Identificacin de los pigmentos vegetales mediante cromatografa en papel

BASTOS CONTRERAS, Jhoan Andrs; MARTINEZ ARCINIEGAS, Jhon Fredy; PINEDA

MORA, Mayra Alejandra; CEBALLOS TABORDA, Dora
Unidades Tecnolgicas de Santander. Laboratorio de Biologa. Grupo A147
Tecnologa en Recursos Ambientales. Bucaramanga. Colombia

e-mail: jhoanandres54@hotmail.com
15 de octubre del 2017

RESUMEN
La cromatografa en papel es una tcnica que permite la separacin de los pigmentos
vegetales permitiendo la determinacin e identificacin del compuesto, es el mtodo en el cual
los componentes de una mezcla estn separados en una columna absorbente dentro de un
sistema fluyente, el objetivo de esta prctica es describir e identificar la separacin de
pigmentos vegetales en distintas zonas coloreadas utilizando la tcnica de cromatografa en
papel, para su realizacin se utiliz una hoja de espinaca(Spinacia oleracea), la cual fue
macerada con 5mL de acetona hasta tener una mezcla homognea la cual fue filtrada,
despus se le adiciono una cucharadita de cloruro de calcio y por medio de un capilar tomamos
la muestra para agregarla al papel filtro de manera cuidadosa, en la cabina extractora se
agreg 3 mL de tetracloruro de carbono a la caja Petri en donde se coloc la parte interior del
papel en forma de V, Para observar la separacin de los pigmentos.

Palabras clave: acetona, sistema fluyente, pigmentos, cloruro de calcio, tetracloruro de

carbono.
ABSTRACT

Paper chromatography is a technique that allows the separation of the plant pigments allowing
the determination and identification of the compound, is the method in which the components
of a mixture are separated into an absorbent column within a flowing system, the objective of
this It is a practice to describe and identify the separation of vegetable pigments in different
colored areas using the paper chromatography technique. A spinach leaf (Spinacia oleracea)
was used, which was macerated with 5mL of acetone until a homogeneous mixture was
obtained which was filtered, then a teaspoon of calcium chloride was added and by means of
a capillary we took the sample to add to the filter paper carefully, in the extractor cabin 3 mL of
carbon tetrachloride was added to the Petri dish where the inside of the V-shaped paper was
placed, to observe the separation of the pigments.
Keywords: acetone, flow system, pigments, calcium chloride, tetrachloride

INTRODUCCION

La cromatografa es una tcnica de separacin que se basa en una fase estacionaria y una
mvil. Con el fin de que los diversos componentes de una mezcla se separen a travs de la
fase mvil, la cromatografa logra la separacin de diversos compuestos en diferentes estados
de agregacin, ya sea solido-liquido, gaseoso-gaseoso entre otros, es de suma importancia
debido a su gran uso tanto en la industria como en el campo de salud y la biologa (Harris,
2003)

La IUPAC (unin internacional de qumica pura y aplicada) define a la cromatografa, como un

mtodo fsico de separacin mediante el cual los componentes de una mezcla se separan por
distribucin entre dos fases: una estacionaria (FE) y otra mvil (FM). El proceso de separacin
de cada sustancia es el resultado de un equilibrio entre dos conjuntos de fuerzas
contrapuestas: las de propulsin, pro-movidas por el flujo de la fase mvil y las fuerzas de
retencin, originadas por la fase estacionaria (Torossi,2007)

La cromatografa de absorcin, es una tcnica particularmente til para separar compuestos

de polaridad baja o media. La separacin de compuestos muy polares mediante cromatografa
de absorcin requiere, debido a la gran retencin que ofrece la utilizacin de absorbentes muy
poco activos, o bien, tratamientos qumicos previos a fin de reducir su polaridad. Fue
desarrollada por Martin y tiene como soporte un papel de celulosa. adquiri una gran extensin
por su sencillez y presenta la ventaja de poder utilizar miligramos y microgramos, adems
presenta la opcin de utilizar tanto la tcnica descendente (en columnas, etc) como la
tcnica ascendente. (Loro, 2001)

El objetivo de la prctica es Describir e identificar la separacin de pigmentos vegetales de la

planta Spinacia oleracea en distintas zonas coloreadas utilizando la tcnica de cromatografa
en papel.
MATERIAL Y METODOLOGIA

