INFORME PRACTICA 8.

AISLAMIENTO E IDENTIFICACION Listeria monocytogenes

Santiago Trillos-1641442

Wendy Chaustre-1641439

Sandra Ramirez-1641438

Angélica Parada-1641416

Universidad Francisco de Paula Santander

Microbiología Agroindustrial

Dirigido a: Claudia Janeth Diaz Carvajal

Resumen

Las Salmonelas, tienen forma bacilar de tamaño corto y son gram negativos, móviles y no esporulados lo
cual nos indica que no es resistente al calor, con oxidasa negativa, no fermentadores de lactosa pero si de
glucosa con producción o no de gas y ácido sulfhídrico, anaerobios facultativos que nos señala que viven
en ausencia como en presencia de oxígeno lo cual son indicadores de que se encuentran en diferentes
ambientes pues su temperatura optima se encuentra en los 37 °C es decir a temperatura ambiente y se
destruyen a temperaturas mayores de 60 °C pues no son termorresistentes y su crecimiento no se da a
menores de 5 °C.

Las dosis altas de esta bacteria producen enfermedades gastrointestinales sus UFC oscilan entre 105 y 109
UFC / gr o ml, estas bacterias superan las barreras mucosa y linfática llegando a invadir el torrente
sanguíneo, produciendo fiebre, diarrea y cólicos estomacales.

Palabras clave: Salmonella, linfático, oxidasa negativa, esporulados, gastrointestinal.

Abstract

Salmonellae have a short bacillary shape and are gram negative, mobile and non-sporulating, which
indicates that they are not resistant to heat, with negative oxidase, not fermenters of lactose but of glucose
with production or not of gas and hydrogen sulfide. , facultative anaerobes that tell us that they live in the
absence as well as in the presence of oxygen, which are indicators that they are found in different
environments, since their optimum temperature is 37 °C, that is, at room temperature, and they are
destroyed at temperatures greater than 60 °C because they are not heat resistant and their growth does not
occur below 5 °C.

High doses of this bacterium produce gastrointestinal diseases, its CFUs range between 105 and 109 Ffc /
gr or ml, these bacteria overcome the mucosal and lymphatic barriers, invading the bloodstream,
producing fever, diarrhea and stomach cramps.

Keywords: Salmonella, lymphatic, negative oxidase, sporulated, gastrointestinal.

 1. INTRODUCCION

En la siguiente practica de laboratorio se procedió a identificar la presencia de Salmonella la cual es una

bacteria de origen fecal y que puede igualmente contaminar los alimentos por medio de aguas residuales.
Para esta practica se estudiaron alimentos como carne de haburguesa y lechuga, ya que son alimentos
propensos a estar contaminados por esta bacteria. Para la identificación vamos a utilizar varios métodos y
por ultimo si es necesario hacer las pruebas bioquímicas. El objetivo de esta practica es identificar si hay
presencia o ausencia en los dos alimentos.

1. MATERIALES Y MUESTRAS
Tubos de ensayo
Cajas de Petri
Pipetas
Asas
Mechero
Licuadora
Agua peptonada tamponada
Tetratonato
Carne de hamburguesa
Lechuga

1. DIAGRAMA DE FLUJO
1. PREPARACION DE LAS MUESTRAS
 1. RESULTADOS

La prueba para identificación de Salmonella se llevo a cabo en 3 etapas las cuales fueron:

1. Pre-enriquecimiento no selectivo, en este paso el objetivo era recuperar las células de Salmonella y
usamos agua Tamponada para la estabilización de pH. Después de 18-20h incubada la muestra a
37°C se procedió a hacer el paso 2.
2. Enriquecimiento selectivo con caldo Tetrionato, para este paso sembramos 1 ml en cada tubo que
contenía el caldo selectivo y se incubaron las muestras a 42°C por 18-24h
3. Aislamiento diferencial en medio solido XLD, en este proceso se busca estimular el crecimiento de
Salmonella. Con ayuda de un asa tomamos las muestras de los tubos y sembramos en cajas de Petri
en zig-zag y se llevaron a incubar a 37°C por 24-48h
4. Para la identificación debia tenerse en cuenta lo siguiente: si había presencia de Salmonella
observaríamos colonias de color rojo con centro negro, y si había presencia de Shiguella solo se
observarían colonias rojas. Pasados las 48h se hizo lectura de las cajas.

