Ao de la promocin de la Industria Responsable y del Compromiso

Climtico

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS
BIOLGICAS

Informe 1: Familia Enterobacteriaceae

Integrantes:
Garca Lpez Ftima Azucena.
Huamn Pretell Joisy.
Curso:
Microbiologa de Alimentos.
Docente:
Blgo. Jaime Fernndez Ponce.

Piura, 07 de octubre del 2014.

I.

INTRODUCCIN
Las bacterias que conforman la familia Enterobacteriaceae estn
constituidas por bacilos Gram negativos no esporulados, que fermentan y
oxidan la glucosa, carecen de indo fenol oxidasa, reducen los nitratos a
nitritos y se hallan ampliamente distribuidos por la naturaleza; muchas
de sus especies tienen como hbitat el intestino del hombre y los
animales, mientras que otras pueden parasitar a plantas o tener vida
saprfita. Pueden ser mviles por medio de flagelos pertricos, o pueden
carecer de estos y ser inmviles. Las especies que se encuentran en ella
son de las que ms frecuentemente se identifican en los laboratorios de
microbiologa clnica como causa de infecciones tanto comunitarias como
nosocomiales. (Farmer, 1991)
Taxonmicamente la familia esta dividida en tribus, las tribus en
gneros, los gneros en especies. Algunas especies expresan ser
variedades, se diferencian por ser tipificacin. Los gneros ms
importantes son: Escherichia, Shigella, Salmonella, Klebsiella, Serratia,
Enterobacter, Proteus y Yersinia, entre otras. (Farmer, 1991)
Los gneros que conforman esta familia son Budvica, Buttiauxella,
Citrobacter, enterobacter, Escherichia, Shiguella, Hafnia, Klebsiella,
Kluyvera, Proteus, Salmonella, Serratia, Yersinia y grupos entricos.
Cada uno de estos grupos est conformado por una o ms especies
bacterianas con caractersticas fenotpicas y genotpicas muy similares,
que a su vez estn ampliamente distribuidas en la naturaleza, en el agua,
en la tierra y en el intestino del hombre y los animales, as como en sus
superficies expuestas al medio. No todos los gneros y especies que
integran esta gran y compleja familia se hallan frecuente causa de
enfermedad; de ellos, alrededor de 25 especies han sido confirmadas
como presentes en patologa humana. (Edward, 1972)
Estas bacterias pueden estar presentes en los alimentos y sus
ingredientes a niveles tan altos como 100,000,000 cfu/g. El nivel de
Enterobacterias en los alimentos es un buen indicador de la calidad
microbiana del alimento y por lo tanto ofrece informacin importante
respecto a la productividad del animal y la seguridad de los alimentos. En
los animales, las enterobacterias pueden colonizar el tracto

gastrointestinal y causar enfermedades como la Coliobacilosis y la

Salmonelosis. Con frecuencia, sta bacteria puede causar enfermedades
subclnicas, siendo el indicador mas obvio la reduccin de los ndices de
produccin. ((Edward, 1972)
El objetivo de la prctica fue determinar diferentes gneros de
bacterias entricas presentes en alimentos, a travs de pruebas
bioqumicas.
II.

MATERIAL Y MTODOS
Se dispuso de una cepa de microorganismos an no determinados, el
trabajo de las pruebas bioqumicas se realiz de la siguiente manera:
2.1. Descarboxilacin de la Lisina (LIA)
En tubos con agar LIA se inocularon las cepas tanto en picadura como en
superficie, se incubaron a 35C por 24-48 horas. La aparicin de un color
prpura intenso se determinar como una prueba positiva y de un color
amarillo como negativo.
2.2. Agar citrato de Simons
En tubos de ensayo con agar Citrato de Simons se inocularon las cepas
en superficie y se dej incubar a 37C/24-48h. El cambio de color, del
verde original a un color azul indica la utilizacin de del citrato como
nica fuente de carbono y la prueba ser positiva.
2.3. Hidrlisis de rea
Se inocul las cepas, en tubos de ensayo que contenan caldo rea, se
incubo a 37C/24h. La aparicin de un color rojo grosella se considera la
prueba como positiva.
2.4. Motilidad
En tubos con agar nutritivo, se sembr las cepas por picadura; se incubo
a 37C/24 h. la aparicin de una nube alrededor de la picadura se
considera como una prueba positiva.
2.5. Fermentacin de glucosa-lactosa-H2S

