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Proyecto Avance
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SANTO DOMINGO
PROYECTO DE GENÉTICA
TEMA:
AUTORES:
CURSO:
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1. RESUMEN
El cáncer es una enfermedad que cobra miles de vidas anualmente, frente a esta
realizar la función de “copiar y pegar” regiones de ADN dañadas o con defectos que
se dan a nivel molecular o a nivel genético, una de las muchas aplicaciones de esa
técnica dentro de los estudios del cáncer se ve enmarcada en el cáncer de mama donde
BRCA2, esta técnica a pesar de sonar como la cura definitiva para el cáncer requiere
2. INTRODUCCIÓN
genoma. Una de las técnicas actualmente más revolucionarias y con mayor aporte al
short palindromic repeats). Es una técnica reconocida y usada a nivel mundial por su fácil
manejo, rapidez y además con un alto nivel de eficacia. (Lagunas F, s.f. y Gómez, L. et al.
2019).
El CRISPR-Cas9 tuvo sus inicios en el año 1987, cuando durante un estudio realizado
de ADN repetidas que parecían no tener una función en específico. Más tarde en el año 1993,
de forma independiente, el investigador Juan Francisco Martínez Mojica junto con su grupo
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reportaron el mismo hallazgo, pero en genomas de arqueas, en este caso las secuencias eran
De acuerdo con Jinek et al. (2012), en el año 2012, Jennifer Doudna y Emmanuelle
Según Cárdenas (2019), la técnica CRISPR puede ser comparada con un editor de
texto que corta y pega parte de un genoma. Esto permite, en muchos casos que se pueda
eliminar, modificar o reemplazar algún gen que no esté funcionando correctamente, y estas
nuevas secuencias introducidas pueden ser heredadas a los descendientes. “CRISPR es una
curiosa región del ADN de algunas bacterias que actúa como un mecanismo inmunitario
CRISPR, usado para la modificación del genoma de ciertas baterías infecciosas, permite que
Otros estudios, como el realizado por Martínez, B. (2020), donde se menciona el uso
modificada que permiten el estudio fenotípico de esa generación, con esto se plantea el reto de
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conocer cómo se da el proceso de regeneración para después aplicarlo en otros animales a fin
del ADN.
genética y aplicar CRISPR es el factor económico que influye sobre la misma, el método
CRISPR a pesar de no ser el método pionero dentro de la edición genética ofrece grandes
beneficios económicos y es que CRISPR “permite modificar el genoma con una precisión sin
precedentes, y de forma mucho más sencilla y barata que cualquier otro método
para fines medicinales o investigativos, a pesar de las múltiples trabas que se le ha impuesto a
esta tecnología, los avances cada día son más visibles desde la primera vez que se sintetizó
una bacteria en 2014 cuyo nombre fue expuesto como “Mycoplasma laboratorium 1” hasta
las investigaciones más recientes como la cura de enfermedades del mtDNA, luego esta
método bastante eficaz para tratar el cáncer, descubriéndose, hasta el año 2017, más de 140
genes driver que producen cáncer, por lo que, mediante la identificación y secuenciación de
las mutaciones en un tumor, CRISPR sería una buena alternativa para reparar esta secuencia
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Ibáñez et al, (2021) mencionan en su investigación que se han diseñado ciertos
complejos proteicos que tienen la capacidad de reconocer la secuencia diana sin cortarla, es
decir se ha inhibido esta capacidad a la proteína Cas9 con el fin de usarse para dirigir a otras
proteínas que puedan modificar genes específicos para cambiar los patrones epigenéticos.
