Transcripción del ADN

1er paso de la expresión génica.

Transcripción: la síntesis de moléculas de ARN a
partir de ADN molde. Las bases A, U, C, G del ARN
se aparean con las bases T, A, G, C del ADN. El
apareamiento se logra mediante el establecimiento
de uniones transitorias (no covalentes) de las bases
del ADN con las bases del ARN en formación, lo
cual permite que se produzca la unión de los
nucleótidos del ARN entre sí. Las uniones
fosfodiester: catalizadas x las enzimas ARN
polimerasas. La molécula de ARN siempre resulta
polarizada con un fosfato en extremo 5’ y un OH en
su extremo 3’.
1. Se copia solo una de las 2 cadenas del ADN, la
que corre en dirección 3’-->5’. X lo tanto, el
ARN se sintetiza en sentido 5’ --> 3’.
2. Se transcribe, se toma como molde la cadena
3’ --> 5’ del gen y la transcripción avanza en
dirección 5’-->3’. Sera por lo tanto antiparalela
y complementaria a la hebra molde de ADN
3. Los ribonucleotidos se agregan de a uno x vez,
lo que hace innecesaria la separación de las 2
cadenas del ADN en toda su extensión. Solo se
separa un tramo de aprox 10 pares de
nucleótidos lo cual forma en el ADN una
burbuja de transcripción que se desplaza a Los monómeros con los cuales se construyen las
medida que se desplaza a medida que se “leen” moléculas de ARN se presentan en el nucleoplasma
sus nucleótidos. como ribonucleotidos trifosfato (ATP, UTP, CTP,
GTP)
3 tipos de ARN polimerasas
ARN polimerasa I  síntesis del ARNr 45S
ARN polimerasa II  síntesis del ARNm, los miARN
y la mayoría de los ARNpn.
ARN polimerasa III  síntesis del ARNr 5S, los
ARNt, el ARNpc y algunos pocos ARNpn