En tubos con agar TSI se sembr tanto en picadura como en superficie

los inculos. Se incub a 37C/24h y la lectura se llev de la siguiente
manera: El viraje a un color amarillo en la base del tubo se considera
como positivo para glucosa y en la superficie positivo para lactosa y
sacarosa.
2.6. Reduccin de Nitratos
Se inocularon las cepas en tubos con caldo nitrato y se incubaron a
30C/24h, luego se le agreg el reactivo de Gries. La aparicin de un
color rojo o rozado indica la presencia de nitritos y se considera la
prueba como positiva.
2.7. Formacin de Indol
Se sembr la cepa en tubos con caldo Triptonado, y se incubo a
37C/24h. Luego se adicion el reactivo de Kovacs, la formacin de un
anillo rojo se considera la prueba como positiva.
2.8. Prueba del rojo de Metilo y Vogues Proskauer
Se inoculo las cepas en tubos con lado MR-VP y se incubo a 35C/3-5 da.
Se separ en dos tubos cada ensayo, al primero se le agreg tres gotas
de rojo de metilo al 0.04%, se agito y si aparece una color rojo la prueba
se considera como positiva. Al segundo tubo (1ml) se le agreg 06ml de
a-naftol (5%) y 0.2 ml de solucin de KOH (40%), se dej reposar y la
aparicin de un color rosado a carmes, se considera como prueba
positiva.
2.9. Prueba de termotolerancia de Eijkman
Se inocul las cepas en tubos con caldo Triptonado y se dej incubar a
44C/24h, se le adicion el reactivo de Kovacs y la formacin de un anillo
rojo, se considera como una prueba positiva. Adems se hicieron pruebas
como la reaccin de la Oxidasa y la prueba de la Catalasa.

III. RESULTADOS

RESULTADOS
PRUEBA BIOQUMICA

MEDIO DE CULTIVO

Tincin Gram

(-)

Fermentacin de glucosa

TSI

(+)

LIA

(+)

Prueba de ureasa

Caldo urea

(+)

Motilidad

SIM

(-)

Reaccin de nitrato

KNO3

(+)

Degradacin de Lisina
(aminocido)

Citrato de Simons

Agar citrato de
Simons

Enterobacteriaceae.

(+)

Prueba de Rojo de Metilo (RM)

Caldo MR - VP

(-)

Prueba Vogues Proskauer

Caldo MR - VP

(+)

IV.

DISCUSIN

Las enterobactericeas son bacilos Gram-negativos pequeos, anaerobios

facultativos, son fermetadores de glucosa, oxidasa negativos, catalasa
positivos y con flagelacin peritrica (cuando estn flagelados). (Madigan,
2004). Las caractersticas sealadas por el autor sobre la familia
enterobacteriaceae se pudo comprobar al realizar la prctica observando los
resultados obtenidos coincidiendo con los datos mencionados.
En la prueba del TSI, luego de entre 18 y 24 horas de incubacin, se
observa las siguientes caractersticas: formacin de un precipitado negro,
superficie del agar de color rojizo y con colonias bacterianas, y ausencia de
produccin de gases. (Madigan, 2004). El precipitado negro se debe a la
formacin cido sulfhdrico (H2S) como producto del metabolismo, debido a
que el mismo reacciona con el hierro del medio formando SFe (precipitado
negro).

E. coli es la especie tipo del gnero Escherichia. Incluye grmenes

generalmente mviles, que producen cido y gas a partir de la glucosa, la
arabinosa, y habitualmente de la lactosa y otros azcares. Producen reaccin
positiva de rojo de metilo, y negativa de Vogues-Proskauer. Son inhibidos por
KCN y capaces de crecer en medio con citrato como nica fuente de carbono
y energa, pero s en caldo acetato. Son H 2S, ureasa y fenilalanina negativos,
pero en general son indol positivos y decarboxilan la lisina. (Karmali,1989).

