Teoría Biología

MÉTODOS DE SECUENCIACIÓN DE PROTEÍNAS

Reactivo Corte

Tripsina Corta el lado C de Arg y Lys

Quimotripsina Corta el lado C de Trp, Phe, Tyr

Hidroliza los aminoácidos uno a uno

Carboxipeptidasa A empezando por el extremo carboxilo (excepto
Pro, Arg y Lys)

Carboxipeptidasa B Libera Arg o Lis del carboxilo terminal

Degradación de Edman:
Se hidrolizan los aminoácidos uno a uno
(fenilisotiocianato) seguido de hidrólisis
empezando por el extremo amino terminal
ácida

Mercaptoetanol, glutation Rompen los puentes disulfuro

Principales enzimas con sus zonas de corte

Otras enzimas con sus zonas de corte

IDENTIFICACIÓN DEL EXTREMO AMINO TERMINAL
MÉTODO CARACTERÍSTICAS
Degradación de Edman : Reactivo de Edman Se hidrolizan los aminoácidos uno a uno
(fenilisotiocianato) seguido de hidrólisis ácida empezando por el extremo amino terminal
Aminopeptidasas Después de un tiempo de hidrólisis, la cantidad
del aminoácido del extremo será mayor

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Teoría Biología

IDENTIFICACIÓN DEL EXTREMO CARBOXILO TERMINAL

MÉTODO CARACTERÍSTICAS
Hidrólisis con hidrazina Todos los aminoácidos aparecen como
hidrazidas, excepto el del extremo carboxilo
Carboxipeptidasa A Hidroliza los aminoácidos uno a uno
empezando por el extremo carboxilo (excepto
Pro, Arg y Lys)
Carboxipeptidasa B Libera Arg o Lis carboxilo terminal

PROTEOLISIS CARACTERÍSTICAS: Se hidrolizan

enlaces peptídicos en los que el grupo
carboxilo es aportado por:
Bromuro de cianógeno Met
ENDOPEPTIDASAS
Tripsina Arg y Lys (excepto si el grupo amino lo aporta
Pro)
Quimotripsina Trp, Phe, Tyr
Pepsina Trp, Phe, Tyr, Met, Leu
Elastasa Residuos neutros alifáticos
Subtilisina Residuos aromáticos y alifáticos
Termolisina Leu, Ile y Val.
Proteasa estafilocócica Glu
Clotripaína Arg
Etilenimina + tripsina La etilenimina convierte Cys en
aminoetilcisteína, que se hidroliza por tripsina
Anhídrido maleico + tripsina El anhidrido maleico modifica la Lys y la hace
resistente a la tripsina, por lo que ésta rompe
sólo detrás de Arg

Mercaptoetanol, glutation Rompen los puentes disulfuro