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LABORATORIO DE ANÁLISIS
INSTRUMENTAL
ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA-VISIBLE
Equipo:
Ramírez Galindo Aldo.
Ramos Ramírez Juan José.
Reyes Méndez Karla Daniela.
1) PRÁCTICA No.1: “RUTINAS DE DIÁGNOSTICO”.
2) OBJETIVOS.
2.1 OBJETIVOS GENERALES.
Conocer las partes principales, el manejo de un espectrofotómetro UV-Visible y verificar
las condiciones actuales del equipo.
2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS.
• Reconocer el material de laboratorio, así como su orden previo a la
experimentación.
• Programar el software de operación en sus tres pestañas (scan, instrumento y
número de muestra).
• Interpretar el espectro UV-visible.
• Aprender la técnica correcta para la toma de alícuotas.
• Usar la terminología correcta aplicada en el laboratorio.
3) CONSIDERACIONES TEÓRICAS.
La espectroscopia abarca una amplia variedad de técnicas, cada una de las cuales
utiliza diferentes regiones del espectro electromagnético, como la radiación
ultravioleta-visible (UV-Vis), la infrarroja (IR), la resonancia magnética nuclear (RMN),
la espectroscopia de masas (MS) y la espectroscopia de absorción y emisión atómica,
entre otras. Cada una de estas técnicas tiene sus propias aplicaciones específicas y
ofrece información única sobre las muestras analizadas.
Los filtros de óxido de holmio son conocidos por su alta estabilidad y precisión en la
selección de longitudes de onda. Sin embargo, su uso está limitado a aplicaciones
específicas que requieren una alta resolución espectral y la capacidad de trabajar en
el rango del NIR.
Uno de los aspectos más destacados del espectro teórico del dicromato de potasio
es su intensa absorción de luz en la región del ultravioleta cercano (UV-C). Esto se
debe a las transiciones electrónicas de los electrones en los átomos de cromo (Cr)
presentes en la molécula. Cuando el dicromato de potasio interactúa con la radiación
UV, algunos de sus electrones absorben energía y pasan a estados energéticos más
altos. Esta absorción de energía se refleja en el espectro como una banda de
absorción característica.
• Exactitud: La exactitud mide qué tan cerca están los resultados medidos de los
valores verdaderos o de referencia. Se puede verificar mediante la
comparación de los resultados del método con estándares conocidos o
mediante la recuperación de analitos añadidos a muestras conocidas.
4) DESARROLLO EXPERIMENTAL.
4.1 EQUIPO:
➢ Espectrofotómetro UV-Visible. Modelo Lambda 2S.
➢ Celdas de cuarzo paso óptico de 1 cm.
4.2 PREPARACIÓN DE ESTÁNDARES.
Material empleado:
➢ Matraz aforado del 100 ml.
➢ 3 matraces aforados de 10 ml clase “B”.
➢ Pipeta graduada de 1 ml.
➢ Pipeta graduada de 5 ml.
Modificación: se utilizó agua destilada como solvente.
Secuencia para la preparación de estándares:
1. Revisar que la gaveta de trabajo se encuentre con todos los materiales. Tomar una
foto como evidencia.
Figura 4.3.4.
Figura 4.3.5. Figura 4.3.6.
Segunda etapa
6. Programar el software 5. Abrir el software. 4. Prender el monitor de
con las condiciones la computadora.
indicadas.
Figura 4.3.7.
7. Apagar el equipo en el
orden contrario.
Pasos específicos para segunda etapa (programación del software):
Primera pestaña (scan):
Realizar lo siguiente:
1. Seleccionar la pestaña
“application” y posteriormente la
pestaña “scan”.
2. Establecer la longitud de
onda inicial y final.
3. Seleccionar “display serial”
para el caso de la
experimentación con filtro de
óxido de holmio (punto 1.8.1) y
con el vapor de benceno (punto
1.8.2). En cambio, para realizar
la linealidad fotométrica (punto
1.8.3) seleccionar “display
overlay”.
4. Establecer el nombre.
Figura 4.3.8. Pestaña “Scan”.
5. Establecer la velocidad de
barrido de acuerdo con las
condiciones de cada
experimento.
6. Seleccionar las lámparas
que se requieren encender
(UV y Vis para el filtro de óxido
de holmio y la linealidad
fotométrica, UV únicamente
para el vapor de benceno).
