequeños W Reactivo dèbil
Ningùn agregado o ligera N No Reactivo
rugosidad
En el mètodo semicuantitativo, se define el tìtulo como la diluciòn mayor que da

resultado positivo.
PCR
Página 21
Mètodo cualitativo
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad

del ensayo disminuye a temperaturas baas.
2. Depositar 50 uL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles
positivo y negativo, sobre cìrculos distintos de un porta.
3. Mezclar el reactivo de PCR-làtex vigorosamente o con el agitador vortex antes
de usar. Depositar una gota (50uL) junto a cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la
superficie interior del cìrculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80 – 100 r.p.m. y agitar durante 2min.
El exceso de tiempo puede originar la apariciòn de falsos positivos.
Mètodo semicuantitativo
1. Realizar diluciones dobles de la muestra en soluciòn salina 9g/L.
2. Proceder paracada diluciòn, como en la prueba cualitativa.
Examinar macroscòpicamente la presencia o ausencia de aglutinaciòn inmediatamente
despuès de retirar el porta del agitador. La presencia de aglutinaciòn indica una
concentraciòn de PCR igual o superior a 6mg/L.
En el mètodo semicuantitativo, se define el tìtulo como la diluciòn mayor que da
resultado positivo. La concentraciòn aproximada de PCR en la muestra del paciente se
obtiene aplicando la siguiente fòrmula: 6 x Tìtulo de PCR = mg/L.
ASTO
Llevar los reactivos y la muestra a temperatura ambiente. Agitar el reactivo antes de

usarlo, vaciando previamente la pipeta del gotero.
Tècnica Cualitativa
En uno de los sectores delimitados de la placa adjunta al equipo colocar:
Reactivo 1 gota (25uL).
Muestra o Controles 25 uL
Mezclar con palillo descartable (uno para cada muestra) hasta obtener una suspensiòn
uniforme en la superficie delimitada de la placa.
Inmediatamente disparar un cronòmetro, balancear suavemente la placa y observar
macroscòpicamente el resultado dentro de los 2 min.
Tècnica Semicuantitativa (Titulaciòn)
Los sueros positivos pueden titularse efectuando diluciones seriadas en tubos de Kahn.
Colocar 0.5 ml de4 soluciòn fisiològica en cada uno de los tubos.
Agregar 0.5 ml de suero al tubo No. 1 y mezclar.
Página 22
Transferir 0.5 ml deesta diluciòn al tubo No. 2 y mezclar, continuando asì las diluciones
hasta el ùltimo tubo.
Las diluciones asì obtenidas equivalen a 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, etc.
Ensayar cada diluciòn segùn tècnica cualitativa.
Interpretaciòn de los Resultados
Negativo: suspensiòn homogènea.

Positivo: aglutinaciòn que aparece dentro de los 2 min.
Se califica de 1 a 4 +.
Tìtulo: inversa de la màxima diluciòn a la que se produce aglutinaciòn visible
macroscòpicamente.
El nivel aproximado de antiestreptolisina O en la muestra, puede ser calculada por la
fòrmula siguiente:
ASO (Ul/mL) = Tìtulo x Sensibilidad de la reacciòn (200 Ul/mL)
Ejemplo: la muestra presenta en tìtulo de 1:2. El nivel de ASO es de 2 x200 = 400 Ul/mL.
RF –Làtex
CURVA DE CALIBRACIÒN
Realizar las siguientes diluciones del FR Calibrador Turbitest AA, empleando soluciòn
fisiològica como diluyente:
1 2 3 4 5 6
FR Calibrador 100 80 60 40 20 0
diluido (ul)
Soluc.fisiològica - 20 40 60 80 100
Factor de 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0
siluciòn
La concentraciòn de Fr de cada diluciòn se obtiene multiplicando la concentraciòn del

Fr Calibrador por el factor de diluciòn correspondiente a cada diluciòn.
En tubos de Kahn rotulados de 1 a 6 colocar:
Fr Calibrador diluido (1 a 6) 20ul
Reactivo A 600ul
Reactivo B 200ul
Homogenizar y disparar simultàneamente el cronòmetro. Leer la absorbancia a 600 nm

de cada tubo (1 a 6) a los 30 segundos (DO1) y a los 5 min (DO2), llevando en cada
lectura el aparato a cero con agua destilada. Calcular la diferencia de absorbancia
(AA=DO2-DO1) paracada diluciòn del Fr Calibrador. Representar en papel milimetrado
las diferencias AA en funciòn de la concentraciòn en Ul/mL del FR Calibrador.
Las muestras deben procesarse sin diluciòn previa.
Página 23
Muestra 20ul
Reactivo A 600ul
Reactivo B 200ul
Homogenizar y disparar simultaneamente el cronòmetro. Leer la absorbancia a 600nm