1. DISCUSION DE LOS RESULTADOS

Para hacer el reporte nos basamos en los términos (presencia-ausencia)

No hubo crecimiento en ninguna caja. Se expresa:

Ausencia de Salmonella en 25gr de Carne

1. ANEXOS

Agua peptonada tamponada + 25 gr de muestra previamente incubada

Enriquecimiento selectivo
Aislamiento diferencial

Resultados
 1. BIBLIOGRAFIA

http://www.repositorio.ugto.mx/bitstream/20.500.12059/3643/1/Identificaci%C3%B3n%20Bioqu%C3%AD
mica%20de%20los%20Diversos%20Tipos%20de%20Salmonella%20en%20el%20%C3%81rea%20Natural
%20Protegida%20%E2%80%9CLas%20Musas%E2%80%9D%20en%20Manuel%20Doblado%2C%20Gua
najuato.pdf

https://mdmcientifica.com/wp-content/uploads/2021/03/IS-24-SERIES-DE-IDENTIFICACION-
BIOQUIMICA.pdf

https://www.lifeder.com/

1. CONCLUSIONES

Para evitar que los alimentos sean contaminados por Salmonella se deben emplear técnicas de buena
manipulación de los alimentos y almacenado asi como evitar alimentos mal cocidos y en temperaturas
ambiente

Para la identificación de Salmonella nos basamos en presencia-ausencia y las colonias debían presentar un
color rojo con centro negro, por el contrario, Shiguella solo serian colonias de color rojo

Las enfermedades más comunes causadas por Salmonella son la Salmonelosis y Enterocolitis que son
transmitidas por embutidos, verduras y aguas residuales causando síntomas como vomito, fiebre, mareos y
dolor intestinal.
 1. CONSULTA

¿Qué otra prueba bioquímica se hace para salmonella?

Fenilalanina- Desaminasa

Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desaminar el aminoácido fenilalanina en ácido
fenilpirúvico por la actividad de la enzima fenilalanina desaminasa, con la consiguiente acidez resultante.
Esta actividad enzimática es característica de todas las especies del género Proteus y del grupo Providencia
por lo que se usa para separar ambos géneros de otras enterobacterias. El ácido fenilpirúvico puede
detectarse por la adición de un reactivo (cloruro férrico al 10%) Se cultiva el microorganismo en agar
fenilalanina sembrando la superficie del slant con abundante inóculo e incubando durante 24 horas a.37
ºC. Seguidamente se añade 4-5 gotas de la solución de cloruro férrico al 10% de manera que inunde todo
el medio inclinado. La presencia de ácido fenilpirúvico (prueba positiva) se manifiesta por la aparición de
un color característico verde oscuro o verde-

azulado.

Prueba Agar entérico Hektoen

BD Hektoen Enteric Agar es un medio moderadamente selectivo y de diferenciación para el aislamiento y

el cultivo de microorganismos gram negativos entéricos, y especialmente para el aislamiento de especies de
Shigella y Salmonella a partir de muestras fecales.

Las sales biliares hacen que el medio sea selectivo, inhibiendo los microorganismos grampositivos y
reduciendo el crecimiento de algunos microorganismos gram-negativos diferentes de Salmonella y
Shigella. Se incluyen lactosa, sacarosa y salicina para una óptima diferenciación según el color de las
colonias y del medio adyacente a éstas. La Salmonella y la Shigella no fermentan estos compuestos de
carbono y, por tanto, no ocasionan un cambio de color en el sistema indicador del pH.

Prueba Agar Bismuto Sulfito

El agar sulfito de bismuto es un medio selectivo para el aislamiento y la identificación preliminar de la

Salmonella typhi y otros tipos de salmonela procedentes de material patológico, aguas residuales,
suministros de agua, alimentos y otros productos que podrían contener estos patógenos.

El Verde brillante y el bismuto-sulfito inhiben considerablemente los gérmenes de acompañamiento.El

sulfato de hierro (III) es un indicador del sulfuro de hidrógeno que producen las colonias de Salmonella
H2S-positivas. Habitualmente, esta reacción produce una precipitación marrón o negra en el medio de
cultivo, así como colonias de color negro o verde con brillo metálico.

