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OBJETIVO

Al trmino de esta prctica, el alumno ser capaz de definir el efecto fisicoqumico


que generan las enzimas sobre diferentes sustratos. Indicando adems, las
propiedades qumicas que permiten que un enzima, catalice la modificacin de un
sustrato.
PRERREQUISITOS
En el cuerpo humano existen molculas de naturaleza proteica que realizan
funciones catalticas, dichas molculas son llamadas enzimas, sin ellas las
reacciones no seran lo suficientemente rpidas para mantener la vida.
Las enzimas realizan diferentes tipos de reacciones una de ellas es la reaccin
enzimtica simple, en la cual va a participar una ENZIMA, un SUSTRATO
(molcula sobre la cual actuara la enzima) unindose para generar un
PRODUCTO. Mackee (2003) menciona que aunque la actividad cataltica de
algunas enzimas solo depende de las interacciones de un lugar activo especifico y
el sustrato, otras enzimas requieren componentes no proteicos. (pag164)
Ejemplos seran los cofactores enzimticos los cuales pueden ser iones como el
Mg o el Zn o molculas complejas como las coenzimas. Se dice que cuando el
componente proteico de una enzima carece de un cofactor se le denomina
apoenzima, en cambio a las enzimas intactas unidas a sus cofactores se les llama
holoenzimas. (lehninger; 2000) Las enzimas solan nombrarse aadiendo el sufijo
asa al nombre del sustrato, para eliminar esta confusin la UIB creo un sistema
de denominacin sistemtica para las enzimas, siendo clasificadas segn la clase
de reaccin que cataliza, dividindose en 6 categoras principales; las
oxidoreductasas, catalizan reacciones de oxidacin reduccin; las transferasas
catalizan reacciones en las cuales hay transferencia de grupos qumicos de una
molcula a otra; al contrario las liasas catalizan reacciones para formar dobles
enlaces se aaden a un doble enlace eliminando grupos qumicos; hidrolasas,
estas catalizan reacciones en las que se produce la rotura de enlaces por adicin
de agua, tambin las hay isomerasas las cuales catalizan varios tipos de
reordenamientos intermoleculares; y las ligasas que catalizaran la formacin de un
enlace entre dos molculas. Mackee las define como catalizadores los cuales
modifican la velocidad de una reaccin debido a que proporcionan una ruta de
reaccin alternativa (pag 164) requiriendo un menor gasto de energa que las
reaccin sin catalizar. Las enzimas a diferencia de los catalizadores inorgnicos
son bastante especficas, esto significa que se unen a un nico tipo de sustrato
(unin especfica), ya que el lugar activo y sustrato poseen estructuras
complementarias (reactividad especfica). Los organismos pueden controlar
directamente las actividades enzimticas, permitiendo a las celular actuar
eficazmente a las variaciones en los nutrientes.

INTRODUCCIN
Los procesos que se llevan a cabo en el organismo, conllevan una infinidad de
reacciones bioqumicas, realizadas por catalizadores biolgicos llamados enzimas.
Las enzimas cambian la velocidad de reaccin qumica, sin afectar el resultado
final. La mayora de las reacciones requieren un aporte de energa, normalmente
en forma de calor. Las enzimas realizan su trabajo a temperaturas moderadas y
son especficas en las reacciones que catalizan cada una de ellas.
METODOLOGIA
MATERIAL:
1.- 6 tubos de ensayo
2.- 3 pipetas de 1.0 ml
3.- 2 pipetas de 5.0 ml
4.- 2 pipetas Pasteur
5.- 2 gradillas
6.- Tapones de algodn

Experimento No. 1
EFECTO DEL CALOR SOBRE LA ACTIVIDAD DE LAS ENZIMAS. "ACTIVIDAD
DE LA UREASA"

Se tomaron 3 tubos de ensayo y a cada uno de ellos se les agrego una


pizca de semilla de sanda.
Al tubo 1 y 2 se les agrego agua.
Se mezcl para tratar de homogenizar el polvo de sanda y enseguida
colocamos un tapn de algodn a los tubos 1 y 2 y introduciendo ambos en
bao a ebullicin durante 20 minutos.
Despus de la ebullicin a tubo 1 se le agregaron 5ml de agua a los tres 2
gotas de azul de bromotimol.
A los tres tubos se les agrego urea 5 ml a cada uno, despus de esto se
mezcl y tom el tiempo que transcurri en tomar un color caracterstico.

Experimento No.2
DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD DE RENINA.

Tomamos tres tubos de ensayo y en cada uno de ellos se les agregaron 3


ml de leche.
Al tubo 2 y 3, 5ml de oxalato de amonio.

y a todos 3 gotas de renina.


Mezclar e incubar a 37C durante 10 minutos y anotar los cambios
observados en cada uno de los tubos.
Calentar el tubo No. 2 a ebullicin y enfriar.
A los tubos 1 y 2 se le agregaron 10 gotas de cloruro de calcio.
Mezclar y comparar los cambios observados en los tubos No 2 y 3 con el 1.

