TIJERAS

CRISP

FARMACOLOGIA II
2021
 ■ La búsqueda para
CODIGO GENETICO entender cómo funcionan
nuestros genes comenzó
seriamente a mediados
del siglo XIX cuando un
biólogo y monje llamado
Gregor Mendel llegó a una
sorprendente conclusión
sobre las características
de las plantas.

En el siguiente siglo cuando se descubrió la

estructura del ADN. Basándose en el trabajo
de Rosalind Franklin y Maurice Wilkins, en
1953 James Watson y Francis Crick
concluyeron que nuestro ADN se forma en
una doble hélice.
EDITORES GENETICOS
Actualmente, para la investigación de edición genética
específica se conocen cuatro métodos, dentro de las cuales
tenemos:
– ZFN (por sus siglas en inglés: Zinc Finger Nucleases),
– TALEN (por sus siglas en inglés: Transcription Activator-
Like Effector based Nucleases), Meganucleases, y
– CRISPR/Cas9 (por sus siglas en inglés: Clustered
Regions of Interspersed Palindromic Repeats-Cas9)
Las tijeras genéticas CRISPR/Cas9

■ Herramienta biológica que permite modificar el

genoma con una precisión sin precedentes, y de
forma mucho más sencilla y barata que cualquier
otro método anterior. Al igual que un editor de
textos, el CRISPR/Cas9 es capaz de manipular el
genoma mediante un mecanismo que corta y pega
secuencias de ADN.
Las tijeras genéticas CRISPR/Cas9

■ Herramienta sencilla y barata

que permite cortar y pegar
ADN, cortar un gen que causa
una enfermedad y cambiarlo
por otro que no provoque ese
problema. Apodada además
como ‘tijeras genéticas’ y
‘corta-pega genético’.
Las tijeras genéticas CRISPR/Cas9
■ Se basa en el mecanismo natural que emplean las
bacterias para defenderse de los virus. Su sistema
inmunitario es capaz de recordar secuencias del ADN de
virus que las han atacado. En el caso de que vuelvan a ser
atacadas, activa una especie de tijera molecular, la más
frecuente es una enzima llamada Cas9, que lo que hace es
cortar la cadena de material genético del virus para
impedirle que se replique.
Las tijeras genéticas CRISPR/Cas9
■ El sistema CRISPR/Cas9 es un mecanismo de defensa que
poseen las células procariotas (bacterias y arqueas), es
decir, los organismos unicelulares sin núcleo definido y con
el material genético disperso por la célula. El mecanismo de
defensa de estos organismos les permite defenderse de los
virus de una manera versátil y muy eficaz. Y es que, para
adquirir inmunidad frente a un virus, los humanos debemos
vacunarnos generación tras generación porque no somos
capaces de heredar esa inmunidad.
Inicios del descubrimiento
■ En 1989, Mojica se incorporó al grupo de Microbiología de la
Universidad de Alicante con un contrato para medir la calidad del
agua de las playas alicantinas y, en paralelo, empezó su tesis doctoral
centrada en el microorganismo Haloferax mediterranei. Su intención
era averiguar los mecanismos moleculares que permiten a esta
procariota vivir en las salinas de Santa Pola.

■ Durante su investigación, Mojica descubrió que en el genoma de

estos microorganismos había secuencias genéticas que se repetían a
intervalos regulares. Intrigado por este enigma biológico, tuvo que
esperar a tener su propio laboratorio, a mediados de los noventa,
para intentar esclarecer para qué servían estas curiosas secuencias.
Inicios del descubrimiento
■ Se empezaban a publicar genomas completos de distintos
microorganismos, el investigador consultó en las bases de datos
accesibles a toda la comunidad científica y descubrió que las
secuencias repetidas a intervalos regulares son muy abundantes en
todo el mundo microbiano. Estas secuencias tenían un origen
ancestral y una gran relevancia biológica.
■ El sistema CRISPR/Cas9 es un mecanismo de defensa que poseen las células
procariotas (bacterias), los microorganismos unicelulares sin núcleo definido y
con el material genético disperso por la célula. El mecanismo de defensa de
estos organismos les permite defenderse de los virus de una manera versátil y
muy eficaz.
■ Para adquirir inmunidad frente a un virus, los humanos debemos vacunarnos
generación tras generación porque no somos capaces de heredar esa
inmunidad.
■ Sin embargo, el investigador español Francis Mojica descubrió que las bacterias
que desarrollan inmunidad frente a un virus transfieren genéticamente esa
inmunidad a las células que derivan de ellas. Por tanto, de un sistema
inmunitario adaptativo que se transmite de generación en generación.
Es una memoria genética de
información viral que las
bacterias usan como un sistema
inmune adaptativo, como una
forma de defenderse de la
infección",

“Estudiar la forma en que las

bacterias pueden programar a las
enzimas para hallar y destruir
virus era algo fascinante
relacionado con la evolución de un
sistema inmunológico en
microbios"
CRISPR-Cas9.