¿en que consiste la prueba API20?

API 20
Es un sistema estandarizado que permite la identificación de enterobacteriácea y otros bacilos gran
negativos no exigentes, consiste en un dispositivo de plástico con varios microtubos que contienen
diferente medio de cultivo deshidratados o diferentes sustratos de enzimas de acuerdo al tipo de prueba
que se quiere montar.

API® 20E

Permite la identificación de microorganismos pertenecientes al grupo de las enterobacterias y de otros

bacilos gram negativos. Es una galería conformada por 20 microtubos.

Cuando se utiliza esta galería las cartas de colores correspondientes a las pruebas negativas y positivas son
las siguientes:

API® 20 NE

Permite la identificación de bacilos gram negativos no pertenecientes al grupo de las enterobacterias como
por ejemplo Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, entre otros. Es
una galería conformada por 20 microtubos.

Cuando se utiliza esta galería las cartas de colores correspondientes a las pruebas negativas y positivas son
las siguientes:
API® 20 A

Con este sistema miniaturizado se pueden montar las pruebas bioquímicas que permiten la identificación
de bacterias anaerobias. Es una galería conformada por 20 microtubos. Una vez inoculada la galería con
la suspensión del microorganismo a identificar, el sistema requiere ser incubado en una jarra Gaspak u
otro sistema que provea condiciones de anaerobiosis.

Cuando se utiliza esta galería las cartas de colores correspondientes a las pruebas negativas y positivas son
las siguientes:

API® STAPH

Este sistema permite la identificación de microorganismos pertenecientes al género Staphylococcus,

Micrococcus y Kocuria. Es una galería conformada por 20 microtubos.

Cuando se utiliza esta galería las cartas de colores correspondientes a las pruebas negativas y positivas son
las siguientes:

Cuadro sinóptico características bioquímicas de Salmonella.

¿Qué es un microorganismo emergente y cuál es su importancia?

Se trata de mutaciones genéticas que llevan a cabo algunos patógenos, bien por adquisición de nuevos
genes, pérdida de alguno de ellos o la trasmisión de los mismos, con un único objetivo, volverse resistentes
frente a las adversidades. Caso similar es el de algunas bacterias que se vuelven inmunes a algunos
tratamientos antibióticos cuando hemos abusado de ellos, porque digamos “que ya los conocen” y saben
cómo evitar que les afecten.

Genera la necesidad de que las industrias de alimentos implementen programas de control basándose en
técnicas de identificación confiables que les permitan obtener la mayor información posible sobre estos
microorganismos.

4 ejemplos de bacterias emergentes

Escherichia coli: La cepa O157:H7 de Escherichia coli fue detectada en 1982 y se transmite al hombre a
través de alimentos contaminados, habiendo causado brotes de diarreas sangrantes y a veces síndrome
urémico hemolítico (insuficiencia renal) en Norteamérica, Europa y Japón.

Legionella pneumophila: cuya detección en 1977 permitió explicar el brote de neumonía atípica en un
centro de convenciones de Filadelfia en 1976. Desde entonces, la legionelosis se ha detectado en brotes del
mundo entero en relación sobre todo con sistemas de aire acondicionado en mal estado de mantenimiento.

Listeria monocytogenes: causante de listeriosis. Es uno de los patógenos causante de infecciones

alimentarias más violentos, con una tasa de mortalidad entre un 20 a 30 %, más alta que casi todas las
restantes toxico infecciones alimentarias.​

Campylobacter: Entre las complicaciones posteriores a la infección figuran la artritis reactiva (inflamación
dolorosa de las articulaciones que puede durar varios meses) y trastornos neurológicos como síndrome de
Guillain-Barré, una forma de parálisis semejante a la poliomielitis que puede provocar disfunción
respiratoria

Describir que enfermedades produce Salmonella

Enterocolitis: Es una infección bacteriana en el revestimiento del intestino delgado causada por la bacteria
salmonela. Es un tipo de intoxicación por alimentos.

