PRUEBA DE SELIWANOFF

Esta prueba detecta cetosas (hexosas). En el test se provoca una reacción de deshidratación
de cetohexosas para formar 5 hidroximetilfurfural y su posterior condensación con
resorcinol formando así complejos coloreados. La formar 5 hidroximetilfurfural además
reacciona con el resorcinol presente en el test [ CITATION Jua87 \l 9226 ]

Fig.1 Reacción de la prueba de seliwanoff

Fuente: [ CITATION HAR14 \l 9226 ]

Metodo:
Tomar 0.5-2 ml de muestra de solución y colocarla en un tubo. Tomar 1-2 ml del reactivo
de Seliwanoff (solución de resorcinol y HCl) y adicionarlo. Calentar la solución en un baño
de Maria por dos minutos o llevar la muestra son reactivo a ebullición y luego adicionar el
reactivo y observar [ CITATION HAR14 \l 9226 ]

Resultados:
Un producto rojo indica un resultado positivo; debido a la formación de 5
hidroximetilfurfural, reaccionando junto con el resorcinol. En la prueba de Seliwanoff la
fructosa al ser una cetohexosa da un resultado positivo, en cuanto a la sacarosa esta al
contener fructosa da también positivo si se deja correr el tiempo adecuado para que se
efectué la hidrolisis acida en donde la sacarosa libera fructosa. [ CITATION HAR14 \l 9226 ]

Fig 2. Resultado positivo Fig 3. Resultado negativo

Fuente: HARPER COLLEGE, n.d Fuente: HARPER COLLEGE, n.d

METODO DE CARBAZOL
Útil para cuantificar ácido galacturonico, hialurónico y polisacáridos como
glucosaminoglicanos entre otros. Basado en la reacción del carbazol, se estima a través de
la determinación colorimétrica del ácido urónico en el cual el ácido sulfúrico hidroliza el
enlace entre glucosamina y el ácido glucurónico, y el tetraborato de sodio, el cual aumenta
la sensibilidad de la reacción e intensidad color, disminuyendo la interferencia del color por
otros azúcares. Por lo tanto no permite reconocer queratán sulfato. [ CITATION UNA01 \l
9226 ]

Sin embargo, las proteínas presentes en el medio pueden interferir el análisis, aunque se
puede evitar con la introducción de iones borato[ CITATION Men07 \l 9226 ]
Reactivos
Tetraborato de sodio 0.025M; ácido sulfúrico concentrado; carbazol 0.125% en etanol
absoluto (almacenar 4ºC)
Metodo.
Colocar en un tubo de ensayo 5 mL de la solución de tetraborato de sodio en ácido
sulfúrico concentrado y 1 mL de la solución problema. Mezclar y calentar en baño de agua
hirviente por 10 minutos. Añadir 0.2 mL de carbazol, agitar y dejar en el baño durante 5
minutos y dejar enfrar.[ CITATION UNA01 \l 9226 ]
Resultados.
Ajustar previamente con un blanco. La concentración se calcula a partir de una curva
patrón realizada de la misma forma con ácido galacturónico en concentraciones de 4 a 40
ug/mL[ CITATION UNA01 \l 9226 ]
La transmitancia de las soluciones coloreadas se determina en un espectrofotómetro a una
longitud de onda de 530 nm.[ CITATION UNA01 \l 9226 ][ CITATION Men07 \l 9226 ]
PRUEBA DE DIFENILAMINA
La difenilamina es un reactivo muy común y en las publicaciones de química se encuentran
muchas fórmulas. Es una prueba cualitativa, que puede emplearse a campo, para determinar
nitratos.[ CITATION Sco14 \l 9226 ]
La prueba se basa en la oxidación de la difenilamina incolora, que va adquiriendo un tinte
azul similar al de la quinoidina por la oxidación de los iones de óxido de nitrógeno
liberados por el nitrato de celulosa mediante la reacción con ácido sulfúrico. [ CITATION
Sco14 \l 9226 ]

Metodo.
El reactivo es una solución de difenilamina al 0,5% en ácido sulfúrico al 90%. Para
preparar el reactivo, agregue lentamente 90 ml de ácido sulfúrico concentrado a 10 ml de
agua sin dejar de agitar, y luego añada esta preparación, en pequeñas porciones sucesivas, a
0,5 g de difenilamina. Tenga mucho cuidado al agregar el ácido al agua, ya que se genera
una cantidad sustancial de calor durante la dilución[ CITATION Sco14 \l 9226 ]
La solución de prueba resultante es muy corrosiva tanto para las personas como para los
objetos. Puede almacenarse durante varios años y seguir siendo eficaz aunque desarrolle un
leve matiz café o azul. La cantidad preparada (100 ml) es suficiente para efectuar cientos de
pruebas. Guarde la solución de prueba en botellas de vidrio, con etiquetas que indiquen
"Difenilamina al 0,5% en Ácido Sulfúrico al 90% y "Corrosivo". Las botellas de vidrio con
tapas rosca de plástico (no de metal) resultan aceptables sólo si los forros de las tapas son
resistentes al ácido sulfúrico al 90%.[ CITATION Sco14 \l 9226 ]
Cromatografía de capa fina
La identificación cualitativa de los fructanos tipo inulina se realizó por cromatografía en
capa fina de doble desarrollo. A partir de la muestra seca, se extrajeron los azúcares con
agua caliente y se sembraron en una lámina de sílica GEL 60 F 254 , se coloca en una
cámara de vidrio y se deja ascender la fase móvil con la siguiente composición: acetonitrilo
– isopropanol - agua (12:4:6 v/v) dos veces; como solución reveladora se usó una solución
de difenilamina-anilina en ácido fosfórico. Para evidenciar los fructanos tipo inulina se
prepararon soluciones de los estándares de fructuosa, sacarosa e inulina. [ CITATION
DOM15 \l 9226 ]