UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS

PROFESOR Carlos Emilio Reina Galeano
Jhon Sebastian Baquero, Cristian Quintero

PRACTICA DE LABORATORIO
SEPARACIÓN DE PIGMENTOS

- INTRODUCCION

La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas

cuyo objetivo es separar los distintos componentes que están presentes en una sustancia o mezcla,
con la finalidad de separarlos, analizarlos y cuantificarlos. En algunos casos la separación de
pigmentos puede resultar complicado para obtener el proceso de separación.

La cromatografía puede cumplir dos funciones:

 Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados
posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
 Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este caso, las
cantidades de material empleadas suelen ser muy pequeñas.

- OBJETIVOS
 extraer pigmentos fotosintéticos de la acelga.
 identificar los pigmentos que han quedado registrados en el papel filtro.

- MATERIALES
 Papel filtro
 Hojas de acelga
 Alcohol
 Mortero
 Caja de Petri
 Tubo de ensayo
 - METODOLOGIA
En la práctica se inició triturando una hoja sin dejarle las venas de esta, en un mortero con alcohol
etílico al 96% se macero hasta volverse una mezcla uniforme, con un papel filtro se pasa al tubo de
ensayo como lo muestra la siguiente imagen.

Ilustración 1 filtración de la mezcla.

Después de almacenado, se reparte en un tubo de ensayo y en una caja de Petri con su respectivo
papel filtro para que este absorba y muestre los pigmentos de la hoja como lo muestra la siguiente
imagen.

Ilustración 2 caja de Petri, mezcla, papel filtro. Ilustración 3 tubo de ensayo, mezcla, papel filtro.
 - RESULTADOS

Ilustración 4 tubo de ensayo 1 hora después. Ilustración 5 caja de Petri 1 hora después.

Ilustración 7 papel filtro más de un día.

Xantofilas
las xantofilas presentan color amarillo en la separación de pigmentos de la espinaca que le
permiten la absorción de luz y les proporciona energía para generar procesos fotosintéticos
que la planta de espinaca usara luego como nutriente.
Clorofila A
La clorofila A, presenta un color verde azulado que tiene función de percibir longitudes de
onda para realizar procesos metabólicos de fotosíntesis oxigénica.

Clorofila B
La clorofila B, se observa con una tonalidad verde presente en la espinaca, es una de las
clorofilas más importantes y se caracteriza por aumentar la capacidad de absorción de luz
para la producción de energía que luego será aprovechada en procesos metabólicos.

Carotenos
los carotenos se desprenden generando un color naranja, que se alojan en el interior de sus
células vegetales.

Otros tipos de clorofila Color

Clorofila A Verde azulado

Clorofila B Verde

Xantofilas Amarillo

Carotenos Naranja

Clorofila C Marrón o rojizo

Clorofila D Rojizo

Antocianina Rojo, púrpura o azulado

Ficobilinas Rojo

1.1 CROMATOGRAFÍA DE EXCLUSIÓN MOLECULAR

La cromatografía de exclusión es el nombre general para los procesos de separación de
biomoléculas de acuerdo a su tamaño cuando una solución fluye a través de una cama empacada
con un medio

Para la separación en SEC, se utilizan las propiedades de tamiz molecular de una variedad de
materiales porosos.

1.2 CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

La cromatografía de intercambio separa las moléculas en base a su carga iónica neta. La separación
se lleva a cabo por la competencia entre proteínas con diferente carga superficial por grupos
cargados opuestamente sobre un adsorbente o una matriz de intercambio icónico.

1.3 CROMATOGRAFÍA DE INTERACCIÓN HIDROFÓBICA

La cromatografía de interacción hidrofóbica es uno de los métodos de purificación de

macromoléculas biológicas más utilizado, especialmente para proteínas terapéuticas.

explota la interacción reversible entre la superficie hidrofóbica de una proteína y una matriz
cromatografía con un ligando hidrofóbico a moderadamente altas concentraciones de sal, como el
sulfato de amonio.

1.4 CROMATOGRAFÍA DE FASE REVERSA

La cromatografía de fase reversa describe un tipo de cromatografía en la cual la fase estacionaria es

menos polar que la fase móvil. La RPC es una técnica de purificación capaz de separar
componentes con características muy similares, como proteínas que difieren en solo un aminoácido
e isómeros conformacionales de péptidos.

¿Se puede separar los pigmentos con otro tipo de solvente que no sea el alcohol etílico?
A los solventes que extraen simultáneamente todos los pigmentos de la hoja se los suele llamar
extractantes. Existen otros solventes que presentan afinidad por algunos pigmentos y se los llama
separadores, como por ejemplo el tetracloruro de carbono y el éter de petróleo.

- CONCLUCION
 Las clorofilas son muy importantes porque permiten a las plantas generar absorción de
diferentes longitudes de onda que son necesarias para la producción de energía que es
aprovechada en procesos como la fotosíntesis.
 Los colores que presentan las clorofilas a veces se mezclan y generan otras tonalidades
que se expresan en la diversa gama de colores que se observa en las plantas
 Los tipos A y B de clorofila trabajan en conjunto dentro de las células vegetales para
generar una mayor capacidad de absorción de ondas de luz.

- Referencias

 Mayolo-Deloisa, K., Martínez, L. M., & Rito-Palomares, M. (2012). Técnicas

cromatografías y su aplicación a estudios de cambios conformacionales,
estabilidad y re plegamiento de proteínas. Revista mexicana de ingeniería
química, 11(3), 415–429. https://www.scielo.org.mx/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S1665-27382012000300006
 Extracción y separación de pigmentos vegetales. (2009, November 20). Issuu.
https://issuu.com/sandokike/docs/extraccion-y-separacion-de-pigmentos-
vegetale