Tiempo de incubación: 24-48 horas

Alimentos implicados: pavo, relleno para pavo, pollo o huevos que no han sido cocinados o almacenados
adecuadamente

Síntomas: cólicos, escalofríos, diarrea, vomito, fiebre y dolor muscular

Prevención de contaminación: Manejar y almacenar adecuadamente los alimentos, lavarse bien las manos
es importante al manipular huevos, aves de corral y otros alimentos, si usted posee un reptil, use guantes al
manipular el animal o sus excrementos, ya que la salmonela se puede transmitir fácilmente a los humanos.

Fiebre tifoidea: La fiebre tifoidea está causada por ciertos tipos de bacterias gramnegativas Salmonella.

Tiempo de incubación: entre una y tres semanas después de la exposición.

Alimentos implicados: verduras crudas, alimentos a temperatura ambiente, aguas residuales y alimentos
contaminados por heces.

Síntomas: Generalmente, aparece una enfermedad similar a la gripe, que comienza entre 8 y 14 días
después de la infección. Los síntomas de la fiebre tifoidea comienzan de forma gradual.Las personas
afectadas tienen fiebre, dolor de cabeza, dolor de garganta, dolores musculares y articulares, dolores
abdominales y tos seca. Es posible que pierdan el apetito

Prevención de contaminación: Las personas que viajen a zonas donde la fiebre tifoidea sea frecuente deben
evitar comer verduras crudas u otros alimentos servidos o almacenados a temperatura ambiente.

Por lo general, se puede consumir de forma segura lo siguiente:

Alimentos que se sirven muy calientes inmediatamente después de cocinarlos

Bebidas embotelladas o enlatadas que están selladas

Té o café calientes

Frutas que haya pelado la propia persona.

Debe asumirse que el hielo y el agua (a menos que sea hervida o clorada antes de su uso) son
potencialmente peligrosos. Para lavarse los dientes se debe utilizar agua embotellada que no haya sido
desprecintada antes.

Salmonelosis: La salmonelosis es una infección bacteriana que generalmente afecta el tracto intestinal y
ocasionalmente, el torrente sanguíneo. Constituye una de las causas más comunes de gastroenteritis y
produce varios miles de casos cada año en el estado de Nueva York. La mayoría de los casos ocurren
durante los meses del verano y en casos específicos, pueden presentarse brotes epidémicos.

Tiempo de incubación: Los síntomas generalmente aparecen entre uno y tres días después de la exposición.

Alimentos implicados: huevos, carnes crudas y productos lácteos de queso no pasteurizados. Otras fuentes
de exposición pueden incluir el contacto con mascotas infectadas, como tortugas, pollos, perros y gatos.

Síntomas: Las personas expuestas a la salmonella pueden presentar diarrea grave o leve, fiebre y en
algunos casos, vómitos. Las infecciones del torrente sanguíneo pueden ser muy graves, especialmente en el
caso de niños muy pequeños o personas de edad avanzada.

Prevención a la contaminación: Envuelva las carnes frescas en bolsas de plástico en el mercado para evitar
que la sangre escurra sobre el resto de los alimentos.

Refrigere los alimentos de inmediato, minimice su estadía a temperatura ambiente.

Una vez utilice los mostradores para la preparación de alimentos y las tablas para cortar los mismos, es
necesario lavarlos de inmediato para así evitar la contaminación cruzada con otros alimentos.

Evite comer carnes crudas o poco cocinadas.

Asegúrese de que los alimentos alcancen la temperatura correcta de cocción interna, especialmente cuando
utilice hornos microondas. Evite comer huevos crudos o alimentos poco cocidos que contengan huevos
crudos. Evite utilizar leche cruda.

Fundamento de caldo Selenito

El caldo selenito es un medio de cultivo líquido selectivo. Fue diseñado por Leifson para el
enriquecimiento de muestras en donde se sospecha la presencia de bacterias enteropatógenos del género
Salmonella. La composición química que posee favorece la recuperación de estos microorganismos y a su
vez inhibe el crecimiento de otros. Es principalmente tóxico para la mayoría de las bacterias pertenecientes
a la Familia Enterobacteriáceas. Sin embargo, también permite la recuperación de cepas de Shigella y no
inhibe el crecimiento de Pseudomonas y Proteus.