En la prctica se determin que la cepa trabajada en el grupo B era de E. coli

ya que de acuerdo a las caractersticas presentadas en la bibliografa
coinciden con los datos obtenidos en cada prueba bioqumica realizada.
Excepto por la prueba de Ureasa en la que no se observa el cambio de color
rosa a amarillo, si no a color grosella.
Caractersticas generales delgnero Klebsiella: inmviles, miden 0.5 a
2.0 m x 2 a 4manaerobios y aerobios facultativos, patgeno humano y
capsulados, que producen cido y gas a partir de la glucosa, la arabinosa, y
habitualmente de la lactosa y otros azcares. Producen reaccin negativa de
rojo de metilo, y positiva de Vogues-Proskauer. Son inhibidos por KCN y
capaces de crecer en medio con citrato como nica fuente de carbono y
energa, pero s en caldo acetato. Son H 2S y fenilalanina negativos y ureasa
positiva, pero en general son indol positivos y decarboxilan la lisina.
(Karmali,1989). En la prctica se determin que la cepa trabajada en el
grupo A era del gnero Klebsiella sp., ya que de acuerdo a las caractersticas
presentadas en la bibliografa coinciden con los datos obtenidos en cada
prueba bioqumica realizada.
Como integrante de la flora normal del hombre y de muchos animales, se
lo considera un germen indicador de contaminacin fecal cuando est
presente en el ambiente, agua y alimentos, junto con otros similares
agrupados bajo la denominacin de "bacterias coliformes". Estas son
enterobacterias que pertenecen al gnero Escherichia y a otros relacionados
como Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter o Serratia, y que tienen en comn
la capacidad de fermentar la lactosa en un lapso no mayor de 48 horas, con
produccin de cido y gas. Son grmenes de gran ubicuidad y capacidad de
proliferacin, y a la vez de fcil cultivo e identificacin, y por lo tanto muy
tiles como indicadores de contaminacin, pero no son enteropatgenos como
grupo (como tampoco lo es E.coli), y por lo tanto su presencia en alimentos,
ambiente o pacientes no certifica la etiologa de una infeccin intestinal o un
brote de ETA. Es necesario hilar ms fino (Natara y Kaper, 1998). Otra de
las pruebas que fue positiva fue la fermentacin de glucosa y lactosa,
presentando un viraje completo de naranja a amarillo, ayuda a determinar si
presentan enzimas que degraden el sustrato.

V.

CONCLUSIONES
Se

diferenciaron

dos

tipos

de

cepas

de

la

familia

Enterobacteriaceae, las cepas Klebsiella sp., y Escherichia coli ,

determinando que lo comn para la familia Enterobacteriaceae, que
pertenezcan al tipo de bacterias Gram negativas, que fermenten la
lactosa, degrade la Lisina, y tenga reaccin oxidasa negativa.
En cuanto a las diferencias de estas dos cepas se encontr que
Klebsiella sp., en la prueba de la ureasa es positiva, mientras que E. coli
debera ser negativa por la bibliografa encontrada, pero result
tambin positiva. En la prueba de motilidad, Klebsiella es un gnero de
bacterias inmviles, mientras que E. coli es mvil. Y en la prueba MR-VP
en el gnero Klebsiella result negativo para MR y positivo para VP,
mientras que en E. coli result positivo para MR y negativo para VP.

VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Ewing

WH.

Edwards

Enterobacteriaceae.

and

Ewings.

1972.

Identification

of

3th. Edition, Elsevier.

Farmer. 1991. Enterobacteriaceae. Manual of Clinical Microbiology. 5 th

edic Washington
Madigan M.T., Martinko J.M. y Parker J. (2004) Brock: Biologa de los
Microorganismos 10ma Edicin ISBN:84-205-3679-2
Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003) Microbiologa 4ta Edicin
Karmali MA. 1989. Infection by verotoxin-producing E. coli. Clin.
Microbiol. Rev. 2: 15-38.
Nataro JP, Kaper JB. 1998. Diarrheagenic Escherichia coli. Clin.
Microbiol. Rev. 11: 142- 201.
(1) Enterobacterias Disponible en:

http://es.scribd.com/doc/6467706/ENTEROBACTERIAS
(2) Las enterobacterias en los alimentos. 2009. Disponible en:
http://anitox.us/technical_information/latin_america/technical_pages/
A6%20SP%20Enterobacterias%20en%20los%20alimentos.pdf