UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA DE MATERIALES

TEMA: “LABORATORIO N°2: ESPECTROFOTOMETRIA”

CURSO: CARACTERIZACION DE MATERIALES

DOCENTE: ING. DIONICIO OTINIANO MENDEZ

ALUMNOS:
- FERRER PESANTES, Anthony
- GARCIA VARAS, Julio
- MIO VEGA, Diego
- RODRIGUEZ MARIN, Emerson

CICLO: V

GRUPO: B

TURNO: LUNES (7-9pm)

TRUJILLO-PERÚ
2019
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Laboratorio Nº 2 – Espectrofotometría UV Visible:

Análisis de Iones Sulfato
I. RESUMEN:

En este segundo laboratorio del curso de caracterización de materiales llamado

espectrofotometría UV Visible: Análisis de iones sulfatos se hicieron practicas
con una solución patrón inicial variando de esta su concentración (ppm) en
contenido de Sulfato de Sodio Na2SO4, para luego adicionar BaCl2 y una
solución acondicionadora y llevarla al espectrómetro para obtener la
absorbancia de cada solución que iban desde 0 ppm hasta 40 ppm
respectivamente. Luego se repitió el procedimiento inicial, pero en vez de usar
la solución patrón se usó diferentes muestras de agua de mar obtenidas de
diferentes partes de Trujillo. Por último, se obtuvo la respectiva grafica para
cada parte del laboratorio y se hizo el análisis respectivo.

II. OBJETIVOS:

2.1. Objetivo Principal

 Determinar mediante el espectrómetro la absorbancia de los iones sulfatos en
soluciones.
2.2. Objetivos Secundarios
 Aprender el funcionamiento correcto del espectrómetro.
 Construir una curva de calibración.

III. FUNDAMENTO TEORICO

La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se

basa en la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un
compuesto y su concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática (de
una sola longitud de onda) sobre un medio homogéneo, una parte de la luz
incidente es absorbida por el medio y otra transmitida, como consecuencia de
la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad
de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz transmitido. Dependiendo
del compuesto y el tipo de absorción a medir, la muestra puede estar en fase
líquida, sólida o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del espectro
electromagnético, la muestra es generalmente disuelta para formar una
solución.

Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual es una curva que
muestra la cantidad de energía radiante absorbida, Absorbancia, por la
sustancia en cada longitud de onda del espectro electromagnético, es decir, a

Caracterización de Materiales Página 2

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una determinada longitud de onda de la energía radiante, cada sustancia

absorbe una cantidad de radiación que es distinta a la que absorbe otro
compuesto. Ver Figura N° 01.

Fig. N° 01. Espectro de Absorción de dos compuestos diferentes

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 ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA-VISIBLE (UV/VIS):

La espectroscopia ultravioleta-visible (UV/VIS) es una espectroscopia de emisión de

fotones y una espectrofotometría. Utiliza radiación electromagnética (luz) de las
regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro
electromagnético, es decir, una longitud de onda entre 380nm y 780nm. La radiación
absorbida por las moléculas desde esta región del espectro provoca transiciones
electrónicas que pueden ser cuantificadas.

La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de

moléculas, y además, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia.

Se utiliza de manera general en la determinación cuantitativa de los componentes de

soluciones de iones de metales de transición y compuestos orgánicos altamente
conjugados. Se utiliza extensivamente en laboratorios de química y bioquímica para
determinar pequeñas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de metales en
aleaciones o la concentración de cierto medicamento que puede llegar a ciertas partes
del cuerpo.

a. Longitud de onda: Se define como la distancia entre los picos

adyacentes y puede ser medida en metros, centímetros, o nanómetros.

b. Frecuencia: Es el número de ondas por ciclos usualmente sus

unidades están dadas en Hertz que son ciclos por segundos (Hz).

La luminiscencia ocurre debido a la emisión de luz por una sustancia determinada y esto
ocurre cuando un electrón regresa a su estado inicial después de haber sido excitado y
libera una energía como un fotón. Podemos encontrar tres tipos de nombres para la
espectroscopia de luminiscencia, para diferentes técnicas:

c. Espectroscopia de fluorescencia molecular.

d. Espectroscopia de fosforescencia molecular.
e. Espectroscopia de quimioluminiscencia.