-Cálculo
𝑤
𝑁= ∴ 𝑤𝐻2 𝑆𝑂4 = 𝑁𝐻2 𝑆𝑂4 ∗ 𝑃𝑒𝑞𝐻2 𝑆𝑂4 ∗ 𝑉
𝑃𝑒𝑞 ∗ 𝑉
-Donde:
𝑔
𝑃𝑀𝐻2 𝑆𝑂4 98 𝑚𝑜𝑙 𝑔
𝑃𝑒𝑞𝐻2 𝑆𝑂4 = = 𝑒𝑞 = 49
2𝑒𝑞 2 𝑚𝑜𝑙 𝑒𝑞
-Sustituyendo:
𝑒𝑞 𝑔
𝑤𝐻2 𝑆𝑂4 = (2 ) ∗ (49 ) ∗ (0.5 𝐿) = 4.9 𝑔
𝐿 𝑒𝑞
-Dicromato de potasio 100 ppm
-Diagrama de experimentación:
Pesar 0.01 g
Aforar a 100
de dicromato
ml con ácido
de potasio
sulfúrico
-Cálculo:
𝑚𝑔 𝑚
𝑝𝑝𝑚 = (=) 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 ∴ 𝑚𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 = 𝑝𝑝𝑚 ∗ 𝑉
𝐿 𝑉𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
-Sustituyendo:
𝑚𝑔
𝑚𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 = (100 ) ∗ (0.1 𝐿) = 0.01 𝑔 = 10 𝑚𝑔
𝐿
La solución madre ya se encuentra preparada para la práctica; dependiendo de las ppm
de nuestros estándares es el volumen ocupado para cada uno por lo cual, para
estándares de 25 ppm, 50 ppm, 75 ppm, se ocupan volúmenes respectivamente de 2.5
ml, 5 ml y 7.5 ml respectivamente.
-Formula:
𝐶1 ∗ 𝑉1 = 𝐶2 ∗ 𝑉2
-Despejando:
𝐶2 ∗ 𝑉2
𝑉1 =
𝐶1
-Para 25 ppm:
(25 𝑝𝑝𝑚) ∗ (10 𝑚𝑙 )
𝑉1 = = 2.5 𝑚𝑙
100 𝑝𝑝𝑚
-Para 50 ppm:
(50 𝑝𝑝𝑚 ) ∗ (10 𝑚𝑙 )
𝑉1 = = 5 𝑚𝑙
100 𝑝𝑝𝑚
-Para 75 ppm:
(75 𝑝𝑝𝑚) ∗ (10 𝑚𝑙 )
𝑉1 = = 7.5 𝑚𝑙
100 𝑝𝑝𝑚
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Longitud
de onda 279.0 287.0 333.5 360.5 418.0 445.0 453.0 459.5 536.0 637.0 648.5
(nm)
Figura 5.1.1 Espectro UV-Vis del filtro de óxido de holmio (blanco: aire)
Tabla 5.1.2 Longitudes de onda leídas del filtro de óxido de holmio.
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Longitud
de onda 280.0 285.0 335.0 361.0 419.0 443.0 453.0 460.0 538.0 639.0 650.0
(nm)
287.0−285.0
2.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | 287.0
| ∗ 100 = 0.6968%
333.5−335.0
3.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | 333.5
| ∗ 100 = 0.4497%
360.5−361.0
4.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 0.1387%
360.5
418.0−419.0
5.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 0.2386%
418.0
445.0−443.0
6.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 0.4494%
445.0
453.0−453.0
7.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | 453.0
| ∗ 100 = 0.0%
459.5−460.0
8.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | 459.5
| ∗ 100 = 0.1088%
536.0−538.0
9.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 0.3731%
536.0
637.0−639.0
10.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 0.3129%
637.0
648.5−650.0
11.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 0.2313%
648.5
5.2 VAPOR DE BENCENO.
Tabla 5.2.1 Longitudes de onda teóricas del vapor de benceno.
No. 1 2 3 4 5 6
Longitud
de onda 237.0 242.2 247.8 253.6 259.6 266.8
(nm)
Figura 5.2.1 Espectro UV del vapor
de benceno con Data Interval 1 nm
(blanco: aire)
No. 1 2 3 4 5 6
Longitud
de onda 234.0 238.2 243.28 248.74 254.51 260.58
(nm)
242.2−238.0
2.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 1.7341%
242.2
247.8−243.28
3.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 1.8241%
247.8
253.6−248.74
4.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 1.9164%
253.6
259.6−254.51
5.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 1.9607%
259.6
266.8−260.58
6.- %𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = | | ∗ 100 = 2.3313%
266.8
5.3 DICROMATO DE POTASIO (K2Cr2O7).
λ máx.= 350 nm
1
0.95542 R2 calculada: 0.9919
Absorbancia (UA)
0.8
0.61348
0.6
0.38319
0.4
y = 0.0124x + 0.0235
0.2 R² = 0.9919
0
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
Concentración (ppm)
0.8
0.61348
0.6
0.38319
0.4
y = 0.0114x + 0.0785
R² = 0.9875
0.2
0
25 35 45 55 65 75 85
CONCENTRACIÓN (PPM)
6) OBSERVACIONES.