Molécula de ARN polarizada: el transcripto 1rio. En

el extremo 5’ el primer nucleótido del ARN retiene
los 3 fosfatos, mientras que en el extremo 3’ el
último nucleótido presenta un grupo oxhidrilo OH
libre.
Transcripción de los genes de los ARN mensajeros.
Los genes que codifican a los ARNm son activados x
factores de transcripción. La síntesis de un
ARNmensajero se produce cuando las secuencias
reguladoras y el promotor del gen se activan x
proteinas llamadas factores de transcripción.
 Factores de transcripción específicos:
Los factores de transcripción específicos, al ser
particulares para cada gen, se califican como
facultativos. Estos factores desencadenan o
frenan la transcripción
Estos actúan antes que los basales. Se depende de
la activación previa de las secuencias reguladoras x
factores de transcripción específicos. Interactúan
con el regulador del gen y según lo hagan con
secuencias amplificadoras o inhibidoras del
regulador, se conocen como activadores y
represores
Una vez que los factores específicos se han unido a
las secuencias reguladoras (los activadores en este
caso) ¿Cómo actúan sobre el promotor? (ambas
partes del gen están muy distanciadas).
Simplemente, el gen se curva y forma una
horquilla, bucle. El ADN se dobla sobre sí mismo
para que interactúen el regulador y el promotor.
Los factores específicos unidos a las secuencias
reguladoras interactúan con los factores basales
situados en el promotor. Ello es posible xq los
factores específicos cuentan con 2 dominios: uno
que se conecta con el ADN regulador y otro que se
conecta con los factores basales, que a su vez están
unidos con el promotor del gen (factor TFIID)
Cuando el complejo queda integrado, los factores
basales activan a la ARN polimerasa II y esta inicia
la transcripción del sector codificador del gen.
 Factores de transcripción basales:
Como los factores de transcripción basales son los
mismos para casi todos los genes, se dice que son
constitutivos.
Son requeridos x el promotor pues lo activan, se
unen a la secuencia TATA para comenzar la
síntesis del ARNm. Existen varios: TFIID, TFIIA,
TFIIB, TFIIF, TFIIE, TFIIH, los cuales actúan
secuencialmente en el orden mencionado.
1. TFIID se une al promotor (necesita de la
activación previa de las secuencias
reguladoras) altera la estructura de la
cromatina en el promotor  eso atrae a los
restantes factores basales y a la ADN
polimerasa II con la cual esos factores se
unieron previamente.
2. La ARN polimerasa II se une al promotor
(secuencia de iniciación) (que debe estar
activado). El promotor es el segmento del gen
donde se coloca la ARN polimerasa. La ARN
polimerasa II es fosforilada x el TFIIH
3. La polimerasa II x sí misma no puede iniciar la
transcripción del segmento codificador del gen,
pues tiene que ser activada x los factores de
transcripción basales unidos al promotor. Los
necesita para poder localizar al promotor. Se
forma entonces un complejo de inicio de la
transcripción que comprende a la ADN
polimerasa unida al promotor junto con los
factores de transcripción.
4. La ARN polimerasa II fosforilada se desprende
de los factores de transcripción y del ADN
promotor e interactúa con el ADN en el sitio en
que debe iniciarse la transcripción (el extremo
5’ del segmento codificador del gen), el cual es
marcado x el propio promotor.
5. Allí, la ARN polimerasa forma la burbuja de
trascripción  separación localizada de las 2
cadenas, hebras del ADN en el sector del gen
contiguo al promotor y deja expuesto, junto
con otros pocos, al primer
desoxirribonucleotido que va a ser leído  se
inicia la síntesis del ARNm
6. Frente a ese desoxirribonucleotido se acomoda
un ribonucleosido trifosfato complementario,
cuya base establece una unión no covalente
con la base del desoxirribonucleotido.
7. Luego se arrima un 2do ribonucleosido
trifosfato (complementario del 2do
desoxirribonucleotido expuesto en el ADN) y
sus bases se unen. Los 2 ribonucleotidos que
concurrieron a la burbuja quedan juntos  se
produce una unión fosfodiester mediante la
misma ARN polimerasa y se genera un
dinucleotido.
1. Con el dinucleotido se inicia la síntesis del ARN
que prosigue en dirección 5’3’ a medida que
se acercan y se unen entre si los ribonucleosido
trifosfato indicados x el ADN.
2. Proceso de elongación: La ARN polimerasa va
conduciendo el alargamiento progresivo del
ARN a medida que se van incorporando los
ribonucleotidos siempre en el extremo 3’. Esta
se desliza sobre el ADN en dirección 3’5’ y hace
avanzar la burbuja y los nucleótidos de la
retaguardia se vuelven a unir ya que el los
ribonucleotidos se van desligando de la cadena
molde de ADN. Se forma un complejo de
elongación, constituido x la ARN polimerasa, el
ADN molde y la hebra naciente de ARN.
3. TERMINACION: La transcripción concluye
cuando la ARN polimerasa alcanza la secuencia
de terminación del gen. En ese punto, la
enzima se libera y también se libera el ARN,
que adquiere el nombre de transcripto 1rio. El
conjunto de transcriptos 1rios de los ARNm se
conoce como ARN heterogéneo nuclear o
ARNhn  se encuentran combinados con
proteinas básicas que actúan como chaperonas
que los mantienen desplegados. Transcriptos
1rios+ proteinas  ribonucleoproteina
heterogénea nuclear o RNPhn.
Los factores de transcripción específicos que
frenen la transcripción impiden la formación de la
horquilla y x ende, la formación del complejo de
factores de transcripción específicos-basales y no
se activara la ARN polimerasa.
Regulación de la actividad de los genes de ARNm
Desde que se supo que en los organismos
pluricelulares todas las celulas poseen el mismo
genoma, se ha planteado la necesidad de
responder a este interrogante: ¿Por qué en cada
tipo celular ciertos genes son seleccionados para su
transcripción y no otros?
Mecanismos celulares que determinan que
proteina ha de sintetizarse y en qué cantidad:
 Regulaciones génicas derivadas de la
conclusion prematura de la transcripción.
 Los + importantes  Mecanismos de
regulación de la actividad de los genes que
operan en el comienzo de la síntesis de los
ARNm, a nivel de la transcripción ya que
actúan sobre las secuencias reguladoras y el
promotor de los genes.
Estas secuencias son influidas x factores de
transcripción específicos, que ingresan en el núcleo
para activar o inhibir a los genes. Los factores de
transcripción que frenen la transcripción impiden
la formación de la horquilla y x ende, la formación
del complejo de factores de transcripción
específicos-basales y no se activara la ARN
polimerasa. Ej de regulación a nivel transcripcional:
FT basales, FT específicos, heterocromatinizacion
(no se transcribe), modificaciones químicas del
ADN que impiden o permiten su transcripción
como la metilación de ciertas bases.
Los factores de transcripción se asocian a los  Cremallera de leucina:
reguladores y al promotor del gen a través de Consta de 2 cadenas polipeptidicas dispuestas en
átomos expuestos en los surcos del ADN paralelo, ambas con forma de hélice. Cada cadena
posee 2 sectores, uno
Los factores de transcripción reconocen al ADN de
que se une al ADN y
los promotores y de los reguladores x los grupos
otro que lo hace con
químicos de la parte exterior de la doble hélice a
su homólogo,
nivel de los surcos mayor y menor. Asi, la
formando un dímero.
especificidad de la unión depende de la
Los sectores unidos
complementariedad estructural entre las partes
entre si presentan una
interactuantes.
leucina que da al interior del dímero. Los sectores
Visto desde el surco mayor del ADN, cada par de
no dimerizados poseen una alta proporción de
nucleótidos en las 4 combinaciones posibles
aminoácidos básicos, que son los que generan la
muestra un átomo de oxígeno, uno de hidrogeno y
unión especifica del F. de T con el ADN.
uno de nitrógeno, que son capaces de establecer
uniones no covalentes (como P.D.H) con átomos de
 Dedos de cinc.
los aminoácidos de los factores de transcripción.
Cada dominio del factor de transcripción está
La información cifrada en el surco menor del ADN
compuesto x una
es menos amplia que la del surco mayor, tal vez xq
secuencia de unos
el menor resulta estrecho para la entrada de
pocos aminoácidos
algunos aminoácidos.
y un átomo de cinc,
Además de estas asociaciones específicas, entre los
el cual se liga tetraédricamente a 4 cisteínas o a 2
factores de transcripción y el ADN se producen
cisteínas y 2 histidinas. Forman dímeros.
uniones inespecíficas, en una de ellas participa el
esqueleto de fosfatos del ADN y, si bien no le
 Hélice- bucle- hélice
confiere especificidad a la unión, la estabiliza.
Esta estructura posee 2
cadenas polipeptidicas
Los factores de transcripción contienen estructuras
con 2 sectores
dimericas especiales. Regulan la transcripción.
funcionales en cada una:
Las proteinas de los factores de transcripción
el específico (rico en
contienen estructuras dimericas simétricas, las
aminoácidos básicos)
cuales se encastran en los surcos de la doble hélice
reservado para la unión
del ADN. La dimerización de los factores de
del factor de transcripción con el ADN y el
transcripción y la simetría del ADN son condiciones
responsable de la dimerización. Sus partes
necesarias para que los aminoácidos puedan
dimerizadas no se encastran
interactuar con las bases del regulador y del
promotor.

