Universidad de

UNIVERSIDAD DE CORDOBA Córdoba,

FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD comprometida
PROGRAMA BACTERIOLOGIA con el desarrollo
regional

NIT 891080031-3

Asignatura: BACTERIOLOGÍA II
Código: 504129
Horas semanales: 3
Componente: Teórico-Práctico
Ubicación: III Semestre
Requisitos: Introducción a Microbiología, Biología, Bacteriología
Docentes: Margarita Díaz Durango- Renata Parodi Rodríguez

GUÍA Nº4
IDENTIFICACIÓN DEL GÉNERO Vibrio

INTRODUCCIÓN
El segundo gran grupo de bacilos gramnegativos anaerobios facultativos y
fermentadores son los géneros Vibrio y Aeromonas. Son bacilos curvos Gram
negativos, anaerobios facultativos con flagelos polares, fermentadores. El
género posee 76 especies de bacilos curvados. Una serie de especies se
asocian a enfermedad en personas, pero tres especies son patógenos de
especial importancia para el ser humano: V. cholerae, V. parahaemolyticus, y
V. vulnificus. Crecen entre 14 y 40°C y son especies halofílicas. El V. cholerae
se subdivide en 140 serogrupos, siendo las relacionadas con cólera los
serogrupos O1 y O139 (figura 1). Los microorganismos se encuentran en ríos y
mares de todo el mundo. La infección por este microorganismo se asocia con
el consumo de crustáceos, alimentos y aguas contaminadas con la bacteria.

Figura 1. Clasificación de los serogrupos de V. cholerae en los grupos Epidémico y No-Epidémico.

Las enfermedades relacionadas con este género son:

 Cólera: se caracteriza por la pérdida de líquidos y electrólitos,

conduciendo al paciente a una acidosis metabólica, hipokalemia, shock
hipovolémico, arritmias cardíacas, fallo renal y muerte.

 Gastroenteritis
 Infección de heridas (V. vulnificus)
 Septicemia (V. vulnificus)

Este género se observa rara vez en las muestras de heces teñidas con Gram,
estas deben procesarse inmediatamente recogidas y cultivarse en los medios
adecuados, en caso de retraso debe ser transportada en el medio de transporte
Cary- Blair y refrigerarse. Los Vibrios crecen en la mayoría de los medios
empleados en el Laboratorio para cultivo de heces, pero es aconsejable utilizar
medios selectivos como agar TCBS y realizar un pre-enriquecimiento en Agua
Peptonada alcalina (pH de 8,6).

Requerimientos ambientales:

El rango de temperatura de crecimiento están entre 16 y 42 °C con un óptimo

de 37°C con un rango de PH de 6.8 a 10.2 y un pH óptimo de 7.0 a 8.0

Epidemiología:

Se le ha encontrado en ambientes marinos en regiones templadas o tropicales,

en lagos y ríos, en moluscos y crustáceos, en pájaros y herbívoros a un lejos
de las costas marinas. El número de bacterias de Vibrio cholerae, disminuye a
medida que la temperatura del agua baja por debajo de 20 °C la enfermedad
humana resulta de la ingestión de agua contaminada o del consumo de
alimentos contaminados

Diagnóstico:

La muestra a estudiar en los pacientes debe ser materia fecal y junto a un

antecedente epidemiológico debe investigarse Vibrio cholerae. Se puede
realizar además el análisis microbiológico de los alimentos y aguas
consumidas. Se realiza un aislamiento de las cepas sospechosas y se le
realizan las pruebas bioquímicas correspondientes confirmando la identificación
con pruebas serológicas.

Colección de muestras:

La muestra de materia fecal para estudios de V. cholerae deben ser recogidas

inmediatamente se inicie la sintomatología y antes del comienzo de cualquier
tipo de terapia. Se debe colectar la muestra en un recipiente estéril, cerrado o
utilizarse escobillón rectal (fase aguda).
OBJETIVOS

 Conocer las características de aislamiento, crecimiento e identificación

de este género bacteriano en el laboratorio de Microbiología.
 Interpretar los resultados obtenidos y realizar un informe escrito.

COMPETENCIAS

 Adquirir conocimientos microbiológicos básicos sobre el crecimiento y

metabolismo del género Vibrio.
 Conocer y aplicar los fundamentos bioquímicos de los Vibrios de
importancia clínica para su identificación en el laboratorio.
 Adquirir destrezas para el desarrollo de técnicas de aislamiento e
identificación de vibrios de importancia clínica.

