UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE QUÍMICA

CURSO : CC 3022 ENZIMOLOGÍA

CRÉDITOS 4
HORAS TEORÍA 3
HORAS PRACTICA 2
REQUISITO : BIOQUÍMICA
SEMESTRE : 2022 - I
PROFESORES: Cecilia Nieto Aravena, cnieto@lamolina.edu.pe
Pilar Aliaga Rota, paliaga@lamolina.edu.pe
Jorge Chávez Pérez, jchavezp@lamolina.edu.pe
Ana Kitazono Sugahara, anakitazono@lamolina.edu.pe

FECHA INICIO - FINAL : 25/04/2022 al 06/08/2022

SUMILLA
Este curso es de naturaleza teórica-.práctica y de enseñanza virtual y desarrolla los
aspectos específicos de las enzimas, su cinética, los mecanismos de su purificación y las
diversas funciones de las mismas. La finalidad es brindar al estudiante las capacidades
para trabajar e investigar con enzimas, tanto a nivel de su caracterización como en los
procesos de purificación y aplicación industrial. Comprende las siguientes unidades de
aprendizaje: cinética de reacciones homogéneas - procesos de inhibición enzimática,
factores que afectan la catálisis enzimática, mecanismos de control de la actividad
enzimática, alosterismo, aislamiento y purificación de enzimas, procesos de
fraccionamiento y separación de proteínas, aplicaciones industriales de enzimas,
aplicación de tecnologías de ADN recombinante para la producción de enzimas,
producción de enzimas recombinantes fusionadas con etiquetas.

COMPETENCIAS

Competencia general
● El estudiante comprende y aplica de manera práctica, los procesos de caracterización,
aislamiento y purificación de enzimas que desea investigar o caracterizar.

Competencias específicas
▪ Comprende los principios de cinética de las reacciones aplicadas a enzimas.
▪ Relaciona y aplica gráficos y deducciones que le permite caracterizar fiablemente
diversas enzimas.
▪ Describe y compara los diferentes procesos de purificación de enzimas.
▪ Elabora conclusiones y aplica conocimientos a nivel biotecnológico e industrial.

PRIMERA PARTE: PROF. CECILIA NIETO ARAVENA

Desde 25/04/2022 al 26/05/2022

Capítulo 1. CINÉTICA DE REACCIONES HOMOGÉNEAS

Competencia: Comprende la cinética de reacción homogénea por efecto de
concentración de sustrato y deduce la ecuación que describe la cinética michaeliana

Tema 1 Logros
- Características generales de
las enzimas
Tema 2
- Teoría de acción y cinética
enzimática Parámetros
cinéticos fundamentales:
Km y V. Máx.
Tema 3
- Deducción de la Ecuación
de Michaelis y Menten
- Hipótesis de rápido equilibrio
- Hipótesis de estado
estacionario
Tema 4
Transformaciones
matemáticas de la ecuación
de Michaelis y Menten -
- Trabajo con Gráficas en
cinética: ventajas y
desventajas. Combinación
de gráficas.
- Principales gráficos
utilizados en la
determinación de Km y Vm
Capítulo 2. CINÉTICA DE LA INHIBICION ENZIMATICA
Competencia: Relaciona las herramientas aprendidas de trabajo con gráficos en
casos de presencia de diversos inhibidores de la catálisis enzimática
Tema 5
- Concepto de inhibidor de
reacción enzimática
- Clasificación de inhibidores
según tipo de interacción
con la enzima
- Clasificación de Inhibidores
según mecanismo de acción
- Inhibición competitiva (clásica –
excluyente)
Relacionar e integrar conocimientos de formación anterior
para proceder a su profundización
Logros
Comprender el sustento de la cinética hiperbólica rectangular
y la aplicación práctica de la cinética michaeliana
Comprender el efecto de los cambios de concentración de
sustrato sobre la velocidad de reacción
Logros
Relacionar el efecto de la concentración de sustrato con la
deducción del modelo matemático que lo define
Revisar las hipótesis que dan lugar a la ecuación de
Michaelis y Menten
Logros
Comprender las formas gráficas y matemáticas de
determinar Vm y Km con miras al logro de caracterizaciones
fiables
Aplicar los conceptos teóricos de manera gráfica, y la
importancia de diferenciar su aplicación y utilidad
Revisar los principales gráficos para desarrollar la habilidad
de su aplicación
Logros
Comprender el mecanismo de acción de un inhibidor y la
razón por la que afecta el ciclo catalítico, de diferente
manera
Aplicar las diversas formas de estimar los parámetros
cinéticos en los casos en que se presenten diferentes
formas de inhibición
 Tema 6 Logros

- Inhibición no competitiva
(clásica e irreversible) Aplicar las diversas formas de estimar los parámetros
cinéticos en los casos en que se presenten diferentes formas
- Inhibición linear mixta de inhibición

- Inhibición Incompetitiva

Capítulo 3. OTROS FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Competencia: Comprende el efecto de otros factores sobre la velocidad de
reacción enzimática y aplica con efectividad estos criterios en la planificación de
actividades de investigación orientadas a caracterizar enzimas.