Material biolgico
Hojas de espinaca (Spinacia oleracea)

Material de laboratorio
Mortero
Embudo de vidrio
Erlenmeyer 100mL
Caja Petri
Capilar
Pipeta plstica

Equipos
Extractor de gases y humos (marca physis)

Reactivos
Acetona o (alcohol al 96%)
Cloruro de calcio (CaCl2)
ter de petrleo o (tetracloruro de carbono, CCl4)

Metodologa
En esta prctica se realiz la separacin de pigmentos vegetales por cromatografa, con ayuda
de las tijeras se retiraron las nerviaciones ms gruesas de la hoja cortando el limbo en
secciones pequeas y se coloc en el mortero, se le agrego 5mL de acetona (sustancia
extractora) triturando hasta que la mezcla se homogenizara, se agreg 5mL de acetona
nuevamente y se procedi a recoger la sustancia resultante para llevarla a filtrar. Con el
embudo de vidrio y el papel de filtro se procedi a filtrar la sustancia resultante que se obtuvo
en el mortero y se recogi el filtrado en el Erlenmeyer. Se obtuvo una solucin de pigmentos
vegetales a la cual se le agrego una pequea cantidad de CaCl2, la cual fue cubierta con la
tapa de la caja de Petri y se dej reposar durante 5 minutos.
Se cort una tira de papel filtro de aproximadamente 5cm de ancho por 10cm de alto. Teniendo
precaucin de utilizar siempre guantes para manipular el papel filtro puesto que la grasa de la
mano pues de estropear la cromatografa, se marc con lpiz la lnea de la siembra a 1cm de
la base y doblar el papel filtro por la mitad (para que se mantenga de pie)
Con el capilar y sobre la lnea trazada se aplic de 3 a 6 capas del extracto foliar, dejando
secar la acetona entre cada pasada, se verifico que cada pasada del extracto vegetal fuera
estrecha y concentrada, se ventilo el papel filtro despus de cada capa del extracto. En la caja
de Petri se coloc 5 ml del solvente separador (tetracloruro de carbono o ter de petrleo) de
tal modo, que hiciera contacto con la extremidad del papel filtro ya sembrado.
Se coloc cuidadosamente el papel filtro ya sembrado en forma de V en la caja de Petri.
Observando como los pigmentos se van separando segn su absorcin o afinidad con el
solvente. Se dej secar la muestra para su debida observacin.

RESULTADOS

Taxonoma
Reino plantae
Subreino tracheobionta
Divisin magnoliophyta
Clase magnoliopsida
Subclase caryopyllidae
Orden caryophyllales
Familia amaranthaceae
Subfamilia chenopodioideae
Genero Spinacia
especie Oleracea
Tabla 1: taxonoma de la planta
analizada

Figura 1: planta Spinacia oleracea, Fuente

(https://gardensonline.com.au/gardenshed/plantfinder/Show_2032.aspx)
 Figura 2: pigmentos vegetales
Fuente (http://byg4esojv.blogspot.com.co/2010/11/separacion-de-
pigmentos-vegetales.html)

Figura 3: metodologa para la separacin de pigmentos fuente

(https://www.blinklearning.com/Cursos/c737519_c38541499__Metodos_de_separacion_de_
mezclas.php

Figura 4: resultado de la coloracin clorofila tipo B fuente

(practica de extraccin de pigmentos vegetales. Laboratorio de
biologa UTS)

Las hojas de las plantas son verdes porque tienen mucha clorofila, el pigmento principal que
captura la luz solar para el proceso de fotosntesis. Hay dos tipos de clorofila y entre ambas
absorben todos los colores de la luz excepto el verde, que es reflejado y por eso la mayora
de las hojas tiene ese color. Las hojas tambin producen otros pigmentos que absorben y
reflejan otros colores, pero generalmente tienen tanta clorofila que los dems pigmentos
quedan ocultos. Cuando la hoja se apresta a morir, la clorofila es removida y comenzamos a
ver los colores reflejados por los otros pigmentos, que pertenecen a dos grupos principales:
carotenoides (amarillo, anaranjado y pardo) y antocianinas (rojo y morado). (Badui, 1995)