MATERIALES

 Agar TCBS
 Agar MacConkey
 Agar gelatina
 Mechas para toma de muestras
 Desoxicolato de Sodio al 0.5%
 Colorantes para Gram
 Tirillas de oxidasa
 Asas bacteriológicas.
 Agua peptonada alcalina ph 8,6
 Escobillones estériles
 Papel kraf
 Descartadores
 Microscopios
 Aceite de inmersión
 Pruebas bioquímicas
 Reveladores
 Pipetas de Pasteur
Prueba de la cuerda para Vibrio (Desoxicolato de sodio al 0.5%)

Procedimiento

 Colocar 1 gota de solución de Desoxicolato de sodio al 0.5% sobre

una lámina portaobjetos.
 Tomar una asada de la colonia y mezclarla con el Desoxicolato de
sodio
 Homogenizar bien
 Observan la formación de una suspensión viscosa que forma una
cuerda cuando es levantada en el aire con el asa (Véase la siguiente
figura).
 PROCEDIMIENTO

Tomar la muestra (previa inmersión de las mechas en las fuentes de aguas escogidas).

Realizar el pre-enriquecimiento selectivo en Agua Peptonada alcalina (APW) pH 8,6 x 6 – 8

horas a 37°C en atmósfera de aerobiosis.

Su cultivar en los medios de Agar TCBS y MacConkey

(Agotamiento quemando asa) Incubar a 37°C por 24 a 48 horas en aerobiosis

Revisar los medios y escoger las colonias sospechosas de Vibrio en TCBS

(Colonias amarillas)

Resembrar en Agar nutritivo alcalino (aislamiento) (37°C x 24-48 horas)

1. Gram: (Bacilos curvos

Gram negativos) Pruebas serológicas
2. Prueba de la oxidasa
3. Prueba de la cuerda

Identificación bioquímica

Figura 2. Algoritmo de identificación del género Vibrio

Nota: se debe realizar otras pruebas bioquímicas y serológicas para confirmar Especie y Serogrupo.
PRE- LABORATORIO

1-¿Cuáles son estas pruebas bioquímicas y serológicas para confirmar la

especie y serogrupo?
2-¿Cuáles son las entidades de Salud Pública encargadas del control de
esta infección?
 ETA: Enfermedad Transmitida por Alimentos
 Sivigila: Sistema Nacional de Vigilancia en Salud Pública
 INS: Instituto Nacional de Salud.
 LNR: Laboratorio Nacional de Referencia
 LSP: Laboratorio de Salud pública
 LSPD: Laboratorio de Salud Pública Departamental o Distrital
 OMS: Organización Mundial de la Salud

3-¿Porque se realiza un pre-enriquecimiento selectivo en agua peptonada

alcalina y qué otros caldo de enriquecimiento se utilizan para el
aislamiento de éste género?

 Caldo de enriquecimiento - agua peptonada alcalina pH 8,4: Es un

caldo de enriquecimiento e inhibición para las muestras de materia fecal.
Es utilizado en el procesamiento de muestras sospechosas de Vibrio
cholerae por su pH alcalino que inhibe la flora acompañante
favoreciendo su recuperación. Es útil cuando la cantidad de
microorganismos presentes en la muestra es pequeña debido a la
antibióticoterapia o en caso de portadores sanos.
 Otro concepto del porqué; La viabilidad de Vibrio spp. se mantiene
intacta a pH alcalino y el uso de agua peptonada alcalina ha sido
recomendado para incrementar la recuperación de Vibrio spp. de
materia fecal y de otras muestras. El medio contiene peptona de carne,
cloruro de sodio y el pH final es de 8.6 ± 0.2 a25ºC.Se incuba 6 a 8
horas y se siembra en los medios de cultivo.

4-¿Cuál es el fundamento de la prueba de la cuerda?

 Prueba de la cuerda: Esta prueba se realiza para diferenciar el género

Vibrio de otros géneros como Plesiomonas y Aeromonas. La actividad
lítica del desoxicalato de sodio sobre la pared de los Vibrios favorece la
liberación del ADN que al contacto con el desoxicalato de sodio forma
una suspensión adherente o mucoide.
5-Investigue otros medios de cultivo utilizados para el aislamiento del
género Vibrio, incluyendo el agar TCBS.

 Medio de transporte Cary-Blair: Este medio es utilizado para el

transporte de muestras de materia fecal o de aislamientos, de
microorganismos Gram negativos entéricos. El medio de transporte
Cary-Blair es adecuado para el transporte de este tipo de muestra,
debido a que sus escasos nutrientes y el pH de 8,4 mantienen al
microorganismo viable y evita su replicación.

 Agar TCBS: Es un medio altamente selectivo para Vibrio spp., por su

contenido de sales biliares, inhibe el crecimiento de las bacterias Gram
positivas y otros Gram negativos. Además contiene sucrosa (sacarosa)
como carbohidrato fermentable debido a que la mayoría de integrantes
del género Vibrio fermenta este azúcar. El pH alcalino del medio
favorece el aislamiento de V. cholerae. El azul de timol y de bromotimol
están incluidos como indicadores de pH.