Tema 7 Logros

- Efecto del pH sobre la

velocidad de reacción Aplica los conocimientos de las diversas formas de estimar
enzimática los parámetros cinéticos en los casos en que se presenten
- Efecto de la temperatura diferentes formas de inhibición
sobre la velocidad de
reacción enzimática
- Efecto de la concentración
de la enzima

Cap. 4 MECANISMOS DE CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Competencia: Comprende la lógica del control metabólico en sus diferentes
expresiones y las aplica en la interpretación del metabolismo.

Tema 8
Alosterismo y teoría alostérica
Cinética de la Inhibición
alostérica
Logros
Integra los conocimientos y habilidades adquiridas en el manejo
matemático de la cinética enzimática con la panorámica de
control metabólico ejercido a nivel de enzimas

Tema 9 Logros
Otros mecanismos de control de
la actividad enzimática: Integra los conocimientos y habilidades adquiridas en el manejo
Activación proteolítica, control matemático de la cinética enzimática con la panorámica de
por modificación covalente, control metabólico ejercido a nivel de enzimas
compartimentación, control
transcripcional
EVALUACIÓN I: Martes 24 de mayo 2022

SEGUNDA PARTE: PROF. JORGE CHÁVEZ PÉREZ

Desde 31 de mayo al 30 de junio del 2022

Capítulo 8. INTRODUCCIÓN AL AISLAMIENTO Y PURIFICACIÓN DE ENZIMAS

Competencia: Comprende y relaciona los criterios y los diferentes métodos
empleados para el aislamiento y purificación de enzimas

Tema Logros
Criterios de Purificación.
- Selección de la muestra.
- Selección del buffer Conoce y aplica los criterios básicos para el aislamiento y
- Preparación del purificación de enzimas y proteínas en general, desde la
homogenizado selección de selección de la muestra, manejo de la muestra
- Métodos de fraccionamiento y el fraccionamiento de la muestra.
celular
- Separación y reconocimiento
de fracciones sub-celulares.
- Uso de marcadores
enzimáticos

Tema Logros
- Métodos de cuantificación de
proteínas
- Métodos de medición Comprende los métodos aplicados para la cuantificación de
enzimática. Velocidad inicial proteína enzimática, cálculo de la actividad específica y
- Cálculo de Actividad construcción del cuadro de purificación
específica, porcentaje de
recuperación y número de
veces de purificación.
- Elaboración del Cuadro de
purificación

Capítulo 9. MÉTODOS DE FRACCIONAMIENTO Y SEPARACIÓN DE

PROTEÍNAS
Competencia: Comprende los métodos y técnicas aplicadas al proceso de
separación de proteína enzimática

Tema Logros
- Precipitación Química: uso de
sales y solventes.
- Precipitación Física: uso de Comprende los diferentes métodos físicos y químicos
pH y temperatura. empleados en el proceso de separación de proteínas y los
- Diálisis diferentes métodos cromatográficos y electroforéticos
- Cromatografía en columna. aplicados para la purificación de proteína enzimática.
Preparación de las columnas
- Cromatografía por gel
filtración o exclusión molecular
- Cromatografía de intercambio
iónico: aniónica y catiónica.
- Cromatografía por HPLC
 - Electroforesis, Principios y
tipos de electroforesis

EVALUACIÓN II: Por definir

TERCERA PARTE: PROF. ANA KITAZONO SUGAHARA

Desde 05 de julio al 06 de agosto 2022

Cap. 10 APLICACIONES INDUSTRIALES DE ENZIMAS

Competencia: Reconoce las diversas aplicaciones de las enzimas en la industria
farmacèutica, quìmica, alimentaria, textil, papelera, etc .

Cap. 11 APLICACIÓN DE TECNOLOGÍAS DE ADN RECOMBINANTE PARA LA

PRODUCCIÓN DE ENZIMAS
Competencia: Comprende las ventajas y procedimientos involucrados en el
clonaje de genes que codifican para enzimas.

Tema Logros

- Estructura del ADN, ARN y proteínas

Reconoce las estructuras y funciones de
- Genes y el código genético los ácidos nucleicos y proteínas
comprende las ventajas que ofrece la
- PCR como método para la amplificación de un clonación de un gen que codifica para
fragmento de ADN una enzima
- Plásmidos y métodos de clonación

Cap. 12 PRODUCCIÓN DE ENZIMAS RECOMBINANTES FUSIONADAS CON

ETIQUETAS
Competencia: Comprende los mecanismos que permiten la generación de
enzimas fusionadas con etiquetas.