■ Este sistema está copiado del mecanismo de defensa de las

bacterias, que es una sorprendente herramienta de edición genética
válida para el genoma de cualquier organismo.

■ Las científicas Emmanuelle Charpentier y Jennifer Doudna son las

ganadoras del Premio Nobel de Química por reescribir el código de la
vida y el desarrollo de un método para la edición del genoma. La
herramienta se llama CRISPR-Cas9.
■ Este método CRISPR/Cas9 se basa en el mecanismo natural de reparación de
cortes que se dan en las cadenas del ADN, es por eso que consiste en la
utilización de dos componentes principales, Cas9 que es la enzima que corta el
ADN como si fueran unas tijeras y una pequeña secuencia de ARN guía (también
llamada CRISPR ARN) la cual indica a la enzima Cas9 el lugar donde debe cortar.
Cuando ocurre este corte llamado DSB (por sus siglas en inglés: double stranded
break), las células se reparan naturalmente mediante dos mecanismos
conocidos como el HDR (por sus siglas en inglés: homologa directed repair) o por
NHEIJ (por sus siglas en inglés: non homologous end joining), esto hace que se
inserten, borren o muten ciertas secuencias de ADN para reparar el corte
■ Actualmente esta tecnología CRISPR/Cas9, “ha permitido la modificación
eficiente y especifica del genoma en muchas especies”, lo cual ha sido útil en
ingeniería genética como una mejora en la creación de animales transgénicos
para investigación biomédica y en agricultura, incluyendo ratones, ratas,
Drosophila melanogaster, Caenorhabditis elegans,Saccharomyces cerevisiae y
Dani rerio, como modelos tradicionales. Y en cerdos y cabras como modelos no
tradicionales. Además, se sabe también que se ha usado para crear modelos
primate de enfermedades para investigación
Utilización de la herramienta
■ Esta técnica de edición genómica ha abierto la puerta a multitud de
aplicaciones en prácticamente cualquier organismo. Desde su creación
en 2012, CRISPR/Cas9 se utiliza para buscar nuevos tratamientos
contra numerosas enfermedades -incluyendo el cáncer y el sida-, así
como para obtener nuevas variedades vegetales o en aplicaciones
medioambientales.

■ La técnica recorta considerablemente -de años a días- el tiempo

necesario hasta ahora para alterar el genoma a voluntad, y muchos se
han referido a ella como la democratización de la edición genética
porque ha colocado esta tecnología al alcance de cualquier laboratorio
de biología molecular.
Utilización de la herramienta
■ Actualmente son muy pocos los pacientes que han sido tratados
aplicando CRISPR y se trata de pacientes tratados con una estrategia
ex vivo, en la que las células del paciente son extraídas, trabajadas en
el laboratorio y luego reinsertadas.

■ Dos grandes grupos de terapias que se pueden desarrollar para tratar

de evitar genes que tengan una secuencia alterada.
– “ex vivo”
– herramientas de edición directamente dentro del cuerpo del
paciente y esto todavía no es prudente realizarlo, lo que se llama
terapia “in vivo".
EX VIVO
■ Extraer del paciente células, por ejemplo de su sangre, y esas células
fuera del paciente en el laboratorio se editan y se les incorpora la
alteración que se haya previsto que pueda tener una aplicación
terapéutica y después se valida y se verifica y se seleccionan aquellas
células que pueden volver a incorporarse dentro del paciente".

■ Esta última técnica tiene la ventaja de que permite seleccionar

aquellas células que hayan sido editadas y tengan exactamente la
modificación prevista, y descartar aquellas que hayan incorporado
mutaciones imprevistas.
Terapia CAR-T
■ CAR-T es una terapia única, creada individualmente para cada
paciente.
1. Consiste en extraer, mediante aféresis, los linfocitos T del
paciente para
2. modificarlos genéticamente de manera que pueden reconocer y
destruir las células cancerosas.
3. El último paso: reinfundir estos linfocitos al paciente. Con solo
una dosis, el tratamiento tiene potencial curativo para
enfermedades oncohematológicas que hasta ahora carecían de
opciones terapéuticas que permitiesen mejorar la supervivencia