UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA
BIOLÓGICA Y FISIOLOGÍA ANIMAL

CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA

P11. Determinación de la acción de la arginasa.

Síntesis de urea.
Fundamentos teóricos
ETAPA I: Las grandes moléculas de los
alimentos se fragmentan hasta unidades
más pequeñas.

ETAPA II: Las unidades más pequeñas se

degradan hasta unas pocas unidades
simples: Acetil-CoA.

ETAPA III: Las unidades simples: Acetil-

CoA, sufren una oxidación completa para
forma ATP.
Degradación de proteínas
Proteínas endógenas

Alimentos Proteínas dañadas,

liberadas durante la
destrucción de la célula
Proteínas o, enzimas que ya
exógenas cumplieron su función.

Se marcan para su
destrucción con Ubiquitina
Aminoácidos
y se degradan mediante un
complejo dependiente de
ATP (proteasoma).
 La digestión de las proteínas de la dieta (proteínas exógenas)
comienza en el estómago y se completa en el intestino

La digestión comienza en el estómago: medio ácido favorece la desnaturalización proteica, así son más accesibles a la
proteólisis catalizada princ. por la pepsina (pH óptimo: 2).
La degradación continua en el intestino por enz. proteolíticos liberadas por el páncreas.
Las proteasas que se localizan en la memb. plasm. de las células intestinales (aminopeptidasas) continúan la digestión.
Degradación de proteínas endógenas
El proteasoma y otras proteasas generan aminoácidos libres

Urea Orina
CICLO DE LA UREA
Arginasa
Argininsuccinasa

En los
vertebrados
ornitina transcarbamilasa
terrestres, la Argininsuccinato
sintetasa
urea se
Carbamilfosfato
sintetiza en el sintetasa
ciclo de la
urea.

(C. Krebs)
Aminoácidos
Proteínas excedentes
 OBJETIVO DE LA PRÁCTICA

El objetivo de esta práctica, es demostrar la acción de

la arginasa sobre la arginina para la síntesis de urea.
Diseño experimental
Materiales

Homogeneizado hepático de ratón al 20 % en sacarosa (Fuente de la Arginasa)

0,25 M

(Sustrato)
(Enzima)
(Oxida, digiere los restos celulares, desproteiniza)
(Agrega y precipita los restos proteicos)
(Determina NH₃)
 Obtención del extracto crudo de la arginasa.

+ Solución de
sacarosa 0,25M
(solución
Hígado isoosmótica). Solución
Pesar Homogeneizador de homogénea al
tejidos 20 % m/v
10 mL

Sobrenadan
te: Arginasa

Precipitado: Incubar a 60°C por 15´ (la

Otros enzimas. Centrifugar a 3500 rpm por 10 arginasa es estable, las otras
enzimas precipitan).
 Tabla 1.
Sistema de incubación: Producción de urea utilizando arginina

Sustrato

Enzima
Enzima
Reacción 1

EC 3.5.3.1

Reacción 2

EC 3.5.1.5
Tabla 2. Determinación de la urea (amoniaco) mediante el reactivo de
Nessler.

Después mezclar y dejar en reposo por 10 minutos. Luego hacer la

lectura a 400 nm con espectrofotómetro.
Reactivo de Nessler

Es un reactivo químico que se utiliza para detectar pequeñas

cantidades de amoníaco (NH3) o catión amonio (NH4+).

El yodomercuriato potásico (reactivo de Nessler), en solución alcalina,

forma con el NH3 o NH4+ un complejo de color amarillo-naranja
(yodoamiduro) cuya densidad óptica a 400 nm permite valorarlo
cuantitativamente, previa obtención de una curva patrón. No obstante
puede utilizarse esta técnica a modo de prueba cualitativa, sin utilizar
medida de absorción de la luz.

Ausencia de NH₃ Presencia de NH₃

Resultados y discusión
 Tubo
Tubo I Tubo II
Blanco

Figura 1. Resultados obtenidos del sistema de determinación de

la urea (amoniaco) mediante el reactivo de Nessler.
Determinación cualitativa (en función al color) de la
actividad de la arginasa.
Tabla 3. Resultados obtenidos del sistema de determinación de la
urea mediante el reactivo de Nessler. Determinación
cuantitativa de la actividad de la arginasa (mediante
espectrofotometría).

Lectura mg NH₃/mL
Tubos Lectura
corregida filtrado

Blanco

Tubo I

Tubo II

mg NH₃/mL filtrado = Lectura corregida de absorbancia * 37 mg NH3/mL filtrado.

¿Preguntas?