 Agar BHI: Son medios enriquecidos que contiene infusión altamente

nutritiva, para el aislamiento de microorganismos pocos exigentes; por
no ser selectivo, está libre de inhibidores lo que facilita su uso para
pruebas de serotipificación, recolección de cepas, etc.

 Agar nutritivo al 0,5% de NaCl: Es un medio para el cultivo de

microorganismos no fastidiosos que se usa para muestras de aguas y
alimentos, el medio contiene extracto de carne que aporta carbohidratos,
vitaminas, compuestos de nitrógeno orgánico y sales, también contiene
peptona que es fuente de nitrógeno. La adición de 0.5% de NaCl es
necesaria para potenciar el crecimiento de Vibrio cholerae por su
naturaleza halófila.

6- Investigue los fundamentos de la pruebas bioquímicas: Kligler, ADH

(arginina dihidrolasa), Test de Gelatinasa, Hidrólisis de Almidón,
reducción de nitratos a nitritos y descarboxilación de la Ornitina.

Kligler Fundamento

En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes

adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los
hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato
necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio,
es la fuente de iones Fe3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y
producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de
pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente
solidificante.

Por fermentación de azúcares se producen ácidos que se detectan por medio

del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El
tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con
una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.

INFORMACION EXTRA

Campylobacter Agar (Butzler), el extracto de carne y la peptona
proporcionan los nutrientes, mientras que el cloruro sódico mantiene el
equilibrio osmótico. La novobiocina y la colistina inhiben las bacterias
entéricas gram negativas, la cefazolina y la bacitracina inhiben las
bacterias gram positivas. La cicloheximida inhibe numerosos hongos. La
sangre de caballo proporciona nutrientes y, al suministrar catalasa y
superóxido dismutasa, destruye los radicales y peróxidos que se
acumulan durante la exposición al aire.

 Campylobacter Agar (Skirrow), la infusión de corazón, peptona de

caseína y extracto de levadura proporcionan nutrientes, mientras que el
cloruro sódico mantiene el equilibrio osmótico. La vancomicina inhibe los
organismos gram positivos, mientras que la trimetoprima y la polimixina
B inhiben numerosos organismos gram negativos. La sangre lisada de
caballo proporciona nutrientes y hemo para catalasa bacteriana.
ADH:
Descarboxilacion de la ornitina:

El extracto de levadura proporciona nitrógeno, minerales, aminoácidos y vitaminas

esenciales para el crecimiento, en particular del grupo B. La glucosa es el carbohidrato
fermentable que proporciona carbono y energía. Se agrega L-Ornitina para probar la
presencia de la enzima ornitina descarboxilasa.

Si los organismos poseen dicha enzima, se activará en un ambiente ácido creado por
la fermentación inicial de la glucosa. Una vez que el aminoácido se descarboxila, se
produce la diamina putrescina. El resultado es una alcalinización del medio, que lo
convierte en púrpura o violeta. Los organismos sin la enzima mantendrán un ambiente
ácido debido a la fermentación, lo que dará como resultado un color amarillo en el
medio. El bromocresol púrpura es un indicador de pH para indicar la actividad de la
descarboxilasa.

POST-LABORATORIO

1. Investigue las reacciones bioquímicas que se utilizan en la identificación de

Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus y V. vulnificus.
 2. Elabore un caso clínico donde esté implicado el microorganismo en estudio.

3. ¿Cuál es la importancia de una buena identificación de este género en el área

de Microbiología Clínica?
Este género suele ser confundido con otros no sólo por su estructura sino también por los
síntomas que presentan en los cuadros clínicos, este posee una patología que es considerable y
por lo tanto es de interés clínico su estudio y oportuna identificación en las enfermerdades que
causa y evitar sus complicaciones.

Bibliografías
https://www.ins.gov.co/buscador-eventos/Informacin%20de%20laboratorio/Gu%C3%ADa%20para%20la
%20vigilancia%20por%20laboratorio%20de%20Vibrio%20cholerae.pdf

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS (disponibles en la biblioteca de la Universidad de Córdoba)

 Murray Patrick. 6da Edición. 2009. Harcourt Brace. Microbiología Médica.

 T Stuart Walter. Mac Graw Hill. México, 2000. Editores S.A Microbiología
 El laboratorio en el diagnóstico clínico. Jhon Bernard Henry. Editorial Marban. 20° edición 2005
 B.A Freeman. Microbiología Burrows. Interamericana Mac Graw Hill. México 1997.
 Diagnóstico Microbiológico. Bailey y Scott. Editorial Panamericana.