Fig. N° 02. Espectrómetro UV-Vis modelo Libra S22

Caracterización de Materiales Página 4

LEY DE LAMBERT-BEER: Esta ley expresa la relación entre absorbancia de luz
monocromática (de longitud de onda fija) y concentración de un cromóforo en solución:

A = log I/Io = ε·c·l

La absorbancia de una solución es directamente proporcional a su concentración (a

mayor número de moléculas mayor interacción de la luz con ellas); también depende de
la distancia que recorre la luz por la solución (a igual concentración, cuanto mayor
distancia recorre la luz por la muestra más moléculas se encontrará); y por último,
depende de ε, una constante de proporcionalidad (denominada coeficiente de extinción)
que es específica de cada cromóforo.

Fig. N° 3: Funcionamiento de un espectrofotómetro

CURVA DE CALIBRACIÓN:

Es uno de los métodos más utilizados para determinar la concentración de una muestra
problema, es el método de la curva de calibración. Esta curva de calibración es una
gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco soluciones de estándar de
concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de
onda máxima (λ max).

Fig. N° 04. Curva de Calibración

Caracterización de Materiales Página 5

 FICHA TÉCNICA DEL EQUIPO

✓ ESPECIFICACIONES TÉCNICAS DEL EQUIPO:

 Interfaz estándar de interfaz serial: RS-232-C.
 Rango de medición: 0 a 2500 A.
 Exactitud fotométrica: < ± 0.005 A 0 a 0.500 A.
< ±1 % 0.501 a 2500 A.
 Precisión fotométrica < ± 0.003 A 0 a 0.600 A.
< ±0.5 % 0.601 a 2500 A.
 Deriva: 0.003 A en 30 en 30 min.
 Rango de longitud de onda: precisión alta en los 7 filtros 340, 405, 500, 5046,
578,620, 670 nm.
 Paso de banda: Rango UV (340 nm) = 10 nm.
▪ Rango visible (405-670 nm) < 6 nm.
 Compartimiento de cubeta: para la celda de flujo y cubetas desechables,
temperatura controlada.
 Control de temperatura: usa regulador de temperatura 25 °C 30°C o 37 °C;
estabilidad < ± 0.1 °C hasta 20 °C.
 Temperatura ambiente, estabilidad < ± 0.2 °C hasta 15 °C – 32 °C.
 Cubetas: utilice solamente:
➢ AMES Semi–microcuvettes 500 a 2100 microlitros.
➢ AMES microcuvettes.
➢ Aspiración programable de volumen (500 a 6000 microlitros).

Fig. N° 05. Equipo de Laboratorio

Caracterización de Materiales Página 6

 IV. EQUIPOS, MATERIALES E INSTRUMENTOS:
CAPACIDAD
INTRUMENTOS MARCA MAX (ml) MIN (ml)
(ml)
Fiola
Kyntel 1000 1000 ± 1 100 ± 1
Vaso de Precipitados Giardino
250 250 ± 50 100 ± 50
ITALY
Pizeta
--------- 500 500 -----
Bureta Giardino
25 25 ± 0.03 0.1± 0.03
ITALY
Fiola
Kyntel 50 50 —
5.1. Instrumentos

TABLA Nª 01 – Instrumentos de Laboratorio

5.2. Materiales
MATERIALES Cantidad (ml) Capacidad (ml)
Frascos de Vidrio
7 350
Frasco de Vidrio
1 500

TABLA Nª 02 – Materiales Utilizados

5.3. Reactivos

REACTIVOS FORMULA
Agua Destilada
H2O
Agua de Mar
H2O
Etanol
C2H5OH
Sulfato de Sodio Na2SO4

Ácido Clorhídrico
HCl
Cloruro de Bario
BaCl2
Glicerina
C3H8O3
Cloruro de Sodio
NaCl
TABLA Nª 3 – Reactivos Utilizados

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 EQUIPOS MARCA MODELO MAX MIN

210gr ± 0.1 10 mg ± 0.1

Balanza Analítica A&D GR-200
mg mg

Balanza Analítica Sartorius TE2101 2100 g ± 0.1 g 1 ± 0.1 gr

PG INSTRUMENTS T80+
Espectrofotómetro ------- ------
LIMITED UV/VIS

5.4. Equipos

TABLA Nª 4 – Equipos Usados

 ESPECTROFOTÓMETRO T-80:

Fig. N° 6. Espectrofotómetro T-80.