prometedores en el tratamiento del cáncer usado CRISPR, en dicho estudio se crearon células
T con el gen alterado en ciertas proteínas que se encuentran en dichas células y que se
conocen como PD1, mediante CRISPR; estas fueron implantadas en personas con cáncer de
además se obtuvo que en ciertos pacientes se logró obtener una enfermedad estable durante 8
Por otro lado, en una estudio que se realizó por Balon, K.; Sheriff, A.; Jacków, J.;
Łaczma ´nski, Ł. (2022) , se identificó promotores específicos del cáncer que controlan los
genes sobreexpresados en las células tumorales, en los cuales se puede usar la terapia génica
CRISPR/Cas9 para lograr la expresión selectiva de la proteína Cas9 y los genes dirigidos a
sgRNA (guía único ARN) necesarios para el crecimiento celular; en los resultados se encontró
que estos promotores en tejidos sanos ejercen una actividad baja pero significativa que es
circuito de gen puerta) usando dos promotores que controlan un gen de salida, se conduce a
una apoptosis, detención del crecimiento y motilidad de las células cancerosas, por lo que
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3. OBJETIVOS
4. MARCO TEÓRICO
conceptos importantes acerca de esta enfermedad, todo esto a fin de mantener un soporte
impredecible e incurable, esta enfermedad dada por cambios en las secuencias del ADN cobra
miles de vidas anualmente y que, en última instancia, “es una enfermedad del organismo, que
coopta los tipos de células normales (Figura 1) y las funciones de los tejidos, y elude los
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Con cada vez mayor incidencia a nivel mundial el cáncer como enfermedad
orígenes del mismo se torna todo un desafío al desconocerse los eventos que lo subyacen.
Fuente: https://www.cancer.gov/espanol/cancer/naturaleza/que-es
Fuente: https://revistas.ucm.es/index.php/PSIC/article/download/PSIC0606130035A/15910
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Se estima que uno de los principales factores asociados al aparecimiento de cáncer
tiene su origen en fallas hormonales (véase tabla 1), se ha descubierto también que estas fallas
hormonales están estrechamente ligadas al sistema inmunológico (véase tabla 2), así, se
estima como descuidos en los hábitos de vida de un paciente propenso a tener cáncer
factores genéticos en el cáncer de mama, al respecto se han realizado algunos estudios los
cuales han revelado que de todos los casos estudiados se estima que alrededor de un 10 % de
ellos se deban a un origen genético. “Desde 1995, una gran proporción de casos hereditarios
son atribuibles a mutaciones en dos genes, BRCA1 y BRCA2 (10%). Las mujeres portadoras
de una mutación en estos genes tienen un riesgo de 80% de desarrollar cáncer de mama, de
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El gen BRCA1 fue nombrado por primera vez en 1991 por Mary-Claire King. Su
con casos de cáncer de mama detectado a edades tempranas, y fue así, posterior a estos
estudios como en 1994 se relacionó el cromosoma 13 con el gen BRCA2 El cáncer de mama
en hombres es una alteración rara que representa menos de 1% de todos los cánceres y causa
0.1% de las muertes por cáncer entre los hombres. (Narod y Rodríguez, 2011)
países como Estados Unidos, Canadá, y otros países de Europa Occidental, se unen bajo el
objetivo de evaluar pacientes que bajo alta probabilidad puedan tener cáncer de mama de
origen hereditario. Y es que la capacidad de identificar estos genes dentro de pacientes con la
enfermedad del cáncer en etapa temprana aumenta las posibilidades de recuperación de las
mismas.
Se denomina CRISPR a una región de ADN presente en ciertas bacterias que funciona
como mecanismo de defensa contra los virus. Tienen la capacidad de detectar a los virus
trocearlos obteniendo así fragmentos que son utilizados para inmunizar a la bacteria frente a
tales virus (Capella, 2016). La constitución del CRISPR-Cas9 comprende dos componentes
básicos: la enzima Cas9 y el CRISPR. El primer componente es una enzima que funciona
como tijeras moleculares ya que permite cortar y pegar cualquier molécula de ADN de
manera muy precisa y controlada (Morán, 2018). El segundo componente es una molécula de
ARN encargada de transmitir información biológica dentro del genoma. Tiene el papel de
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guía de las tijeras moleculares, pues conduce a la enzima hasta la base de nucleótidos que
tiene que cortar. Al observar este comportamiento los científicos se dieron cuenta de que
system) al igual que la naturaleza. Tras varios estudios obtuvieron versiones sintéticas de
ARN guía y aprendieron a programarlas para que cumplan su función en todo tipo de células.