Está compuesto por selenito hidrógeno de sodio anhidro, fosfato de sodio anhidro, peptonas y lactosa.
También existe una variante al que se adiciona cistina, de allí su nombre caldo selenito-cistina. Las
peptonas contenidas en el caldo sirven como nutrientes para el buen desarrollo de los microorganismos.
Las cepas de Salmonella utilizan las peptonas como fuente de nitrógeno, vitaminas y aminoácidos.

La lactosa es el carbohidrato fermentable, en tanto que el selenito de sodio es la sustancia inhibidora que
frena el crecimiento de bacterias Gram positivas y de la mayoría de bacterias presentes en la flora
intestinal, especialmente de la Familia Enterobacteriaceae. El fosfato de sodio es el amortiguador que
estabiliza el pH del medio. En el caso de la variante de caldo selenito que contiene L-cistina, este
compuesto adicional es un agente reductor que minimiza la toxicidad del selenito, aumentando la
recuperación de Salmonella.

Fundamento caldo Tetrationato

El caldo tetrationato o caldo TT es un medio de cultivo líquido selectivo para el enriquecimiento y

recuperación de cepas del género Salmonella. Fue creado por Müeller y más tarde modificado por
Kauffmann, por ello hay quienes le llaman caldo Müeller-Kauffmann. El medio original contenía proteosa
peptonas, carbonato de calcio y tiosulfato de sodio. Kauffmann le adicionó sales biliares y creó aparte otra
modalidad con verde brillante. Estas sustancias inhiben el crecimiento de coliformes, dejando el medio
libre para el desarrollo de las bacterias patógenas, en este caso Salmonella. Las peptonas presentes
corresponden a digeridos pancreático de caseína y digerido péptico de tejido animal. Estas proporcionan
la fuente de carbono, nitrógeno y nutrientes en general para el crecimiento bacteriano.

Por su parte, el tiosulfato de sodio reacciona con la solución iodurada para formar tetrationato. Este
inhibe el crecimiento de coliformes y favorece el desarrollo de bacterias que contienen la enzima
tetrationato reductasa, entre ellas se encuentra el género Salmonella, pero también Proteus. Las sales
biliares también actúan como sustancia inhibidora de la mayoría de las bacterias Gram positivas y
algunas Gram negativas (coliformes).

Fundamento caldo Rappaport

El caldo Rappaport es un medio selec8vo de enriquecimiento usado para la detección de Salmonella en

muestras de alimentos y muestras ambientales. El caldo Rappaport-Vassiliadis es un medio de
enriquecimiento selec8vo u8lizado después de un enriquecimiento preliminar de la muestra en un medio
de pre-enriquecimiento. Su uso se ha aprobado en el análisis de leche y productos lácteos, productos con
carne de vacuno cruda y alimentos con alto nivel de contaminación. La triptona es una fuente de carbono
y nitrógeno para los requisitos generales de crecimiento. El cloruro de magnesio eleva la presión osmó8ca
en el medio. El verde malaquita inhibe los organismos diferentes de Salmonella. El pH bajo del medio (5,1
± 0,2), junto a la presencia de verde malaquita y

alta concentración de cloruro de magnesio, facilitan el aislamiento de Salmonella spp.

Fundamento medio solido XLD

El agar XLD o agar Xilosa Lisina Desoxicolato es un medio de cultivo sólido selectivo y diferencial para
el aislamiento de enteropatógenos. Taylor diseñó la fórmula del agar XL (Xilosa, Lisina) con el fin de
mejorar el aislamiento del género Shigella. Observó que este género era inhibido en la mayoría de los
medios destinados para el aislamiento de enteropatógenos. Posteriormente, se le adicionó desoxicolato
sódico, tiosulfato de sodio y citrato amónico férrico para aumentar su selectividad. Esta fórmula ha
resultado ser útil tanto para el aislamiento de Shigella, como de Salmonella.

El agar XLD está compuesto por extracto de levadura, desoxicolato de sodio, xilosa, lisina, lactosa,
sacarosa, tiosulfato sódico, citrato férrico de amonio, cloruro sódico, rojo fenol y agar. En la mayoría de
los laboratorios de bacteriología se usa el dúo agar XLD y agar SS para el estudio de muestras fecales en
busca de Shigella y Salmonella.