Caracterización de Materiales Página 8

 V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
 PROTOCOLO:

La Norma usada para este laboratorio fue: ASTM – D516 (Norma estándar para
encontrar iones sulfato en el agua)
 PROCEDIMIENTO:

1. HALLAR UNA CURVA DE CALIBRACIÓN PARA DETERMINAR

𝟐−
IONES SULFATOS (𝑺 ) EN UNA SOLUCION ACUOSA. (ASTM
D516-07):
A. SOLUCIÓN PATRÓN:
- Pesamos 0.1479 gr de Sulfato de Sodio (Na2SO4).
- Agregamos 50 ml de agua destilada para disolver el Sulfato de Sodio.
- Luego colocamos la solución en una fiola de 1 litro, y la llenamos por completo con
agua destilada.
- Agitamos por 1 minuto.

Se peso 0.1479 g de Agregamos 50 ml de agua

Na2SO4 destilada y disolver.

La muestra se aforo a Se agregó a una Fiola de 50

1 L. ml. Y se agito

SOLUCIÓN
PATRÓN.

ESQUEMA. N° 01. Procedimiento para determinar la concentración de la solución patrón.

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 B. PREPARACION DE SOLUCIONES ESTÁNDAR COMPLEMENTARIAS.
En 6 matraces de 100 ml se añadieron 0.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0, 30.0 y 40.0 ml de
solución patrón; cada una de estas se aforo con agua destilada hasta la marca, cuyas
concentraciones son:

𝐂𝟏𝐕𝟏 = 𝐂𝟐𝐕𝟐
Donde:

C1: concentración inicial. C2: concentración inicial.

V1: volumen inicial V2: volumen inicial.

1. En un matraz se Preparar una solución de 100 ppm de SO4 2- , la cual contendrá una
masa de K2SO4 = 0.0734g y será aforado hasta un volumen de 500ml con agua
destilada.

2. Para cada caso los materiales deben estar bien lavados con agua destilada.

3. Una vez lista solución se procede a separar distintas concentraciones de la solución,

para este caso se separó 7 concentraciones distintas en una fiola de 50 ml:

 5 ppm SO42- (2.5ml), aforando hasta los 50ml con agua destilada.
 10 ppm SO42-(5ml), aforando hasta los 50ml con agua destilada
 15 ppm SO42-(7.5ml), aforando hasta los 50mlcon agua destilada.
 20 ppm SO42-(10ml), aforando hasta los 50ml con agua destilada.
 25 ppm SO42-(12.5ml), aforando hasta los 50ml con agua destilada.
 30 ppm SO42-(15ml), aforando hasta los 50ml con agua destilada.
 40 ppm SO42-(20ml), aforando hasta los 50ml con agua destilada.

4. Cada nueva concentración era separada en una botella distinta colocando una etiqueta
para su futuro reconocimiento.

5. En un vaso de precipitación Se preparaba una solución amortiguadora (100ml), esta

solución amortiguadora contiene:

 10ml de HCl.
 100ml de H2O.
 33.33ml de etanol.
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  25g NaCl.
 16.67 ml glicerina.

6. También se prepara 1 solución de agua destilada y agua potable en unos vasos de

precipitación
 2.0ml de agua potable y se afora hasta 50 ml con agua destilada (grupo B).

7. En un vaso de precipitación se prepara una solución muestra que contendrá

 2.5ml de solución amortiguadora.

 0.15g de BaCl
 Todo esto será aforado con la solución anterior para este caso somos el grupo
B (1.4ml de agua potable y se afora hasta 50 ml con agua destilada.).