Así, en cuanto ponían una enzima (tijeras genéticas) frente a una secuencia de ADN, esta
podía cortar y pegar nucleótidos, editando los genes y manipulando la función de estos de
forma que lograba modificar la secuencia del ADN de un organismo (Zhang et al., 2014).
Debido a que este método es sencillo, económico y eficaz muchos grupos han
empezado a realizar estudios y experimentos para su aplicación y mejora para hacerla más
provechosa. Un ejemplo de ello es un ratón que llevaba en todas sus células el “escalpelo
genético” Cas9, desarrollado por el equipo de Zhang para habilitar ampliamente la aplicación
de Cas9 in vivo. Este ratón al haber sido modificado genéticamente “acelera toda la
investigación dirigida a conocer las causas genéticas de las enfermedades y los medios para
experimentar con ellos con gran sencillez y poco coste” (Capella, 2016, p.225). Este avance
permite que un experimento que antes tardaba una década trabajando en conjunto con varios
investigadores ahora lo pueda realizar una sola persona y en poco tiempo. Incluso en el año
2015, Zhang volvió a hacer un descubrimiento, la enzima Cpf1, presente en algunas bacterias
y con la característica de ser más pequeña y fácil de transportar a células maduras, además de
falte mucho por saber y hacer. Debido a esto han surgido varias preocupaciones en relación
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desarrollo de avances en salud a partir del entendimiento de las enfermedades humanas
investigación son reacios a apoyar esta tecnología por motivos éticos y sociales (Munawar &
Ahmad, 2021).
uso de esta nueva tecnología, ya que puede utilizarse para alterar el genoma, cuyo resultado
puede ser nefasto e irreversible (Artigas et al., 2021). Esta nueva tecnología necesita que la
sociedad reflexione sobre, si quiere realmente cambiar la información genética para modelar
cómo han de ser sus descendientes. Capella (2016) señala que “desde que J. Robert
Oppenheimer se diera cuenta de que la bomba atómica que había creado para proteger al
mundo podía igualmente acabar con él, los científicos responsables de un descubrimiento no
habían vuelto a tener la misma sensación de estar bajo sospecha por el uso que hagan con él”
DNA y la forma en que se unen al mismo, los investigadores han logrado identificar seis tipos
distintos de sistemas CRISPR/Cas (I-VI) (Makarova et al., 2011). En nuestro caso solo nos
enfocaremos en el tipo II ya que es el más utilizado para realizar ediciones genéticas puesto
que, a diferencia de otros sistemas, este solo necesita de la enzima Cas9 (Mei et al., 2016). La
transcripción de los elementos del sistema CRISPR/Cas se realiza en una región promotora
la región CRISPR, compuesta por los elementos repetidos y de los espaciadores, estos últimos
encargados de codificar moléculas de RNA cortas (30-40 pares de bases) denominadas RNA
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CRISPR (crRNA) las cuales guían a la proteína Cas a su sitio blanco. Por último, tenemos a
los genes encargados de la codificación de las proteínas Cas (Figura 2) (Chávez, 2020).
por el sgRNA. Según Riveros et al. (2020), el sgRNA se forma por la unión de dos RNA:
crRNA y tracrRNA y forman un complejo con la proteína Cas9. Esta enzima posee los
dominios catalíticos RuvC y HNH, además del dominio de interacción con el PAM. Ambos
De acuerdo con Khan et al. (2018), para todos los tipos de sistema CRISPR/Cas el
maduración e 3) interferencia.