de cada muestra, alos 30 segundos (DO1) y a los 5 min (DO2), llevando en cada lectura
el apartado a cero con agua destilada.
Calcular la diferencia de absorbancia (AA = DO2 – DO1) correspondiente a cada
concentraciòn analizada. Interpolar esta AA en la curva se calibraciòn para determinar
la concentraciòn en Ul/ml correspondiente a la muestra estudiada. La muestra queposea
una absorbancia superior a la absorbancia màs alta del FR Calibrador, deberà ser
diluida al 1:2 ò 1:4 con soluciòn fisiològica y procesada nuevamente. Multiplicar el
resultado obtenido por 2 o 4 respectivamente.
Reactivo A: soluciòn buffer de glicina, pH 8,2.
Reactivo B: suspenciòn de partìculas de làtex de tamaño uniforme recubiertas con y-
globulina humana.
Aglutinaciones fèbriles
TÈCNICA RÀPIDA EN PLACA
Colocar en una placa una gota (50uL) de suero y agregar una goto (50uL) de suspensiòn
de Antìgeno.
Mezclar y agitar laplaca en forma circular durante 2 min.
Observar la presencia o ausencia de aglutinaciòn utilizando una luz indirecta sobre
fondo oscuro.
TITULACIÒN RÀPIDA EN LA PLACA
1. Dividir una placa de vidrio en sectores de 4cm aproximadamente.
2. Empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos sectores 80uL, 40uL,
20uL, 10uL y 5uL de suero limpio. Repetir el procedimiento para un control
negativo y uno positivo.
3. Colocar 1 gota de Antìgeno previamente agitado sobre cada gota de suero.
4. Mezclar el suero y el Antìgeno utilixando una varilla abarcando un àrea de 2 cm
de diàmetro aproximadamente. Debe emplearse una varilla distinta para cada
diluciòn de suerob o la misma varilla mezclando a partir de la muestra màs
diluida.
5. Agitar la placa durante 2 min en forma circular.

6. Observar la aglutinaciòn utilizando sobre fondo oscuro.
INTERPRETACIÒN DE LOS RESULTADOS
4+: todos los microorganismos aglutinan.
3+: aglutinan aproximadamente el 75%.
Página 24
Negativo: no aparece aglutinaciòn.
Tècnica I: se indica solamente positivo o negativo.
Tècnica II: el tìtulo se considera la ùltima diluciòn que da aglutinaciòn del 50% (++).
Los resultados obtenidos en la titulaciòn en placa se aproxima a los de la prueba en tubo
descripta en Bennett, C.w, considerando las diluciones como se muestra a conrinuaciòn:
Volumen de suero (ml) Dilucion aproximada en la prueba en tubo
0.08 1.20
0.04 1.40
0.02 1.80
0.01 1.160
0.005 1.320
Fracciòn B-HCG
1. Tanto klla tira de reacciòn como la muestra deben mantenerse a temperatura
ambiente (<30 grados centìgrados) antes de la prueba.
2. Retirar la tira de reacciòn de su envase y rotular con la identificaciòn
correspondiente al paciente.
3. Sumergir la tira de reacciòn en la muestra a ensayar, mantenièndola en posiciòn
vertical por lo menos 15 segundos cuidando de no sobrepasar la lìnea màxima
permitida (MAX) especificada.
4. Colocar la tira de reacciòn sobre una superficie limpia, plana y seca, activar el
cronòmetro y esperar hasta la apariciòn de la/s lìneas coloreadas. Para cada
muestra, utilizar una tira de reacciòn nueva.
5. Observar la apariciòn de bandas coloreadas. Leer el resultado a los 3 min
cuando se ensaya orina a a los 5 min si se ensaya suero. No interpretar los
resultados pasados los 10 min ni antes del tiempo recomendado para cada tipo
de muestra.
Positivo negativo invàlido
Positivo: se observan dos lìneas rojas en la tira, una debida al control y otra debida a la
presencia de hCG.
Página 25
Negativo: se observa sòlo una lìnea roja en la regiòn de control (C).
Invàlido: falla en la apariciòn de la lìnea roja en la zona de control (C), que puede
deberse a: insuficiente volumen de muestra; procedimiento tècnico incorrecto; deterioro
de los reactivos.
Si el resultado es invàlido sedebe repetir la determinaciòn con otra tira. Si el resultado
es dudoso deberà probarse nuevamente con una muestra obtenida 48 a 72 horas màs
tarde. Las muestras dudosas con un resultado posterior negativo pueden atribuirse a la
disminuciòn de los niveles de hCG posteriores a abortos espontàneos o inducidos. La
intensidad del color en la zona de la banda de prueba (T) variarà de acuerdo a la
concentraciòn de hCG presente en la muestra.
Al finalizar la pràctica el estudiante estarà en la capacidad de realizar las tècnicas
serològicas màs comunes aplicadas en el campo.
9. CUESTIONARIO
¿Explique qué es el efecto prozona y su casa?
10. BIBLIOGRAFÌA
Sonnenwirth A,C,; Jarret L. – Gradwohl mètodos y Diagnòsticos del Laboratorio
Clìnico – Editorial Panamericana - 8º Ediciòn (1993).
Lars-olof Hanson et al. Current Opinion in Infectius diseases 1997; 10: 196-201.
Sandra Larsen et al. A manual of test for Syphilis American Public Health 4.
Association 1990: 1-192.
Bennett, C.W. Clinical Serology, pàg. 145, Charles Thomas Co. (1964).
User Protocol for Evaluation of Evaluation of Quantitative Test Performance.