8. Esta solución muestra será llevada al espectrógrafo UV, las primeras muestras también
serán procesadas al igual que esta última para saber las concentraciones de iones SO4 2-
en dichas soluciones (N° 3 y 6).
9. Los resultados obtenidos son presentados en el apartado de resultados, para su debida
discusión de resultados en grupo.

C. PREPARACION DE LA SOLUCION ACONDICIONADORA:

 En 300 ml de agua destilada se agregó:
 30 ml de HCl.
 100 ml de Etanol al 96%.
 75 gr de Cloruro de Sodio.
 50 ml de Glicerina.
 Luego agitar hasta obtener una solución homogénea.

D. ANALISIS DE IONES SULFATO:

 A cada una de las siete muestras de solución patrón de le añadió 2.5 ml de
solución acondicionadora, a continuación, se agregó 0.3 gr de BaCl2.
 Agitamos cada muestra durante 1 minuto.
 Finalmente vertimos la solución en la celda y procedemos a medir la absorbancia
en el espectrofotómetro.

E. Finalmente, con los datos obtenidos de absorbancia procedemos a determinar la gráfica

de calibración la cual será (Absorbancia vs Concentración de Sulfatos).
F. También analizamos agua de la playa Huanchaco, en una fiola de 50 ml colocamos 1 ml
de agua de mar, luego añadimos 2.5 ml de solución acondicionadora y 0.2 gr de BaCl2.
Enrazamos con agua destilada hasta completar los 50 ml, agitamos durante un minuto a
velocidad constante y continuación la llevamos al espectrofotómetro para su análisis.

Caracterización de Materiales Página 11

2. FUNCIONAMIENTO DEL ESPECTROFOTOMETRO
1) Levantamos la pantalla y encendemos el equipo por la parte posterior.

2) Una vez finalizado el testeo del equipo (aproximadamente 1 hora),

aparecerá una ventana principal con 5 opciones, de las cuales escogemos lo
siguiente:

Opción 1: Análisis Fotométrico (Medidos para cierta longitud de Onda)

i) Presionamos el Botón 1

ii) Los parámetros se pueden ajustar, presionando el Botón F1

iii) Allí encontraremos:

a) Modo de Medición: Abs
b) Longitud de Onda: 660.0 nm
c) Factor K: 1.0
d) Ajustes con la oscuridad: cuando se cambia de ambiente.

iv) Para cambiar el Modo de Trabajo pulsar el “Botón 1” y cambiare a Tramitancia.

v) De igual manera, la longitud de Onda, pulsando el “Botón 2”.

vi) Colocamos mediante el Teclado Numérico, la longitud de Onda requerida y

presionamos “Enter”.

vii) Con el “Botón Return” se lograra volver a la pantalla inicial de medición.

viii) Ahí se observara el Modo Fotométrico y la Longitud de Onda.

ix) Con F2, se eliminan los datos de la pantalla.

x) Con F3 modificamos los números de celdas de la muestra

 Cantidad de Celdas: 8
 Cantidad de Lecturas: 8
 Celda en Blanco: Yes o No
 Movimiento de las Celdas a Analizar

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 xi) Para modificar la cantidad de celdas solo presiona 1.

xii) Para volver presionar “Return” (Pantalla inicial de la Opción 1).

xiii) Colocar las muestras, luego presionar “Start” para iniciar la lectura.

Opción 2: Espectro Medido

i) Se observa el Modo Spectro; λ y Abs

ii) Se observara: con F1

 Velocidad
 Intervalos
 Lectura de onda λ
 Rango
 Lamparasa
iii) Volver a la pantalla inicial con Return.

iv) Tenemos el siguiente diagrama

Abs

λ
v) Ir F3
 Cantidad de Celdas: 8
 Posición de Celda: 1
 Resetear Celda

vi) Return, para ir a la pantalla de inicio.

vii) Levantar el compartimiento, colocamos el Filtro en la Posición 1 como

esta en la configuración del equipo.

viii) Una vez colocado el Filtro, presionar Start e iniciamos las mediciones.

ix) Se observara un pico, para saber la Lectura Exacta; presionamos F2. Nos
pide la lectura aproximada e un rango y presionar Enter.

x) Con las botones direccionales nos desplazamos, hasta llegar a un pico mas
alto; se observara la λ y su Abs.

