“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela académico profesional de Medicina Humana

Informe:
Práctica VI

Curso:
Microbiología práctica

Estudiantes:

Bravo Castillo, Kristhel Roxanny

Cruz Cárdenas, Lori Cristina

Dávila Santiago, Cecilia Katherin

Saavedra Salazar, Rodolfo Gabriel

Docente:

Steve Tony Hurtado Escamilo

TRUJILLO-PERÚ

2023

Práctica de Laboratorio N°07

 Programa Académico: MEDICINA Experiencia curricular: MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

Semestre académico: 2023-02 Ciclo de estudios: V Tiempo de desarrollo: 3 horas

Temática: Diagnóstico microbiológico de bacterias que ocasionan infecciones gastrointestinales:

Helicobacter pylori, Escherichia coli, Salmonella sp., Shigella sp., Vibrio cholerae.

I. OBJETIVOS:
1. Fundamentar e interpretar la técnica de coprocultivo de bacterias que ocasionan EDA: Escherichia coli,
Salmonella sp., Shigella sp. y Víbrio cholerae.
2. Interpretar y valorar las pruebas bioquímicas que se utilizan para la identificación presuntiva de
enterobacterias que ocasionan infecciones gastrointestinales.

3. Ejecutar e interpretar el método inmunocromatográfico para el diagnóstico de Helicobacter pylori. II.

INTRODUCCIÓN

Cualquier intento por aislar bacterias patógenas de las heces implica la separación de las especies
patógenas, usualmente a través del uso de medios selectivos, diferenciales y de cultivos de pre
enriquecimiento. El diagnóstico bacteriológico de las infecciones entéricas se realiza de acuerdo a su
patogenia. En lasinfecciones diarreicas se utiliza el coprocultivo, pero una vez que las bacterias invaden el
torrente sanguíneo, el diagnóstico debe hacerse, además, por el hemocultivo y el estudio serológico. El
coprocultivo no debe ser realizado de rutina, esta usualmente reservado para casos de diarrea con
sangre, pacientes severamente deshidratados, diarrea crónica o en inmunocomprometidos, que
presenten signos de septicemia, cuando la infección intestinal debe ser excluida para verificar otra
etiología como la enfermedad inflamatoria intestinal y en casos de epidemias. (1,2)

La presencia de leucocitos fecales es un índice de alteración de la integridad de la mucosa intestinal, se

asocia a infecciones por enteropatógenos capaces de invadir la pared o a enfermedades primarias de la
mucosa. Las cifras respecto del valor predictivo de la presencia de leucocitos fecales varían desde cerca de
un 20% a más del 90%, dependiendo de las técnicas utilizadas y del tipo de patógenos predominantes en la
población. (44) Son usualmente observados en infecciones causadas por E. coli, Shigella invasiva y especies
de Campylobacter. El valor predictivo de ese test varia, así como el de sangre oculta en heces. (2)

III. MATERIALES
1. 1 cultivo de Enterobacerias lactosa positivo en agar Mac Conkey.
2. 1 cultivo de Enterobacerias lactosa negativo en agar Mac Conkey
 3. 1 cultivo de Salmonella sp. en agar SS
4. 3 baterías de pruebas bioquímicas en tubo para Escherichia coli, Shigella sp. y Salmonella sp.: Agar TSI,
LIA, Citrato de Simmons, Urea, MIO.

5. 1 cultivo de Vibrio cholerae en agar TCBS.

6. 3 gradillas.
7. 3 cassettes de pruebas inmunocromatográficas (prueba rápida) para Helicobacter pylori. 8. 3
asas bacteriológicas
9. 3 mecheros de alcohol y caja de fósforos.
10. Torundas de algodón
11. Alcohol medicado
12. 4 Lancetas.
13. Agua, jabón y papel toalla.
14. Guantes, mascarillas y mandilones.