Approved guideline. NCCLS 2006.
Página 26

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ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

GUÍA DE LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2. DOCENTE: BQF. Irvin Tubon. PhD.

 Identificar estructuras de tejidos y órganos del sistema lindoide.

1. Diferenciar los órganos, células y estructuras del siistema linfoide para su

El sistema linfoide aparece representado en esta práctica como un conjunto de

Ingresar a la página web https://www.uv.es/histomed/practicas/09-linfoide/09-

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FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2. DOCENTE: BQF. Irvin Tubon. PhD.

 Demostrar la reacciòn antìgeno-anticuerpo en antìgenos de

1. Idemtificar los antìgenos de superfice del sistema ABO (Landsteiner) en

GRUPO SANGUÌNEO AB positivo GRUPO SANGUÌNEO O negativo

 Si el paciente es Rh positivo, puede recibir sangre Rh positivo o Rh negativo.

1. Limpiamos la zona de punciòn con una torunda impregnada con alcohol.

Si al tèrmino del periodo de reacciòn no existiese ningùn sigo visible de aglutinaciòn,

Al finalizar la pràctica el estudiante estarà en la capacidad de realizar la tipificaciòn

ARCE MENDOZA, Alma Yolanda; ROSAS TARACO, Adrriàn Geovanni; RODRIGUEZ

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FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2. DOCENTE: BQF. Irvin Tubon. PhD.

 Evaluar la funciòn fagocìtica de PMN y macròfagos mediante opsonizaciòn de

1. Adquirir destrezas en la separaciòn de PMN y macròfagos a partir de sangre

La ingestiòn de microorganismos por parte de cèlulas fagocìticas es un proceso activo

Tècnica para evaluaciòn dela fagocitosis

Mezcla nùmero 1 Mezcla nùmero 2

10. Incubar las mezclas a 37 grados centìgrados por 30 min.

% cèlulas fagocìticas de suero activado

Al finalizar la práctica el estudiante estará en la capacidad de determinar el ìndice

ARCE MENDOZA, Alma Yolanda; ROSAS TARACO, Adrrian Geovanni; RODRIGUEZ

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FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2. DOCENTE: BQF. Irvin Tubon. PhD.

 Aplicar diferentes principios para la evaluaciòn de la respuesta inflamatoria de

1. Aislar neutròfilos a partir de sangre perifèrica mediante la aplicaciòn de

%ANTIINFLAMATORIO= 100 - (AM X 100 )

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2. DOCENTE: BQF. Irvin Tubon. PhD.

 Aplicar tècincas de contaje celular para evaluar viabilidad celular mediante la

1. Adquirir destrezas en la manipulaciòn y contaje celular mediante

Nùmero total de cèlulas = Nùmeros de cèlulas contadas x 25

13. Para determinar el porcentaje de viabilidad celular se requiere la siguiente

Viabilidad celular (%) = Nùmeros de cèlulas viables x 100

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FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

 Evaluar la funciòn delos PMN en tèrminos de producciòn de superòxido.

1. Poner en pràctica lapropiedad de adherencia de los PMN.

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1. Adquirir experiencia para la ejecuciòn de pruebas serològicas de

PRINCIPIOS DEL MÈTODO

lìpidos complejos, es aglutinada en presencia de reaginas presentes en la muestra del

La proteìna C-reactiva es una proteìna de fase aguda, presente en el suero de pacientes

El anticuerpo antiestreptolisina O se encuentra presente en casi todas las personas en

Los factores reumatoideos (FR) son un grupo heterògeno de autoanticuerpos dirigidos

En el mètodo semicuantitativo, se define el tìtulo como la diluciòn mayor que da

1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad

Llevar los reactivos y la muestra a temperatura ambiente. Agitar el reactivo antes de

Negativo: suspensiòn homogènea.

La concentraciòn de Fr de cada diluciòn se obtiene multiplicando la concentraciòn del

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