UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZAN

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

Código: SPT-05 Versión: 2018 Pagina 1 de 2

DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES: MÉTODO DE DNS

(Aplicable para la determinación en productos agroindustriales)

PRINCIPIO
La prueba de DNS (Ácido 3,5-dinitrosalicílico) se basa en que el azúcar actúa como un reductor
químico debido a la presencia del grupo aldehído libre o del grupo cetona en su molécula. En un
medio alcalino, los azúcares reductores son capaces de reducir el ácido 3-5-dinitrosalicílico al ácido 3-
amino-5-nitrosalicílico, dondequiera que, el grupo aldehído se oxida a ácido aldónico. El ácido 3-
amino-5-nitrosalicílico es un producto de color naranja, y la intensidad del color depende de la
concentración del azúcar reductor. Además del ácido 3-5-dinitrosalicílico, también se usa en este
método la sal de Rochelle (tartrato de sodio y potasio), fenol, bisulfito de sodio e hidróxido de sodio.
El fenol optimiza la cantidad del color producido y el bisulfito de sodio estabiliza el color en la
presencia de fenol (Miller, 1959). La sensibilidad del método es de 100 a 500μg/mL de azúcar
reductor. Se utiliza una solución estándar de glucosa o fructosa para construir la curva de calibración y
obtener la ecuación de línea recta para cuantificar muestras.

MATERIALES Y MÉTODOS potasio en una proporción de 1: 1: 1: 1

Equipos e instrumentos: Espectrofotómetro
UV/Vis, Balanza analítica, baño de agua
termostático, vortex, cronómetro digital,
agitador magnético, micropipetas de 200 y 100
µL, cubetas de poliestireno, entre otros.
Reactivos:
Glucosa P.A., Ácido 3,5-dinitrosalicílico
(DNS), disulfito de potasio, Hidróxido de
sodio, fenol, tartrato doble de sodio y potasio
tetrahidrato (KNaC4H4O6.4H2O), ácido
clorhídrico.
- Soluciones de ensayo DNS: 1% (p/v)
solución DNS, 40% (p/v) solución de
tartrato de sodio y potasio, 0.2% (p/v)
solución de fenol y 0.5% (p/v) de solución
de disulfito de potasio se prepararon en
1.5% de solución de NaOH (p/v).
- Preparación del reactivo DNS: se
mezclaron soluciones de DNS, tartrato de
sodio y potasio, fenol y disulfito de
(v/v/v/v).
- Estándar de azúcar reductor: stock de 20
mg/mL, soluciones de trabajo de 0 a 10
mg/mL.
Preparación de la muestra
Obtener un extracto, homogeneizar y/o diluir
la muestra en agua destilada, según
corresponda o licuadora por 3 minutos. La
muestra diluida deberá centrifugarse a 15.000
rpm durante 15 minutos. Retirar 1,0 mL del
sobrenadante y hacer la prueba de DNS.
Si la muestra contiene azúcares no reductores
como la sacarosa, es necesario hacer hidrólisis
de la muestra. En este caso, extraer 2,0 ml del
sobrenadante y añadir 2,0 mL de HCl 2N y
calentar en baño maría en ebullición por 10
minutos. Enfriar la muestra en baño de hielo y
añadir 2,0 mL de NaOH 2N y agitar. Retirar
1,0 mL del sobrenadante y realizar la prueba
de DNS.
Prueba de DNS
En un tubo con taba pipetear 1 mL de estándar
o muestra, adicionar 2 ml de reactivo DNS,
agitar y calentar en baño de agua a 100 ° C
(ebullición) durante 5 minutos. Enfriar el tubo
en baño de hielo durante 5 minutos y añadir 1
mL de agua destilada. La lectura de la
absorbancia se realiza a 540 nm, contra un
blanco.
La concentración de azucares reductores
expresado como glucosa o fructosa, se
obtendrá de la ecuación de regresión lineal de
la solución estándar.
REFERENCIAS:
Başkan, K. S., Tütem, E., Akyüz, E., Özen, S.,
& Apak, R. (2016). Spectrophotometric total
reducing sugars assay based on cupric
reduction. Talanta, 147, 162-168.
Miller, G. L. (1959). Use of dinitrosalicylic
acid reagent for determination of reducing
sugar. Analytical chemistry, 31(3), 426-428.