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El mtodo DNS

El mtodo DNS (tcnica de miller) es una tcnica colorimtrica que emplea


cido 3,5 dinitrosaliclico para la hidrlisis de polisacridos presentes en una
muestra. Determina las absorbancias por medio de un espectrofotmetro a
540nm. Esta tcnica sirve para cuantificar los azucares reductores producidos
durante una fermentacin o para cuantificar los productos de una reaccin
enzimtica. La curva de calibracin es la representacin grfica en un eje de
coordenadas, de la Absorbancia (eje de ordenadas: Y) frente a la Concentracin
(eje de abscisas: X). Se ensayan varias soluciones de concentracin conocida y
se determinan sus absorbancias, construyndose la curva de calibrado, que es
una recta. La concentracin de una solucin problema (desconocida), se
averigua por interpolacin de la Abs de la solucin en la curva de calibracin, o
a travs de la ecuacin de la recta (y = mx +b) donde: Absorbancia (y) =
constante (m) x concentracin + absorbancia del blanco.

El DNS reacciona nicamente con los azcares reductores. La sacarosa es un


disacrido no reductor, pero tras su hidrlisis en medio cido se liberan glucosa
y fructosa que s son reductores y reaccionan con el DNS generando un
producto coloreado. La intensidad del color, que se puede medir por mtodos
espectrofotomtricos es proporcional a la concentracin de sacarosa.

Ventajas y aplicaciones del Metodo DNS

Esta tcnica es aplicable a todos los procedimientos de sistemas de cultivos de


medios lquidos y slidos cuya molcula de sustrato sean azcares reductores
como glucosa, xilosa, entre otros

Simple, la coloracin final desarrollada es estable durante 24 hrs, sensible y


adaptable durante la manipulacin de un gran nmero de muestras a la vez.

Cuantificacin de azcares reductorespor el mtodo de DNS

Este procedimiento se fundamenta en la reaccin de los grupos reductores de los


azcares con el reactivo oxidante cido dinitrosaliclico (DNS).El reactivo consiste
en una disolucin formada por los siguientes compuestos: cidodinitrosaliclico
(cido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzico), que acta como oxidante; Sal deRochelle
(tartrato sdico-potsico), que impide la disolucin de oxgeno en el reactivo
yhidrxido sdico, que aporta el medio requerido para que se produzca la
reaccinredox. De esta forma, el cido 2-hidroxi-3,5-dinitrobenzico se reduce, en
presencia delgrupo reductor de la glucosa, formando el cido 3-amino-5-
nitrosaliclico, mientras que el grupo aldehdo reductor se oxida, para formar un
grupo carboxlico. En este mtodo analtico el DNS est en exceso frente a los
grupos reductores y en todas las muestras se adiciona la misma cantidad, de tal
forma que mayores concentraciones de azcaresreductores provocan una mayor
coloracin de la muestra. Estas diferencias decoloracin pueden determinarse por
espectrofotometra visible, a la longitud de onda demxima absorbancia de 540
nm.

Preparacin del reactivo del cido 3,5 dinitrosaliclico en


caliente
Se pesan 5 g de cido 3,5 dinitrosaliclico (DNS), 150 g de Tartrato de Na-K y 8 g
deNaOH. Se disuelve el NaOH en 200 mL de agua destilada y se aade en
agitacin elTartrato de Na-K lentamente.Se completa con agua destilada hasta 400
mL y se comienza a aadir lentamente elcido 3,5 dinitrosaliclico. Se deja en
agitacin toda la noche, se enrasa a 500 mL y sefiltra. Se guarda en frasco color
ambar, bajo refrigeracin.La preparacin del reactivo DNS en caliente se hace con
agitacin magntica ycalentamiento (Bello., 2006)