Poder nutritivo

El agar XLD cuenta con el extracto de levadura, que sirve como fuente de nutrientes a los
microorganismos que se desarrollan en este agar. Además, la presencia de carbohidratos (xilosa, sacarosa
y lactosa) proporcionan energía a las bacterias que pueden fermentarlas.

Selectividad del medio

Como sustancia inhibidora presenta desoxicolato sódico; este impide el crecimiento de las bacterias Gram
positivas, dándole el carácter selectivo al medio.

Poder diferencial

Colonias típicas de Shigella

Como ya se ha mencionado, el agar XLD contiene xilosa; este carbohidrato es fermentado por todas las
bacterias que crecen en este medio a excepción del género Shigella. Esta es una de las características que le
brinda su carácter diferencial, ya que las colonias de Shigella se distinguen del resto por desarrollar
colonias rojas, mientras que las demás bacterias producen colonias de color amarillo.

Colonias típicas de Salmonella

El género Salmonella también fermenta la xilosa, generando inicialmente colonias amarillas. Sin embargo,
tras agotar al carbohidrato xilosa, ataca a la lisina por su enzima lisina descarboxilasa. La
descarboxilación de la lisina genera álcalis que hacen virar el color de la colonia y al medio circundante a
rojo original. Este comportamiento solo es realizado por Salmonella, ya que los coliformes que
descarboxilan la lisina no logran alcalinizar el medio. Esto es debido a que los coliformes también
fermentan la lactosa y la sacarosa presente; por tanto, la producción de ácidos es muy alta, quedando la
colonia amarilla en estas bacterias. Cabe destacar que el género Salmonella no fermenta la sacarosa, ni la
lactosa.

Producción de H2S

El agar XLD también permite detectar a las especies de Salmonella productoras de H2S; para ello cuenta
con la fuente de sulfuro representado por el tiosulfato de sodio y un revelador de la reacción que es el
citrato férrico de amonio.

Fundamento medio solido SS

BD Salmonella Shigella Agar (agar SS) es un medio selectivo y de diferenciación para el aislamiento de
bacilos entéricos patógenos, en especial los pertenecientes al género Salmonella, a partir de muestras
clínicas. El agar Salmonella-Shigella es una modificación del agar citrato desoxicolato descrito por
Leifson1. Se le considera un medio moderadamente selectivo según el nivel de inhibición de los
microorganismos gram positivos y Enterobacteriaceae diferentes de Salmonella y Shigella, que inhibe por
contenido de sales biliares, verde brillante y citratos.

En BD Salmonella Shigella Agar, la diferenciación de los organismos entéricos se logra mediante la

incorporación de lactosa en el medio. Los organismos que fermentan lactosa producen ácido que, en
presencia del indicador rojo neutro, propicia la formación de colonias de color rojo. Los organismos no
fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. Este último grupo incluye la mayoría de los
patógenos intestinales, incluidas Salmonella y Shigella. El tiosulfato sódico y el citrato férrico permiten la
detección de producción de ácido sulfhídrico, como lo demuestran las colonias con centros de color negro.
Este medio se utiliza para el aislamiento primario de Salmonella a partir de muestras fecales humanas.
Dado que existen medios más eficaces para el aislamiento de Shigella, no debe utilizarse para el
aislamiento de este organismo.

Fundamento Agar TSI

El agar TSI o agar hierro triple azúcar es un medio de cultivo sólido que sirve como prueba bioquímica
para orientar la identificación inicial de los bacilos Gram negativos. Se fundamenta en evidenciar la
fermentación de los azúcares presentes, y la producción de sulfuro de hidrógeno y gas.

Cada uno de los compuestos cumple una función dentro del medio.

Cloruro de sodio y agar

El cloruro de sodio es necesario para mantener el equilibrio osmótico del medio. En tanto que el agar le da
la consistencia sólida.