Tema 1 Logros

- Descripción de las principales etiquetas Reconoce a las diferentes etiquetas que

son usadas para facilitar la
- Métodos que permiten la generación de identificación, localización y purificación
proteínas de fusión o híbridas de enzimas recombinantes

EVALUACIÓN III: Día asignado por la Oficina de Estudios y

Registros académicos para el examen final del curso
 PROGRAMA DE PRÁCTICAS: PROF. PILAR ALIAGA ROTA

HORARIO DE PRÁCTICAS (Lunes 10am-12m)

Fecha Práctica

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA EN TEJIDOS Y FLUIDOS BIOLOGICOS

25 de abril Instrucciones generales

9 de mayo Actividad enzimática en fluidos biológicos

16 de mayo Actividad enzimática en tejidos

FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

23 de mayo Efecto de la concentración de sustrato sobre la actividad enzimática

30 de mayo Efecto de pH y temperatura sobre la actividad enzimática

6 de junio Actividad del inhibidor de tripsina
13 de junio Efecto de la temperatura sobre la actividad del inhibidor de tripsina

20 de junio Examen parcial de prácticas

PURIFICACIÓN PARCIAL DE ENZIMAS

Actividad específica

27 de junio Dia 1: Determinación de concentración de proteínas

4 de julio Dia 2: Determinación de actividad específica

11 de julio Dia 1: Obtención de las fracciones de purificación

18 de julio Dia 2: Análisis de las fracciones de purificación
25 de julio Exposición de resultados
1 de agosto Ex final de prácticas

Evaluación

Informes 60%
Examen parcial 20%
Examen final 20%
PROGRAMA CALENDARIZADO DE EVALUACIONES

Las fechas de las evaluaciones de cada parte del curso son coordinadas con
anticipación con cada docente

ESTRATEGIAS METODOLÓGICAS

Para el desarrollo del curso se hará uso de las siguientes modalidades de trabajo:

1. Plataforma Virtual Moodle – Los profesores diseñan sus clases haciendo uso de
diversos medios audiovisuales y de tecnología que promueven el aprendizaje y
comprensión de los estudiantes para alcanzar los objetivos declarados en el curso

2. La parte teórica del curso se desarrolla con una modalidad virtual, con sesiones
sincrónicas y asincrónicas. Las prácticas de laboratorio se desarrollarán de
manera presencial, en el laboratorio Q4. El desarrollo del curso implica que el
estudiante ejerce autodisciplina y utiliza diversos canales de comunicación para
asegurar el desarrollo de sus capacidades conceptuales, procedimentales y
actitudinales.

3. Trabajos Encargados. - Las sesiones de trabajo, videos, clases, foros,

cuestionarios, se encuentran en la plataforma Moodle y se va teniendo acceso a
medida que el/la estudiante avanza. El/la estudiante que está matriculado/a en el
curso debe garantizar la disponibilidad de las condiciones necesarias para el
desarrollo del curso en sus modalidades virtual (teoría) y presencial (prácticas de
laboratorio).

Asimismo, cada estudiante debe tener en cuenta las siguientes consideraciones:

1. El dictado de clases virtual exige reglas de etiqueta especificadas en la plataforma
del curso
2. Las actividades (foros, cuestionarios, exámenes, trabajos) son obligatorias. “La
inasistencia a una evaluación deberá ser justificada ante el profesor de la
asignatura, dentro de los 8 días siguientes a esta”. (Art. 135 del Reglamento
UNALM).
3. La cátedra no considera exámenes sustitutorios.
.

. CRITERIOS DE EVALUACIÓN

% Competencia Ponderación
Evaluación
P A C (%)
Examen I 30 0 70 25
Examen II 30 0 70 25 75
Examen III 30 0 70 25
Práctica 33 33 33 25 25
P: procedimental; A: actitudinal; C: conceptual
 BIBLIOGRAFIA:

1. IRWIN H. SEGEL. Calculations - Second Edition -John Wiley & Sons, New York, Chichester,
Brisbane, Toronto

2. NUÑEZ DE CASTRO. Enzimología, Pirámide 2001

3. KIRK, O. BORCHERT, T.V. Y FUGISANG, C. C. Industrial Enzyme Applications. 2002

4. HAK, G D Y RAKSHIT, S.K.. Development industrially important thermostable review

Bioresour.Technol.,89,17-34. 2003

5. AEHLE, W. Enzymes in Industry: Production and Applications. WILEY-VCH,

Weinheim. 2003

6.LIESE, A. Industrial Biotransformation 2ª, ed. Wiley-VCH, Weinheim. 2004

7.PANDEY, A. Enzyme Technology Springer. 2006

8. KUNAR, A.Y GARG, S. Enzymes and Enzymes Technology. 2009

9. HALVOR CHRISTENSEN. Cinética Enzimática. Ed. Reverté 2014

10 LIBERMAN, M. A. Bioquímica, biología molecular y Genética. Wolters

Kluwer, Lippincott Williams & Wilkins, 2014

11 Mc LENNAN, A. Bios : notas instantáneas de biología molecular. McGraw-Hill Education, c2014

Recursos en línea:
 PubMed (base de datos de artículos científicos en el área de ciencias biológicas):
 Protein databank (PDB)
 Base de datos de enzimas (BRENDA)
 Unión Internacional de Bioquímica y Biología Molecular (IUBMB)
 Sociedad Americana de Bioquímica y Biología Molecular (ASBMB)
 Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular (SEBBM)

La Molina, 25 de abril del 2022