RESULTADOS
Tabla 1. Resultados de coloracin en el experimento 1 (ureasa)
Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3

Azul claro
Amarillo plido
Azul claro

Tabla 2. Resultados de experimento 2 (renina)


Tubo 1
Tubo 2
Tubo 3

Imagen 1. Los tres tubos de


ensayo correspondiente a la
renina

No formo cuajo
Si formo cuajo
Si formo cuajo

Imagen 3. Los tres tubos de


ensayo correspondiente a la
ureasa

DISCUSIN
UREASA
Al tubo 1 se le agrego una pizca de semilla de sanda (que tiene una gran fuente
de ureasa), se puso a ebullicin y se le agregaron los 5 ml de agua y las dos gotas
de azul de bromotimol, se dio un cambio de color azul, lo cual indica que la
solucin fue bsica.
Despus se le agrego menos de una gota de un cido dbil hasta que fuera
amarillo y se agreg 5 ml de urea y por ultimo mostro un color amarillo plido. El
tubo #1 fue azul antes de agregarle el cido dbil, debido al amoniaco de la
reaccin 2 NH3 que viene de la hidrolisis de la urea y es una base porque no se
puso a ebullicin junto con el agua y sin agua las semillas de sanda estn
protegidas del calor y as no se desnaturalizan y la enzima esta integra. En el Tubo
#2 se le agrego una pizca de semilla de sanda, 5 ml de agua e igual se puso a
ebullicin por 20 min. Pasados los 20 min, se le agrego 2 gotas de azul
bromotimol en este caso se mostr un cambio de color amarillo as que la
solucin es acida y despus se agreg 5 ml de urea y se vio igual con un color
amarillo. El calor amarillo se debe a que el tubo #2 se puso a ebullicin con 5 ml
de agua y eso desnaturalizo a la enzima y no hubo reaccin. Aqu se puede ver el
efecto que tiene la temperatura con las enzimas.
RENINA
Al tubo #1 se agreg 3 ml de leche, 3 gotas de renina y se puso a incubar por 10
min a 37c y se observ una sustancia liquida blanca sin cuajo. En el tubo #2 se
agreg 3 ml de leche, 0.5 de oxalato de amonio, 3 gotas de renina y se puso a
incubar por 10 min a 37c y pasado el tiempo se puso a ebullicin por 5 minutos y
para terminar se le agrego cloruro de calcio y se form inmediatamente un cuajo.
La formacin del cuajo es debido a que la leche tiene una protena que es la
casena y la casena es el sustrato de la renina. La renina hidroliza casena y
produce paracasenas. El oxalato de amonio ayudo como cofactor de la renina se
vio la formacin de cuajo en el tubo#2 y en tubo #1 no se vio el cuajo por la
ausencia del oxalato de amonio, en parte el tubo 2 y 3 se les agrego cloruro de
calcio y en tubo #1 no, el cloruro de calcio se le agrego con el fin de regresarle a
la leche sus propiedades originales

CONCLUSIONES

Se observ el efecto de la enzima sobre el sustrato, en este caso la renina


y ureasa, se pudo observar los cambios de coloracin y consistencia al ser
sometidas a temperaturas altas.

Cuestionario
1.- De acuerdo a la clasificacin enzimtica a que clase pertenecen las enzimas
utilizadas (renina y ureasa) y por qu?
La ureasa es una hidrolasa, ya que cataliza la hidrolisis de la urea.
Y la renina tambin es hidrolasa, ya que se encarga de hidrolizar la casena
(protena presente en la leche)
2.- Mencione 3 bacterias que contengan la enzima ureasa
Las diferentes especies del gnero Proteus son Ureasa positivos como Proteus
vulgaris o Proteus mirabilis.
3.- Qu grupos qumicos participan en el sitio activo de las enzimas?
CO2, NH3, COOH
4.- Las enzimas cambian la constante de equilibrio de las reacciones que
catalizan? No, por qu depende slo de la diferencia entre los niveles de energa
de los reactivos y los productos

5.- Por qu algunas protenas actan como catalizadores (enzimas) de


reacciones con alta especificidad, mientras que otras protenas que tambin
contienen aminocidos en su estructura no lo hacen? Porque aunque la actividad
cataltica de algunas enzimas depende de las interacciones entre lugar activo
sustrato, otras enzimas necesitan componentes no proteicos.

Bibliografa

Ralph Burns Fundamentos de qumica Editorial Prentice hall, 4ta edicin.


Mxico, 2003.
Dr. Lagua Bioqumica de laguna Editorial El Manual moderno, 2da edicin.
Mxico, 2002.
Albert, L. L., y Michael, C. (2009). Lehninger: principios de bioqumica.
Editorial omega
R. M., y Trudy, M. (2003). Bioqumica: la base molecular de la vida. Editorial
McGrawHill
Problemas de Energa, Enzimas y Catlisis (Universidad de alcal de
Henares, Trans.). (2004, May). Retrieved October 21, 2016, from
http://www.biologia.arizona.edu/biochemistry/problem_sets/energy_enzyme
s_catalysis/01t.html

NOMBRE: Arianna Lizeth Gonzlez Almanza


MATRICULA: 152747
NOMBRE DE LA PRCTICA: anlisis enzimtico cualitativo
PROGRAMA: cirujano dentista
MATERIA: bioqumica (laboratorio)
HORARIO: martes 7:00 am 9:00 am