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DISCOS DE PRUEBA DE
SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA (AST)
BIOANALYSE®

En bacteriología clínica, la sensibilidad bacteriana frente a sulfamidas y antibióticos se ha

detectado habitualmente mediante la técnica de difusión en gel.
Los discos AST de Bioanalyse® han sido cuidadosamente estandarizados utilizando papel de disco
especial que tiene una alta capacidad de adsorción de líquido. Limpieza y controles
microbiológicos (MIC) de los discos se han llevado a cabo.
Prueba de Sensibilidad Estandarizada
1. Medio: Se acepta generalmente que, el medio de Mueller Hinton es el más adecuado para
este propósito. Por esta razón, en los estudios de producción, este medio se ha utilizado.
Cuando se esteriliza, el medio llega a 45-50 ° C, y luego se vierte en placas de Petri.
2. La profundidad del agar debe ser 4 mm. Para placas de 90mm de diámetro, 25 ml de
medio es suficiente.
3. pH: El pH del medio debe ser de 7.2 a 7.4
4. Almacenaje: Las Placas Petri deben almacenarse a 4°C y se deben utilizar bolsas de celofán
para evitar que se sequen. Para eliminar el exceso de humedad y las gotas en la superficie
de las placas, es necesario mantenerlas en incubadora durante 30 minutos o una hora a
temperatura ambiente antes de usar. Este medio sin adición de sangre es adecuado para
el crecimiento de muchos organismos aeróbicos. Pero para los organismos exigentes tales
como estreptococos y gonococcos, la sangre desfibrinada de oveja al 5%, de conejo o de
caballo debe ser agregada después de enfriar el medio hasta 45-50 ° C. Las placas pueden
utilizarse cuando su superficie está húmeda y los resultados obtenidos por este método
son fiables.
5. Preparación de Material: A partir del medio de aislamiento primario, 4-5 colonias que
muestran morfología similar se toman por asa flameada y se suspenden en 4-5 ml de caldo
(Muller-Hinton, caldo de Soya Trypticasa o infusión cerebro-corazón.
6. Inoculación en Placas Petri: Se realiza según la técnica reportada por Bauer y Kirby. La
suspensión bacteriana preparada se mezcla con un aplicador estéril y el exceso de fluido
del aplicador se elimina presionando y girando el aplicador dentro del tubo, por encima
del nivel de fluido. Sembrar toda la superficie de agar en las tres direcciones diferentes
mediante la rotación de la placa a ángulos de 60 ° después de cada estría.
7. El aplicador se frota en cada lugar de la placa. Otro método es el método de "verter y
distribuir". Verter varios ml de la solución escogida en el agar para cubrirla
completamente (2-5 ml, dependiendo de la superficie). Eliminar el exceso de posible
líquido por aspiración.
8. Después de esto dejar que las placas Petri sequen durante 15-20 minutos a temperatura
ambiente.
9. En primer lugar, el cartucho se abre bajo llama, luego los discos se descargan del cartucho
sobre la placa de Petri por medio de pinza o dispensador. Es necesario presionar
suavemente sobre los discos dispensados con la ayuda de una pinza flameada y enfriada.
Para ver claramente la zona de inhibición, el espacio entre los discos no debe ser más
 estrecho que 24 mm y la distancia de los discos desde el borde o la placa debe ser de un
cm.
10. Después de esto, las placas de Petri se deben poner en la incubadora en posición inversa.
Después de la incubación a 37 ° C durante una noche (18 horas), las zonas desarrolladas
deben evaluarse según los diámetros mínimos de inhibición tabulados en la tabla,
suministrados por Bioanalyse a sus distribuidores.
11. Para el control de calidad de los discos de Bioanalyse AST(Pruebas de Susceptibilidad
Antimicrobiana), se han utilizado las cepas estándar de Pseudomona aeruginosa (ATCC
27853); Escherichia coli (atcc 25922) y Staphylococcus aureus (ATCC 25923).
12. Lectura de zonas de inhibición: Después de la incubación durante la noche (18 horas) se
obtienen zonas clara de inhibición en placas de antibiograma, preparadas de manera
adecuada. Al final de 6-8 horas se puede ver la zona de inhibición primaria, pero esto debe
ser confirmado por la zona durante la noche. El diámetro de la zona de inhibición se lee
desde la parte inferior de la placa. Si la zona se calcula en agar sangre, la zona de inhibición
debe ser leída en la superficie del medio por un compás. La interpretación de las zonas
(para criterios clínicos y también de control de calidad) se indica en la tabla antes
mencionada. Por consiguiente, los resultados obtenidos se evalúan como susceptibles (S),
Intermedio (I) o resistentes (R) para aplicación clínica, o una evaluación relevante del
control de calidad puede establecerse para las cepas ATCC mencionadas anteriormente,
determinadas específicamente por CLSI para cada disco AST individual.
Posibles Causas de Error:
1. Suspensión de cultivo que no se ha ajustado cuidadosamente frente al tubo estándar. Si
se ha hecho la prueba a partir del caldo en que la concentración bacteriana es abundante,
pueden obtenerse zonas estrechas.
2. Uso de un cultivo mixto: Principio esencial del método estandarizado de cultivo es el uso
de un cultivo puro. El cultivo mixto puede causar resultados defectuosos.
3. La presencia de exceso de humedad en la superficie del medio puede causar mucho
crecimiento y esto puede hacer que la zona de inhibición sea más pequeña. Por el
contrario, una superficie muy seca puede causar un crecimiento pobre y una zona más
grande

REFERENCIAS:
1. Bauer, A.W., W.M.M. Kirby, J.C. Sherris, and M. Turck. 1966. Am. J. Clin.Pathol. 45:493-
496.
2. Cetin, E.T., 1973. Genel ve Pratik Mikrobiyoloji, 3.Baski, Sermet, Matbaasi, 444-447.
3. Ericsson, H.M., and J.C. Sherris. 1971. Antibiotic Sensitivity Testing, Report Study, Acta
Pathol, Microbiol. Scand., Section B, Suppl. 219, 1-90.
4. World Health Organization Technical Report Service. 1977. Rep. No. 610, WHO, Genova.

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