La adicin de una pequea proporcin de un disolvente polar como la acetona, por ejemplo,
en el cual ellas son solubles, posibilitar el establecimiento de esa serie de equilibrios y, por
ende, su separacin. Como puede apreciarse, la solubilidad de cada pigmento en la fase mvil
tiene importancia, pero ella, por si sola, no explica su separacin. (Torossi, 2007)

La acetona y el tetracloruro de carbono se volatilizan con gran velocidad, esto impide un

desarrollo normal de la cromatografa (Mallol, 2008)

Los pigmentos fotosintticos de las plantas estn representados por las clorofilas a y b, y un
amplio grupo de sustancias denominadas carotenoides, que se dividen en carotenos y
xantofilas. Las molculas de clorofila poseen un tomo central de Mg contenido en un anillo
de porfirina junto a un alcohol insaturado llamado fitol. Ambas estructuras slo difieren en el
sustituyente del carbono C-3. Mientras que la clorofila a, posee un grupo metilo (-CH3), la b
dispone de un grupo aldehdo (-CHO). Esta sutil diferencia no solo se traduce en cambios de
coloracin, un verde azula- do para la clorofila a y verde amarillento para la b (figura 3), sino,
adems, en una mayor polaridad de esta ltima con respecto a la primera. (Lpez 2004)

Las muestras se aplican en forma de manchas circulares sobre uno de los extremos del papel.
Tras el desarrollo, la identificacin de cada componente de la mezcla se realiza midiendo el
desplazamiento relativo de cada mancha en el papel respecto a un compuesto patrn o al
frente del disolvente (Walton y Reyes, 1983)

La clorofila a esta encargada de capturar las longitudes de onda violeta y rojo, siendo ms
abundante que la clorofila b que representa un color verde amarillento como lo muestra la
figura 3, los carotenoides junto con la clorofila b son los responsables de absorber aquellas
longitudes de onda que no es capaz de absorber la clorofila a. (Walton y Reyes, 1983)

CONCLUSIONES
Este mtodo se basa en la absorcin, solubilidad y separacin de pigmentos vegetales,
consiste en el uso de una tira de papel en la cual se permite la separacin de los pigmentos,
a medida que se desplaza estos se van situando a lo largo del papel el cual va tomando un
color, en este caso la nuestro tomo un color verde amarillo, Estas sustancias son coloridas por
el nmero elevado de compuestos. Cada tipo de pigmento que la compone presenta una
estructura qumica definida, con un patrn caracterstico de uniones dobles conjugadas que
determinan la absorcin selectiva de ciertas longitudes de ondas y as haciendo que cada
pigmento presente una coloracin especifica. Los resultados de la cromatografa dependen de
variables como la fuente de los pigmentos, la eficiencia de la extraccin, la actividad del
absorbente, los volmenes de cada solvente y las mezclas de cada solvente utilizadas en el
desarrollo.

REFERENCIAS
Harris, D. 2003. Anlisis Qumico Cuantitativo (6ta edicin). Barcelona: Editorial
Revert. Recuperado de https://es.scribd.com/doc/173762710/Informe-de-
Cromatografia
Loro Ferrer J F 2001. Gobierno de Canarias Manual de cromatografa, Direccin
General de Universidades e Investigacin Recuperado de
http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Thin.htm#historia
Torossi D. 2007. Principios de Anlisis Instrumental. Editorial Cengage Learning S.A.,
6 edicin, Mxico, Pp848-849. Recuperado de
https://es.scribd.com/doc/173762710/Informe-de-Cromatografia
Badui, S. 1995. Qumica de los Alimentos. 3era edicin. Ed. Alhambra Mexicana, S.A.
Mxico, D.F. recuperado de https://es.scribd.com/doc/173762710/Informe-de-
Cromatografia
Lopez cueto G. 2004. Leccion inaugural ciclo lectivo, universidad de alicante Espaa .
recuperado de file:///C:/Users/Personal/Downloads/Dialnet-
UnaExperienciaSencillaConFundamentosComplejos-2510362%20(1).pdf
Walton, H.; Reyes, J. 1983. Anlisis Qumico e Instrumental Moderno. Editorial
Reverte, edicin en espaol, Espaa, Pp332-333. Recuperado de
https://es.scribd.com/doc/173762710/Informe-de-Cromatografia
Mallol, J. (2008). Manual de Radio farmacia. Ediciones Daz de Santos, Espaa, Pp71.
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