IV. NORMAS DE BIOSEGURIDAD

Los estudiantes deben cumplir con las Normas de Bioseguridad establecidas; para ello, deben tomar en
cuenta lo siguiente:

- Mandil o Bata abotonada, limpia y con su nombre completo bordado en la parte delantera superior
izquierda.
- Ropa que cubra todo los miembros inferiores y calzado cerrado que no queden expuestos los pies - Uso
de guantes, mascarillas y cofia, cuando lo indique el docente.

- Los dispositivos electrónicos (celulares, tablets, laptops, smartwatch, etc.) sólo se usarán si el docente lo
considera necesario.

- Dentro del laboratorio, prohibido ingerir alimentos y bebidas de todo tipo; incluida agua, refrescos,
caramelos, galletas, etc.

- Mantener una actitud que no dañe los equipos o material de laboratorio.

- Mantener un comportamiento que no perjudique la salud física ni mental de sus compañeros. -
Otras normas estipuladas en el reglamento de Bioseguridad.
V. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA:

EJEMPLO DE UN SET BIOQUÍMICO TRADICIONAL SIN INOCULAR:

SET BIOQUÍMICO TRADICIONAL DE Shigella spp.

INTERPRETACIÓN:
- AGAR TSI: Como podemos observar Shigella spp ante el AGAR TSI tiene una reacción negativa, ya que este
medio tiene glucosa, lactosa y sacarosa, en este caso la shigella no fermenta a la lactosa, pero sí a la glucosa,
esto quiere decir que es K/A,negativo en ambos casos, y observamos el fondo amarillo por el ácido sulfhidrico
y por ser glucosa +, son aeróbicas.
- AGAR LIA: Ante este medio tiene una reacción negativa(lisina negativa), porque este medio tiene lisina y si
la lisina descarboxilasa el pH se vuelve más alcalino.
- AGAR CITRATO DE SIMMONS: Shigella tiene una reacción negativa ante este medio
- AGAR UREA: El test de la ureasa se identifica por el fondo (en el original se observa de un color salmón. si
se produce la urea(si se deagrada o no, en este caso no se degrada) va a alcalinizar el medio, tendría pH alcalino
rojo, pero como aquí no hay cambios se queda amarillo.
- MEDIO SIM: Presenta una reacción negativa, en este caso la Shigella es inmovil ya que no tiene flagelos y se
ve difuso. Por otro lado colocamos el reactivo de kovacs para ver si se forma anillo fuxia indol es porque es
positivo y si no se da esta coloración, ni anillo es porque es negativo, en este caso Shigella es negativo.
(INMOVIL)
AGAR

INTERPRETACIÓN:
- AGAR Macconkey: Las colonias de Shigella son transparentes, debido a que son lactosa negativos
y así las diferenciamos de las otras bacterias mencionadas, en especial de la E. Coli. Se diferencia de
la Salmonella por el Agar XLD o el SS, ya que en este caso las colonias de la Shigella continúan siendo
transparentes.
- AGAR XLD: No fermenta con la lactosa, ni la sacarosa, ni xilosa no permite que el rojo virol cambie
a amarillo, por ello son transparentes. Por ejemplo, la xilosa no es fermentada por la Shigella.
- AGAR SS: La Shigella al no ser fermentadora de la lactosa, crecen de manera adecuada en el medio,
generando estas colonias de color transparente.

SET BIOQUÍMICO TRADICIONAL DE Escherichia coli.

(K) alcalino– (A) ácido

INTERPRETACIÓN: Indol positivo (tiene el anillo en el test de indol)

- TRIPLE SUGAR IRON AGAR (TSI): En este agar podemos observar que depende de el metabolismo y el
ph de la bacteria, en este caso tenemos que tiene sacarosa es po ello el color amarillo que podemos observar
en el tubo, es A/A y al fondo se debe a que el fondo estaba en un ambiente ácido y esto produce más ácido
sulfhídrico, en este caso se dio uso de la glucosa (la fermentación) en anaerobiosis, como sabemos el
Escherichia coli es una bacteria anaerobia facultativa, es por ello de está recación. Por ello es que el pico de
flauta en la superior se debe a la necesidad de un medio de aire.
- LISINA HIERRO AGAR (LIA): Podemos observar que es lisina positiva ya que tiene el fondo púrpura y
esto se debe a que este medio tiene lisina y esto va a degradarse haciendo que el ph se haga más alcalino.
- AGAR CITRATO DE SIMMONS: En este medio el E. coli es negativo.
 - AGAR UREA: En este medio tenemos que está bacteria es ureasa negativa, ya que no degrada la urea.
- MEDIO DE SULFURO INDÓL PARA MOVILIDAD (MEDIO SIM): En este medio el E. coli es negativo
ya que no se revierte el ph ni la glutina descarboxilasa (ES MÓVIL).