Indicador de pH (rojo de fenol)

El pH del medio preparado está equilibrado a 7,3 y el indicador de pH (rojo de fenol) vira a amarillo por
debajo de 6,8. Esto quiere decir que pequeñas cantidades de ácidos producidos por la fermentación de los
azúcares harán virar el medio de color rojo-naranja a amarillo. Si no ocurre fermentación habrá
alcalinización del medio por el uso de las peptonas, virando de rojo-naranja a rojo fuerte.
Derivados proteicos (extracto de levadura, extracto de carne, peptona y proteosa peptona)

Cuando las bacterias metabolizan las proteínas presentes en el agar TSI, se producen aminas que
alcalinizan el medio (principalmente a nivel del bisel), debido a que la reacción necesita oxígeno. Las
aminas hacen virar el bisel a rojo fuerte. Pero esto dependerá de la capacidad que tengan las bacterias de
fermentar o no los carbohidratos.

Fermentación de carbohidratos (glucosa, lactosa y sacarosa)

El estudio de la fermentación de azúcares puede dar varias imágenes y cada una se interpreta de manera
diferente. La interpretación de la prueba divide a los microorganismos en 3 categorías: no fermentadores
de glucosa, no fermentadores de lactosa y fermentadores de lactosa/sacarosa.

Fundamento Agar Citrato

El agar Citrato de Simmons es un medio sólido utilizado como prueba bioquímica de identificación de
microorganismos, especialmente de bacilos Gram negativos. El medio original fue creado por Koser en
1923. Como puede verse, la única fuente de carbono del medio es el citrato, y de nitrógeno es el fosfato de
amonio, omitiéndose las proteínas y los carbohidratos como fuente de estos elementos, comúnmente están
presentes en otros medios.

Por tanto, la bacteria inoculada en ese medio solo puede reproducirse si es capaz de tomar el carbono del
citrato. La prueba era positiva si había turbidez en el medio, sin embargo tenía el inconveniente de que
podía ocurrir turbidez no específica.

Algunas bacterias tienen la capacidad de sobrevivir en ausencia de fermentación o producción de ácido

láctico, necesitando conseguir energía a través de la utilización de otros sustratos. En esta prueba la única
fuente de carbono ofrecida es el citrato. Las bacterias que son capaces de sobrevivir bajo estas condiciones
metabolizan el citrato de forma rápida por una vía alterna a la tradicional, utilizando el ciclo del ácido
tricarboxílico o el ciclo de fermentación del citrato. El catabolismo del citrato por parte de las bacterias
comprende un mecanismo enzimático sin la intervención de la coenzima A. Esta enzima se conoce con el
nombre de citricasa (citrato oxalacetato-liasa) o citrato desmolasa. La reacción requiere la presencia de un
catión bivalente, que en ese caso es suministrado por el magnesio. La reacción genera oxaloacetato y
piruvato, que luego dan origen a ácidos orgánicos en medio de un pH alcalino formado por la utilización
de la fuente de nitrógeno. Estos ácidos orgánicos son usados como fuente de carbono generando
carbonatos y bicarbonatos, alcalinizando aun más el medio.
Fundamento Agar SIM

El medio SIM es un agar semisólido y diferencial, especialmente diseñado para ayudar a la identificación
de algunas bacterias, principalmente de la familia Enterobacteriaceae. Está compuesto por tripteína,
peptona, sulfato de hierro, sulfato de amonio, tiosulfato de sodio y agar. Este medio permite la ejecución
de tres importantes pruebas: la producción de sulfuro de hidrógeno (H2S), la formación de indol y la
motilidad, de allí proviene el acrónimo SIM. Por su gran utilidad no puede faltar en un laboratorio de
bacteriología.

Es un medio de cultivo que se considera diferencial, debido a que su uso logra distinguir entre los
microorganismos capaces de producir sulfuro de hidrógeno de los que no lo hacen; también destaca
aquellas que forman indol a partir del triptófano de las que no lo forman, y finalmente diferencia las
bacterias mótiles de las inmóviles.

Fuente de energía

Como todo medio de cultivo, posee elementos que brindan los nutrientes necesarios para que puedan
desarrollarse los microorganismos no exigentes. Estos elementos están representados por las peptonas y la
tripteína. El desarrollo del microorganismo en el medio es esencial para poder obsepresencia o ausencia de
las características que evalúa este medio.