Estas estructuras dimericas forman estructuras

secundarias y terciarias con diseños comunes:

 Hélice-vuelta-hélice:
Esta estructura consta de
2 cadenas de aminoácidos
con forma de hélice, separadas x una “vuelta” o
cadena más corta. Una de las hélices (hélice de
reconocimiento) lee la secuencia de nucleótidos en
el sector regulador del gen, al que se une, y la otra
mantiene la hélice lectora en la posición adecuada.
Forman dímeros.
El enrollamiento de la cromatina influye sobre la
actividad, expresión de los genes. Regulan la
transcripción
Las histonas regulan la transcripción de los genes.
La ARN polimerasa no puede actuar si no se
desenrollan los tramos de ADN que rodean a las
histonas de los nucleosomas, al menos durante la
transcripción. Se ha sugerido que los factores de
transcripción basales no solo activan al promotor
del gen sino también el desarmado de los
nucleosomas en la parte inicial del segmento
codificador de un gen
1. Los factores de transcripción actúan sobre
las histonas H4, que se modifican y
desencadenan la remoción de las otras
histonas. Mediante agregado o remoción:
Transcripción del gen del ARNr ribosómico 45S.
La iniciación de la síntesis x la ARN polimerasa I
requiere 2 factores de transcripción:
 El SL1 se asocia al promotor del gen
 El UBF al regulador (amplificador)
 Estos 2 factores junto con la ARN polimerasa I
forman un complejo que da inicio a la
transcripción
Transcripción del gen del ARNr ribosómico 5S
Su transcripción es dirigida x la ARN polimerasa III
que actúa cuando 3 factores de transcripción
(TFIIIA, TFIIIB, TFIIIC) se unen al promotor del gen.

Esto es considerado un cambio epigenetico.

2. Separación local de las 2 cadenas del ADN.
A medida que avanza x el segmento
codificador del gen, la propia ARN
polimerasa va desenrollando el ADN de los
nucleosomas, los cuales se rearman
conforme la enzima avanza.
Transcripción de los genes de los ARNt de
transferencia
Es dirigida x la ARN polimerasa III, la cual requiere
que se unan al promotor los factores de
transcripción TFIIIB y TFIIIC

Propician la actividad de los genes

Bloquean, impiden la actividad de los genes.
El agregado o remoción en las histonas.