AGAR

INTERPRETACIÓN:
- AGAR SALMONELLA- SHIGELLA (SS): En este medio es negativo por la ausencia de lactosa y es por
eso que las colonias son de color transparente.
- AGAR XILOSA, LISINA, DESOXICOLATO (XLD): En este cultivo el E. coli podemos observar que las
colonias son de color amarillo.
- AGAR MacConkey (LACTOSA (+)/ROSA OSCURO): Podemos observar que las colonias son rojas
intensas por la lactosa positiva de está bacteria.

SET BIOQUÍMICO TRADICIONAL DE Salmonella enterica.

INTERPRETACIÓN:
 - TRIPLE SUGAR IRON AGAR (TSI): Si la Salmonella enterica está presente, es probable que haya un
cambio en la coloración del medio debido a la producción de azufre de hierro, lo que resultaría en la
formación de un área de color negro o verde oscuro en el tubo.
- AGAR CITRATO DE SIMMONS: Contiene indicador de pH. Cuando Salmonella enterica crece y utiliza el
citrato como fuente de carbono, el pH del medio se vuelve alcalino, lo que resulta en un cambio de color del
medio, pasando de verde a azul.
- AGAR UREA: Salmonella enterica es negativa para la producción de ureasa, lo que significa que no es capaz
de descomponer la urea en amoníaco y dióxido de carbono. El medio de cultivo no cambia de color.
- MEDIO SIM: Salmonella enterica es capaz de producir sulfuro a partir de la reducción de sulfato. Esto se
manifiesta como la formación de un precipitado negro en el tubo SIM debido a la reacción del sulfuro con el
hierro en el medio

AGAR

INTERPRETACIÓN:
AGAR SS: En este cultivo vemos un crecimiento bastante significativo de salmonella enterica en el
que se ven las colonias de un color negro medio verdoso, esto se da debido a el sulfuro de
hidrógeno reacciona con el hierro del medio y forma sulfuro de hierro, que es de color negro o
negro-verdoso. Por lo tanto, cuando las cepas de Salmonella enterica que tienen la capacidad de
producir azufre de hidrógeno crecen en el agar Salmonella-Shigella, las colonias pueden desarrollar
un centro negro característico.

AGAR XLD: Cuando Salmonella enterica crece en agar XLD, las colonias típicas son de color rojo o
rosado con un centro negro o verdoso. Estas colonias suelen tener una apariencia característica
con un borde rosado y un centro oscuro debido a la producción de azufre de hidrógeno (H2S). El
agar XLD contiene indicadores que reaccionan con el azufre de hidrógeno producido por
Salmonella, lo que da como resultado este patrón de coloración. Sin embargo, por el tiempo de
incubación (un día aproximadamente), no se puede apreciar bien el crecimiento, sin embargo si el
cultivo se coloca a contra luz podremos observas unas colonias formandose de color medio rosa.

AGAR MACCONKEY: Debido a que Salmonella enterica no fermenta la lactosa, las colonias que
crecen en el agar MacConkey suelen ser incoloras o translúcidas. Esto se debe a que no producen
ácido que cause un cambio de color en el medio, a diferencia de las bacterias que fermentan la
lactosa, que producen ácido y hacen que el medio se vuelva rosa o rojo.