5. METODOLOGÍA
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prestigio tales como “Science”, “Nature” y “Science direct”, y artículos con información
la edición "programable" de genomas, que se pudiera cortar de manera específica una cadena
de ADN in vitro con fines terapéuticos (Jinek et al., 2012). Para esto fué necesario que los
investigadores diseñaran un protocolo con tres pasos básicos. El primero consiste en el diseño
y síntesis de una molécula de ARN de una solo hebra, conocida con el nombre de ARN guía,
la cual tiene la capacidad de unirse a la enzima Cas9, y cumple con las mismas características
moleculares de las secuencias CRISPR, es decir, que es capaz de reconocer y unirse a una
secuencia específica del ADN o un gen que se quiera editar o corregir. Cuando el ARN guía
vitro el complejo CRISPR-Cas9 a la célula que se va a tratar, y una vez dentro, el complejo
reconocerá la posición exacta del genoma donde la enzima Cas9 debe cortar (Castillo, 2016).
célula, como consecuencia del corte que realizó la endonucleasa Cas9, esta acción puede
ocasionar la pérdida o adición de información genética en la región del genoma que se desea
editar. Las consecuencias podrían ser la inactivación del gen o un mal funcionamiento de la
proteína que codifica. Dado que se busca reemplazar las mutaciones cancerígenas, al último
paso se le pueden incorporar algunos cambios, que consisten en adicionar una molécula de
ADN molde homóloga de la región que se quiere editar y que esté libre de mutaciones
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de ADN previamente reconocido y tratado por el complejo CRISPR-Cas9 es reemplazado
6. RESULTADOS
como una excelente herramienta de edición genética, sin embargo, ciertas limitaciones en la
rotura de doble hebra (DSB), misma que en malas prácticas mostraron deleciones equivocas
que no sean de interés científico aplicativo y que puedan resultar en cromotripsis lo que
El primer informe clínico que usó CRISPR para la terapia del cáncer se dio en un
modificadas ex vivo con proteína de muerte celular programada 1 (PD-1) en el tratamiento del
permite el escape inmunitario de los cánceres. Los anticuerpos que neutralizan PD-1 o su
ligando PD-L1 se utilizaron con éxito para el tratamiento de cánceres de pulmón, entre otros.
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han registrado otros cuatro ensayos que aplican el mismo concepto de inactivación de PD-1
para el tratamiento de otros tipos de cáncer, incluido el cáncer de próstata, vejiga, esófago y
Fuente: www.clinicaltrials.gov
Así mismo gracias a los estudios que se han realizado junto a la nanotecnología se ha
logrado la inducción del ciclo celular y la muerte celular de líneas celulares de cáncer in vitro,
cLNP)
Para dar paso a la edición terapéutica del genoma en el cáncer, tras evaluar líneas de
células cancerosas de dos cánceres agresivos y difíciles de tratar: la línea de células 005
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y OV8; una línea celular de adenocarcinoma de ovario seroso de alto grado que es altamente
GBM 005 u OV8 con sgPLK1, pero no con sgGFP, los cLNP interrumpieron eficientemente
M 48 horas después del tratamiento y redujo la viabilidad celular 96 horas después del
la tinción de DAPI y/o anexina V aumentó después de la incubación con sgPLK1, pero no con
provocó la detención del ciclo celular y la muerte de GBM 005 y OV8 in vitro (Rosenblum et
al., 2020).
Fuente: https://www.science.org/doi/full/10.1126/sciadv.abc9450
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7. CONCLUSION
enfermedad del cáncer, no obstante, cabe mencionar que, aunque la técnica estudiada
demuestre ser eficaz y relativamente económica no muestra superioridad ante otras técnicas
científicos aún se requiere de investigación e inversión para poder aprovechar al máximo esta
herramienta, sus múltiples aplicaciones en el campo del cáncer se han dado gracias a
que ofrece a largo plazo soluciones biotecnológicas frente a distintos tipos de cáncer, tal vez
solo se necesite de tiempo e investigación para que esta herramienta salte a la historia como la
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8. BIBLIOGRAFÍA
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