Producción de sulfuro de hidrógeno

La letra S del acrónimo SIM hace referencia a la producción de sulfuro de hidrógeno (H2S). Las bacterias
capaces de formar sulfuro de hidrógeno tomarán el azufre del tiosulfato de sodio.

Una vez formado el H2S -gas incoloro-, este reacciona con la sal de hierro presente en el medio, formando
sulfuro ferroso, claramente visible (precipitado negro). Las bacterias que no forman H2S, dejan el medio
del color original (beige). La presencia del precipitado negro, puede obstaculizar la interpretación de la
motilidad. Sin embargo, se sabe que la mayoría de las enterobacterias productoras de H2S son motilidad
positiva, tales como Salmonella, Proteus y Citrobacter. Además, el precipitado negro que abarca casi la
totalidad del medio, sugiere motilidad positiva.

Formación de indol

La segunda letra del acrónimo SIM es la “I”, la cual representa la formación de indol. En este sentido, la
tripteína, además de ser una fuente de nutriente, cumple otra función fundamental. Esta peptona es rica
en un aminoácido llamado triptófano, por tanto, puede evidenciar a las bacterias que producen
triptofanasa. Esta enzima es la encargada de clivar al aminoácido triptófano, con la consecuente
formación de indol (sustancia incolora), ácido pirúvico y amonio. Es por ello que, para evidenciar esta
reacción es necesario agregar una sustancia reveladora (reactivo de Ehrlich o reactivo de Kovac´s).
Cualquiera de los dos reacciona con el indol, formando una sustancia de color rojo-fucsia en forma de
anillo en la superficie del agar. Si el anillo color fucsia aparece la prueba de indol se interpreta como
positiva.

Fundamento Agar LIA

El agar LIA (Lisina Hierro) es una prueba bioquímica utilizada para la identificación de bacterias de la
familia Enterobacteriaceae. Este medio fue creado por Edwards y Fife, basados en la fórmula de Falkow.
Originalmente esta prueba era un caldo que contenía peptonas, extracto de levadura, glucosa, L-lisina,
púrpura de bromocresol y agua destilada. Edwards y Fife le agregaron agar-agar, citrato férrico de
amonio y tiosulfato sódico.

Peptonas y extracto de levadura

Como la mayoría de los medios de cultivos, el agar hierro lisina contiene componentes que proporcionan
la fuente de nutrientes necesarias para el crecimiento bacteriano. Estos componentes están representados
por las peptonas y el extracto de levadura.

Glucosa

Así mismo, este agar contiene como carbohidrato fermentable la glucosa. Se sabe que todas las bacterias
de la familia Enterobacteriaceae fermentan la glucosa.

Este paso es crucial, porque se encargará de acidificar el medio, condición indispensable para que la
enzima lisina descarboxilasa -si está presente- actúe sobre su sustrato. En algunos géneros bacterianos se
puede observar la producción de gas debido a la fermentación de la glucosa. El gas se evidencia cuando
ocurre un desplazamiento del agar en el tubo, quedando un espacio vacío en el fondo del mismo, o por
fractura del medio en dos o más porciones.

L-lisina

Una vez descarboxilada la lisina, se forma una diamina (cadaverina) y anhídrido carbónico.

La descarboxilación se da en presencia de la coenzima fosfato de piridoxal. Esta reacción es irreversible.

Indicador de pH (púrpura de bromocresol)

Todos los cambios de pH ocurridos en el medio por las diversas reacciones, son detectados por el
indicador de pH púrpura de bromocresol.

Fundamento CALDO UREA

El caldo urea es un medio de cultivo líquido, utilizado para evidenciar la presencia de la enzima ureasa en
ciertos microorganismos. La ureasa es una enzima microbiana que se produce de manera constitutiva, es
decir, es sintetizada independientemente de estar o no presente el sustrato sobre el que actúa. La función
de la ureasa está relacionada con la descomposición de los compuestos orgánicos. No todos los
microorganismos son capaces de sintetizar esta enzima, por tanto su determinación en el laboratorio
permite identificar ciertas cepas bacterianas e inclusive diferenciar entre especies de un mismo género.
La enzima ureasa hidroliza la urea para formar anhídrido carbónico, agua y dos moléculas de amoníaco.
Estos compuestos reaccionan para formar el producto final llamado carbonato de amonio.