Vibrio cholerae:
INTERPRETACIÓN:
AGAR TCBS (Agar tiosulfato citrato bilis sacarosa) CRECIMIENTO POSITIVO: En este cultivo podemos
observar sus colonias amarillas en un lado en la que tiene la fecha de 18/10/23 y en el otro podemos observar
las colonias de color verde con la fecha de 07/10/23, esto se debe a que degrada sacarosa y es oxidasa
positivo y lactosa negativo.
STRING TEST O TEST DE LA CUERDA: Esto se realiza en un portaobjetos, donde se pondrán colonias
obtenidas del medio de cultivo, después se pondrá una gota de solución de sexocilato de sodio al 0,5%,
después se introduce la asa bacteriológica y se mezcla.Sí el resultado es positivo, las células bacterianas lisan
por el efecto del desoxicolato, por lo que se libera el ADN de la bacteria, hará la suspensión o mezcla y se
volverá turbia y viscosa. Al tirar levemente la asa, se formará un hilo mucoide o como cuerda, que se vuelve
más tenaz de 60 segundos o más.

Como podemos observar el hilo que se ve nos da a

entender que el test es positivo con V. cholerae. Pero si fuera V. Aeromonas casi siempre es
negativo.
Actividad 2: Prueba inmunocromatográfica para el diagnóstico de Helicobacter pylori y hepatitis A

Prueba inmunocromatográfica para el diagnóstico de Helicobacter pylori

INTERPRETACIÓN:
Resultado Positivo:
● Si la línea de prueba (T) y la línea de control (C) aparecen en la ventana de resultados, el resultado
es positivo. Esto indica que se ha detectado la presencia de Helicobacter pylori en la muestra.
● Un resultado positivo generalmente significa que el paciente tiene una infección activa por
Helicobacter pylori y puede requerir tratamiento médico.
Resultado Negativo:
● Si solo aparece la línea de control (C) y no se observa la línea de prueba (T), el resultado es
negativo. Esto sugiere que no se ha detectado Helicobacter pylori en la muestra.
● Sin embargo, es importante tener en cuenta que un resultado negativo no excluye completamente
la posibilidad de infección. Pueden existir falsos negativos en algunas situaciones, por lo que se
pueden requerir pruebas adicionales si hay una fuerte sospecha clínica de infección.
Resultado No Válido o Indeterminado:

● Si no aparece la línea de control (C), la prueba no es válida y se debe repetir con una nueva muestra
y un nuevo kit de prueba. La falta de una línea de control significa que la prueba no funcionó
correctamente.

Prueba inmunocromatográfica para el diagnóstico de hepatitis A

INTERPRETACIÓN:
Resultado Positivo:
 ● Si aparecen dos líneas, la línea de control (C) y la línea de prueba (T), el resultado se considera
positivo. Esto indica la presencia de anticuerpos específicos contra el virus de la hepatitis A en la
muestra.
● Un resultado positivo sugiere que la persona ha estado expuesta al virus de la hepatitis A en el
pasado o tiene una infección activa. La presencia de anticuerpos IgM anti-VHA indica una infección
reciente, mientras que la presencia de anticuerpos IgG anti-VHA sugiere una infección pasada o
vacunación.
Resultado negativo:
● Si solo aparece una línea de control (C) en la ventana de resultados, el resultado se considera
negativo. Esto indica que no se han detectado anticuerpos específicos contra el virus de la hepatitis
A en la muestra. La persona no ha estado expuesta previamente al virus o no ha desarrollado una
respuesta inmunitaria detectable.
Resultado no válido o indeterminado:
● Si no aparece la línea de control (C), la prueba no es válida y se debe repetir con una nueva muestra
y un nuevo kit de prueba.

VI. ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS

1. Plantear el esquema para el diagnóstico microbiológico de Enfermedad diarreica aguda EDA ocasionada
por Escherichia coli, Shigella sp., Salmonella sp. y Vibrio cholerae.
● Recolección de muestras : Se deben recolectar muestras de heces de los pacientes que
presentan síntomas de EDA. Es importante seguir los protocolos adecuados de recolección
y transporte de muestras para garantizar la integridad de los microorganismos presentes.