La metilación del ADN influye sobre la act génica.

Además de las 4 bases conocidas (A,T,C, G) en
algunos puntos el ADN contiene una 5ta, la
metilcitosina o mC, que se genera al agregarse un
grupo metilo (CH3) a la citosina  metilación del
ADN  restringida a citosinas seguidas x guaninas.
La metilación del ADN a nivel del promotor puede
abolir la actividad de un gen, mientras que muchas
metilaciones en su región codificadora suelen no
afectarla.
La herencia de las mC se debe a que durante la
replicación, las C de las cadenas hijas adquieren un
grupo metilo. Esta metilación es dirigida x la
enzima metilasa de mantenimiento
Transcripción de los genes en celulas procariotas
 Tiene lugar en el citoplasma donde se
encuentra el cromosoma bacteriano.
 Hay un solo tipo de ARN polimerasa en las
celulas procariotas que sintetiza todos los tipos
de ARN.
 No se requieren factores de transcripción para
el inicio de la transcripción.
 El promotor y las secuencias de terminación
presentan diferencias con respecto de los
eucariotas.
 El ARNm, una vez sintetizado no madura ni se
procesa, sino que su secuencia puede
traducirse directamente para la producción de
una proteina
 La regulación de la expresión génica puede
tener lugar tanto al comienzo como al final de
la transcripción.
Las bacterias poseen miles de genes, entre los
cuales se encuentran los que codifican a las
proteinas enzimáticas. Puesto que las bacterias
obtienen su alimento directamente del medio en
que vive, los mecanismos que regulan la actividad
de sus genes deben adaptarse rápidamente a los
cambios en la calidad y cantidad de las moléculas
(alimentos, azucares, lípidos, ami) en dicho medio.
 Un ejemplo de control transcripcional lo
proporcionan los genes de las enzimas que
intervienen cuando la bacteria Escherichia coli
utiliza la lactosa como alimento.
Regulación x inducción enzimática: la
disponibilidad de un sustrato estimula la
producción de las enzimas que intervienen en su
degradación.
Las 3 enzimas necesarias para el aprovechamiento
de la lactosa como alimento son la 𝛽-galactosidasa,
la permeasa y la transacetilasa, cuya codificación
corresponde a una unidad genética común llamada
operon lactosa:
 Está formado x 1 regulador, 1 promotor, 1
operador y un segmento codificador q posee 3
genes que codifican a las 3 enzimas
 La sustancia inductora natural del operon lac es
la alolactosa, un metabolito de la lactosa. Su
presencia produce un cambio conformacional y
hace posible la transcripción del gen.
Un operon es un grupo de genes que se
encuentran muy próximos entre si y que son
regulados (activados o inhibidos, reprimidos) en
forma conjunta x un operador y un promotor.
Además, suele intervenir un gen inhibidor que
codifica a una proteina llamada represor. Los genes
se hallan en el segmento codificador y son
transcriptos a una misma molécula de ARNm
llamado ARN policistronico.
CONTROL GENETICO: La inducción y la represión
enzimática proporcionan un control general del
metabolismo en los procariotas, al activar o inhibir
la síntesis de las enzimas bacterianas de acuerdo
con las necesidades.
Otro caso: En la E.coli, el aminoácido acido
triptófano es sintetizado x 5 enzimas codificadas x
el operon Trp (operon triptófano). Estas enzimas se
producen solo cuando son necesarias: en la
represión enzimática, la síntesis del ARNm que
codifica a esas enzimas es bloqueada cuando la
concentración del triptófano (el producto de las
enzimas) sobrepasa ciertos niveles. Mediante el
mecanismo de represión enzimática, la bacteria
controla también la síntesis de otros aminoácidos y
de las moléculas precursoras de los ácidos
nucleicos.
El triptófano cuando se halla en exceso actúa como
un correpresor. En presencia de ese correpresor la
transcripción NO tiene lugar ya que impide el
acceso de la ARN polimerasa al promotor.
Mecanismo adicional de la bacteria basado en la
interrupción prematura de la transcripción:
cuando la concentración de triptófano supera
ciertos niveles, el operon Trp interrumpe su
transcripción y genera un ARNm corto, incapaz de
producir las enzimas que sintetizan el aminoácido
Mecanismos que controlan la actividad, NO la
síntesis de las enzimas.
 Inhibición x retroalimentación
 Activación x precursor.
El control genético economiza energía ya que evita
la síntesis de enzimas innecesarias. En cambio, el
control de la actividad enzimática permite una
adaptación casi instantánea del metabolismo
celular.