Durante la experimentación se logró observar el cómo funciona el equipo de ultravioleta
visible, así como los diferentes tipos de espectros, para compuestos sólidos, líquidos y
vapores, analizando de manera filtro de óxido de holmio, estándares y vapor de benceno
respectivamente, como primera observación fue el encendido del equipo llevando una
metodología que se repetirá en esta y en futuras experimentaciones, así mismo como
los ruidos que hace el espectrofotómetro al encender, ya que con este ruido podemos
analizar si hay algún problema que se esté presentando en nuestro equipo, una vez
hecho esto se observa como abrir el programa y como darle los datos necesarios para
que funcione la experimentación, así mismo para la preparación de los estándares de
observo el cómo se encuentra el material antes de utilizarlo para en caso de algún
percance extraño poder notificarlo a la profesora y así mismo corregir problemas del
analista como toma de alícuota, aforo entre otros, para finalizar con las observaciones
vistas durante el laboratorio, fue el ver cómo dependiendo de nuestra muestra a analizar
el espectro salía de distinta forma, observando que para los líquidos el espectro arrojado
por nuestro equipo se observa que hace una figura en tipo onda, para sólido el espectro
mostrado tiene picos más definidos y el vapor forma un espectro un poco menos definido
en los picos pero mostrando una figura característica de una mano.
7) CONCLUSIONES.
Ramírez Galindo Aldo.
En la sesión de laboratorio se tocaron diversos puntos importantes antes de comenzar
la experimentación, entre estos se encuentra el correcto posicionamiento de los
materiales de laboratorio en la gaveta, es importante tomar evidencia de esta misma ya
que nos ayudará a saber si existe material de laboratorio faltante, esto con el fin de
mantener el espacio de trabajo en correcto orden y contar con un sistema que nos
proporcione un sistema sustentable.
De la misma forma, es importante tomar en cuenta que el encendido del equipo tiene
una secuencia de pasos que se debe respetar, ya que esto nos garantiza el correcto
funcionamiento del equipo. Existen otros factores que nos indicarán el arranque exitoso
de nuestro espectrofotómetro, se trata de una serie de se “ruidos” que nos indican el
correcto funcionamiento de las partes que conforman el espectrofotómetro.
Además de lo ya antes mencionado, durante la sesión de teoría se pudieron conocer las
partes del equipo, sus funciones y bajo que parámetros operan, se trata de conceptos
como lo son las longitudes de onda y las lámparas que son necesarias para en
determinados rangos, la velocidad de barrido y la diferencia que pueden hacer algunos
parámetros, en este caso se observó que con un Data Interval menor el espectro se
observa con una mejor definición, lo que nos permite una lectura más detallada. Utilizar
un mayor número de puntos de datos o una menor distancia entre ellos en el espectro
medido mejora la resolución espectral, ya que permite capturar detalles más finos en el
espectro.
Comenzando con la experimentación, tuvimos una introducción a las técnicas correctas
de toma de alícuotas, asi como consideraciones importantes para la elección de una
pipeta adecuada dependiendo del volumen de alícuota que se desea a tomar. El correcto
procedimiento nos ayuda a una posterior lectura más exacta en el espectro que se
obtendrá. Podemos suponer que es aquí de donde proviene una parte de los errores en
comparación con las longitudes de onda teóricas, aunque en realidad el error no es
considerable ya que no superaron el 2%.
En relación con el software se identificaron las pestañas principales en las que se
encuentran los parámetros con los que se trabajarán, estos se encuentran en el manual
y varían de acuerdo con las soluciones patrón con las que se trabaja, en esta práctica se
trabajó con dicromato de potasio; además se analizaron los espectros de vapor de
benceno y con filtro de óxido de holmio.
Los espectros obtenidos en el espectrofotómetro de dicromato de potasio, vapor de
benceno y un filtro de óxido de holmio proporcionan una visión única de las propiedades
ópticas de estos materiales. Cada espectro revela información valiosa sobre la absorción
y transmisión de luz en función de la longitud de onda en un rango específico.
El espectro de dicromato de potasio muestra características de absorción y transmisión
relacionadas con la estructura y composición de este compuesto químico. Los picos y
valles en el espectro indican las longitudes de onda en las que ocurren transiciones
electrónicas particulares, lo que puede ser fundamental para comprender su
comportamiento químico y físico.
El espectro de vapor de benceno proporciona información sobre las propiedades
espectroscópicas de esta sustancia en estado gaseoso. La ubicación de las bandas de
absorción en el espectro puede utilizarse para identificar la presencia de benceno y
cuantificar su concentración en una muestra. Por último, el uso del filtro de óxido de
holmio permite calibrar y ajustar el espectrofotómetro, ya que este filtro presenta líneas
espectrales conocidas. Esto es esencial para garantizar mediciones precisas y
calibración adecuada del instrumento.
En conjunto, estos espectros son herramientas esenciales en el análisis químico y
espectroscópico, proporcionando información crítica sobre las propiedades de los
materiales y permitiendo una mayor comprensión de sus características ópticas.
Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2017). Principles of instrumental analysis.
Cengage Learning.
Pavia, D. L., Lampman, G. M., Kriz, G. S., & Vyvyan, J. A. (2014). Introduction to
spectroscopy. Cengage Learning.