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 Opción 3: Método Cualitativo

i) Se puede variar sus parámetros F1

 Modo de Trabajo: Factor K
 Longitud de Onda
 Cambio de Unidades

ii) F2: Eliminación de Datos

iii) F3: Ver

 Numero de Celdas
 Posición de Celdas

Opción 4: Método de DNA/Proteínas

i) F1: Parámetros
ii) F2: Eliminación de Datos
iii) F3: Impresión

Opción 5: Utilidades
Para ver el sistema operativo.

VI. RESULTADOS:
Nº Ppm SO42- ABSORBANCIA
01
0 0.123
02
5 0.164
03
10 0.204
04
1 0.253
05
2 0.307
06
3 0.373
07
4 0.484
TABLA Nª 6: Resultados de la absorbancia para cada concentración de sulfato.

N° ABSORBANCIA

1 0.661

TABLA N° 7: Resultados del agua de mar.

Caracterización de Materiales Página 14

 VII. ANALISIS DE RESULTADOS:
- Según la gráfica N°2 se observa que el cálculo de la concentración (en ppm) para
el agua del mar de Huanchaco con una absorbancia de 0.661 resulto ser de 81 ppm
para 1 ml de muestra (agua de mar).
- Luego de obtener los ppm para 1 ml de muestra de agua de mar, se hizo los
cálculos correspondientes para encontrar la concentración en ppm cuando la
muestra sea de 50 ml, el resultado de estos cálculos fue de 4050 ppm
aproximadamente.
- Esto se explica debido a que es un agua muy salina y su absorbancia es mayor que
a las muestras de solución patrón.
VIII. RECOMENDACIONES:

a. Las presencias de otros iones pueden alterar la lectura de la absorbancia, tener

presente lo que la norma o el método recomienda cuando se presentan estos
casos.
b. Para empezar a la lectura de la absorbancia en el espectrofotómetro T-80, este
se debe encender 1 hora antes para que cargue todo el sistema y se estabilice.
c. Las celdas de vidrio deben estar libres de impurezas, de lo contrario, existirán
aberraciones en las lecturas de absorbancia y/o transmitancia. Para eso se debe
limpiar con papel toalla y agua destilada. Se debe agarrar por el lado opaco.
d. Realizar curvas de calibración de otros metales utilizando el software (modo
PC), el cual trae muchas ventajas frente al uso del espectrofotómetro en modo
MCU.
IX. CONCLUSIONES:
 Realizamos exitosamente el laboratorio y logramos encontrar la absorbancia para
las distintas soluciones a diferentes concentraciones (0ppm, 5 ppm, 10 ppm, 15
ppm, 20 ppm, 30ppm y 40 ppm) mediante espectroscopia ultravioleta visible.
 Con la ayuda y explicación del Ing. Otiniano Mendez, se pudo aprender el uso
correcto del espectrofotómetro y los pasos a seguir para analizar nuestras
soluciones.
 Con los datos obtenidos del espectrofotómetro hemos podido construir nuestra
curva de calibración.

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 X. REFERENCIAS BIBLIOGRAFÍCAS:

[1] Fisicoquímica, Castellan G. W., Addison Wesley Longman, 2ª Edición, 1987.

[2] SKOOG, D.A.; Leary J.J., Holler F. James; PRINCIPIOS DE ANÁLISIS

[3] Instrumental, 5° ed.; Ed. McGraw-Hill (1998), págs. 353-367.

[4] Espectrofotometría molecular:

uv.mx/personal/aherrera/files/2014/05/L.-Ley-de-Bouguer-Lambert-Beer-0.pdf

[5]Métodos modernos de análisis químicos, por, Robert L. Pecsok y L. Donal Shields,

Editorial limusa, 1983.