● Cultivo bacteriano : Las muestras de heces se cultivan en medios de cultivo selectivos para
cada una de las bacterias objetivo: Escherichia coli, Shigella sp., Salmonella sp. y Vibrio
cholerae. Estos medios permiten el crecimiento de las bacterias y la inhibición de otros
microorganismos no deseados. El cultivo se realiza en condiciones controladas de
temperatura y tiempo.

● Identificación de las bacterias : Una vez que se haya obtenido el crecimiento bacteriano en
el cultivo, se procede a la identificación de las bacterias objetivo. Esto se puede realizar
mediante pruebas bioquímicas y serológicas que permiten diferenciar cada una de las
especies bacterianas presentes en las muestras.

● Pruebas de sensibilidad a los antibióticos : Se realiza un antibiograma para determinar la

sensibilidad de las cepas bacterianas a diferentes antibióticos. Esto es importante para guiar
el tratamiento adecuado en caso de ser necesario.

2. Elaborar una tabla comparativa con el perfil metabólico de Escherichia coli, Shigella sp., Salmonella sp.
y Vibrio cholerae.
 Característica Escherichia coli Shigella sp. Salmonella sp. Vibrio cholerae
Metabólica

Obtención de - A través de la Puede obtener Puede obtener Puede obtener

Energía fermentación energía a través energía a través energía a través
como de la de fermentación y de fermentación y de fermentación y
respiración respiración, respiración. En respiración.
- En condiciones aunque en condiciones En condiciones
anaeróbicas, E. condiciones anaeróbicas, anaeróbicas,
coli realiza anaeróbicas, tiende a realizar Vibrio cholerae
fermentación tiende a realizar fermentación realiza
ácido láctica, fermentación fermentación
fermentación para obtener
ácido acética, energía
fermentación
etanólica, entre
otras

Fermentación E. coli puede La mayoría de las La mayoría de las Vibrio cholerae es

fermentar la especies de especies de capaz de
lactosa. Esto Shigella no Salmonella no fermentar una
significa que es fermentan fermentan lactosa variedad de
capaz de utilizar la lactosa. Esto es azúcares,
lactosa como una diferencia incluyendo
fuente de carbono clave en las sacarosa, glucosa
y energía. pruebas de y maltosa. La
laboratorio fermentación de
utilizadas para estos azúcares
distinguir Shigella puede ser
de otras bacterias importante en la
entéricas, como patogenicidad de
Escherichia coli, la bacteria
que a menudo
pueden fermentar
lactosa.

Flagelo - Posee múltiples - Generalmente Salmonella Vibrio cholerae

flagelos no tiene flagelos generalmente posee flagelos
distribuidos por y, por lo tanto, no tiene múltiples que le permiten
toda la superficie es móvil flagelos peritricos, moverse de
de la célula. Estos lo que le permite manera activa en
flagelos le moverse y nadar ambientes
permiten moverse de manera activa acuáticos. Estos
de manera flagelos le
nadadora confieren una
forma
característica en
forma de coma

Cápsula Puede tener No suele tener No suele tener No suele tener

cápsula

Producción de E. coli puede Shigella produce Salmonella no - La toxina

Toxinas: producir una varias toxinas que produce toxinas cholérica,
variedad de son responsables específicas de también conocida
toxinas, algunas de los síntomas virulencia en la como toxina
misma medida que
de las cuales son de la shigelosis. termolábil de
otras bacterias
responsables de Estas toxinas patógenas. En Vibrio cholerae
enfermedades incluyen la toxina (CT), es la
 gastrointestinales, Shiga (en el caso cambio, su principal
como la toxina de Shigella patogenicidad se virulencia de la
colérica dysenteriae) y asocia bacteria. Esta
(producida por otras toxinas que principalmente a su toxina es
capacidad para
cepas causan daño a la responsable de
invadir y dañar las
enterohemorrágic mucosa intestinal, células epiteliales los síntomas
as de E. coli) o la lo que lleva a la del tracto característicos del
toxina diarrea, la fiebre y gastrointestinal, lo cólera, como la
termoestable (ST) otros síntomas de que conduce a diarrea acuosa y
y la toxina la enfermedad. síntomas como la profusa
termolábil (LT) diarrea, la fiebre y - La toxina CT
asociadas a la otros síntomas de la actúa
diarrea. enfermedad estimulando la
producción
excesiva de fluido
en el intestino
delgado, lo que
conduce a la
diarrea intensa y
potencialmente
mortal