[6] F.C. Jentoft, Diffuse Reflectance IR and UV-vis. Spectroscopy Fritz-Haber-Institut

der Max-Planck-Gesellschaft. 2004.

[7]Espectroscopia Ultravioleta-Visible:
mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografia/espectrometria_de_masas
.pdf.

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 ANEXOS

I) Hallamos el volumen de la solución patrón presente en cada tipo de muestra.

V 1 × C1 =V 2 × C2
1) 0ppm:

V 1=0 ml
2) 5ppm:

V 1 × 100 ppm SO −2 −2
4 =50 ml ×5 ppm SO 4
V 1=2.5 ml
3) 10ppm:

V 1 × 100 ppm SO −2 −2
4 =50 ml ×10 ppm SO 4
V 1=5 ml
4) 15 ppm:

V 1 × 100 ppm SO −2 −2
4 =50 ml ×15 ppm SO 4
V 1=7.5 ml
5) 20 ppm:

V 1 × 100 ppm SO −2 −2
4 =50 ml ×20 ppm SO 4
V 1=10 ml
6) 30 ppm:

V 1 × 100 ppm SO −2 −2
4 =50 ml ×30 ppm SO 4
V 1=15 ml

7) 40 ppm:

V 1 × 100 ppm SO−2 −2

4 =50 ml ×40 ppm SO 4
V 1=20 ml
 GRAFICA N°1: CURVA DE CALIBRACION CON LOS DATOS OBTENIDOS DEL
ESPECTROFOTOMETRO.

CURVA DE CALIBRACCION
0.8

0.7 f(x) = 0.01 x + 0.17

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 20 40 60 80 100 120

 GRAFICA N° 2: DETERMINACION DE LOS PPM APROXIMADOS PARA 50 Ml DE

SOLUCION DE AGUA DE MAR CON UNA ABSORBANCIA DE 0.661 CON LA
AYUDA DE LA CURVA DE CALIBRACION.
 CURVA DE CALIBRACCION
0.8

0.7 f(x) = 0.01 x + 0.17

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 20 40 60 80 100 120

 Cálculo matemático para encontrar los ppm para 50 ml. de agua de mar (huanchaco).

1ml. de agua de mar ------- 81 ppm aprox.

50 ml. de agua de mar ------- X ppm aprox.
(X ppm) x (1 ml. agua de mar) = (81 ppm) x (50 ml. agua de mar)
X ppm aprox. = 4050 ppm.

PREPARACION DE LA SOLUCION PATRON:

−2
Fig. 1: Pesado de Sulfato de Sodio Fig. 2: Agua destilada lista para agregar el SO 4
Fig. 3: Agregado de la mezcla en la fiola (1000ml) Fig. 4: Agitamos la mezcla

Fig. 5: Solución patrón

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES ESTÁNDAR

Fig.7: Rotulado de los depósitos Fig. 6: Lavado y secado de los depósitos

Fig. 8: Preparación de las soluciones estándar a los diferentes ppm.

Fig. 9: Depositado de las soluciones en los depósitos.

 FIG. 10: Soluciones estándar a diferentes ppm.

MEDICIÓN DE LA ABSORBANCIA EN EL ESPECTOFOTOMETRO

Fig. 11: Agregado del

cloruro de Bario a las
soluciones estándar.
Fig. 12: Espectrofotómetro Fig. 13: Depositado de la solución en el
tubo de ensayo para analizar la muestra.

Fig. 14:
Depositando el
tubo de ensayo
en el

espectrofotómetro.

Fig. 15: Datos obtenidos de las soluciones estándar a diferentes ppm.

 AGUA DE MAR (huanchaco).

Fig.16 : Filtrado del

agua de mar.

Fig. 17: Agregamos agua destilada Fig. 18: Mezcla en el depósito.

al agua de mar, hasta aforar la fiola

de 50 ml.

Fig. 19: Medición de la mezcla

en el espectrofotómetro.
 Fig. 20: Datos obtenidos
de la muestra de agua de
mar .

EQUIPO DE TRABAJO
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