3. Explicar el fundamento de la prueba de TSI, LIA, Citrato de Simmons, MIO y Sting test.
Prueba de TSI
- Este va a poseer tres azúcares: sacarosa, dextrosa y lactosa, rojo fenol que detectará a los
carbohidratos al fermentarse, como también sulfato ferroso para que se detecte al ácido sulfhídrico.
Cuando se degrada el azúcar se mira en que el color pasa a ser amarillo. El sulfato se reduce a ácido
sulfhídrico por gérmenes que al reaccionar con sal férrica produce sulfuro de hierro de una coloración
negra.
Prueba de LIA
- La peptona y el extracto de levadura provocan los nutrientes para el desarrollo de las bacterias. La
glucosa es la sustancia fermentadora y la lisina es el sustrato que detecta las enzimas descarboxilasa y
deaminasa. Los microorganismos que fermentan la glucosa acidifican el medio y producen el cambio
de color de morado a amarillo, mientras que los microorganismos que fermentan glucosa pero no
poseen actividad lisina decarboxilasa, generan un cambio total del medio al color amarillo.
Prueba de Citrato de Simmons
- El medio de cultivo se diferencia por microorganismos que pueden usar citrato como única origen de
carbono utilizar sales de amonio como único origen de nitrógeno, con la siguiente producción de
volverse alcalino el metabolismo del citrato se hace, en bacterias que poseen citrato permeasa, por
medio del ciclo del ácido tricarboxílico. El medio entonces cambia al color azul y esto indica la
producción de citrato permeasa.
Prueba MÍO
- Los microorganismos que fermentan glucosa se encargan de acidificar el medio y generan cambio del
color morado al amarillo. Las condiciones de acidez son adecuadas para la actividad de la enzima
ornitina decarboxilasa, que va a actuar en la ornitina provocando putrescina, como consecuencia el
medio se vuelve alcalino y cambia al color morado.
String test
- Se hace en un portaobjetos, donde se suspenden bacterias del medio de cultivo. Se coloca el ansa
bacteriológica en la mezcla. Si el efecto es positivo las células de las bacterias harán lisis a consecuencia
del desoxicolato, es así que se libera el ADN de la bacteria y la suspensión se vuelve viscosa, de lo que
era turbia. Al sacar de forma lenta la ansa se forma el hilo mucoide o cuerda, esta se convierte en más
tenaz luego de 60 segundos o más.

VII. BIBLIOGRAFÍA:
1. Marín C, Taboada A, Benitez G. Indicaciones y Valoración Clínica del Urocultivo y Coprocultivo. Rev. Inst.
 Med. Trop 2015;10(1):37-47. Disponible en: http://scielo.iics.una.py/pdf/imt/v10n1/v10n1a06.pdf
2. Díaz JJ, Echezuria L, Petit de Molero N, Cardozo MA, Arias A, Rísquez A. Diarrea aguda: epidemiología,
concepto, clasificación, clínica, diagnóstico, vacuna contra rotavirus. Archivos Venezolanos De
Puericultura y Pediatría 2014;77(1):29-40. Disponible en:
https://www.redalyc.org/pdf/3679/367937050007.pdf

3. Procop GW, Koneman EW. Koneman. Diagnóstico Microbiológico. Texto y Atlas en color. 7ma ed.
Barcelona: Lippincott Williams and Wilkins. Wolters Kluwer Health; 2018. 1956 p.

4. Forbes B, Bailey WR, Scott EG, Sahm DF, Weissfeld AS, Trevino EA, Rondinone S. Bailey & Scott.
Diagnóstico microbiológico. 12 ed. Buenos Aires: Editorial Médica Panamericana; 2009. 1026 p.