MICROBIOLOGIA

UNIVERSIDAD NACIONAL

SAN LUIS GONZAGA DE ICA

 FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
“Dr. DANIEL ALCIDES CARRIÓN”

UNIVERSIDAD NACIONAL SAN LUIS GONZAGA DE ICA

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA “Dr. DANIEL ALCIDES CARRIÓN”

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

MICROBIOLOGIA
PRACTICA N.º 15

- GARAYAR TAMBRA, BRYAN DAVID

- GARCIA VARGAS, AMMY NICOLL AMPARO

- GAVILAN GAMBOA, JEYMI JHOAN

- GOMEZ AROTOMA, JEAN PIERRE

- GONZALES AGUILAR, MARIA LUISA JANETH

- GONZALES MESIAS, ANEL VALERIA

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“Dr. DANIEL ALCIDES CARRIÓN”

PRACTICA N. º 15

IDENTIFICACION Y AISLAMIENTO DE VIBRIO CHOLERAE

CARACTERISTICAS

• Pertenece a la familia vibrio nasea, incluye bacilos gram negativos en

forma de coma, son motieles, contiene 1 flagelo polar. Poco tolerantes a
la acidez, crece bajo condiciones alcalinas, anaerobias facultativas,
oxidasas positivos, no esporulados.
• Crece bien a 37 grados
• Presenta antigineo de LPS
• Total de 150 serotipos, de los cuales 01 Y 0139 PRODUCEN CÓLERA
EPIDÉMICO.

EL 01 SE CLASIFICA EN 2 BIOTIPOS:

-EL TOR

-CLÁSICO (01 toxigenico y 01 no toxigenico), a su vez estos se subclasifican

en los subtipos:

-Ogawa, hikojima e inaba

ESPECIES DE IMPORTANCIA CLINICA

Vibrio Cholerae (tipo O1, O139)

Vibrio parahemoliticus

Vibrio vulnificus

Vibrio alginoliticus

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FACTORES DE VIRULENCIA

-PILIS DE ADHERENCIA: conocidos como Pilis Corregulados por Toxinas

PCT, cuya expresión es regulada por la toxina

-TOXINA COLÉRICA: Posee 2 subunidades tóxicas (A1 y A2) y 5 subunidades

B, que tienes afinidad por los gangliósidos GM1 del enterocito. Esto activa la
adeniciclasa que transforma ATP en AMPc estimulando la secreción de
cloruros, potasio, bicarbonato y agua a la luz intestinal.

-MOTILIDAD: al favorecer la adherencia

-CÁPSULA LIPOPOLISACÁRIDA en el caso del 0139

Presentan náuseas, vómitos diarrea profusa, hasta 20 líquidos por día -por eso
se produce la deshidratación.

Esta diarrea va a contener moco, pero no tendrá sangre, la perdida de líquidos

produce una deshidratación, y puede llevar a una insuficiencia renal, acidosis e
hipopotasemia.

La mortalidad en pacientes q no tienen tratamiento puede llegar hasta un 50%

MANIFECTACIONES CLINICAS:

-Evacuaciones voluminosas, acuosas y mucoides. no hay leucocitos y casi

nunca fiebre.

-Desequilibrio electrolitico: pérdida de muchos litros de agua al día (5 horas

deshidratación completa). Esto induce hipopotasemia y acidosis metabólica.

Algunas cepas de v. cholerae no toxigènicas pueden producir diarreas a través

de toxinas accesorias que no son tan agresivas.

EPIDEMIOLOGÌA

El agua y alimentos contaminados (productos del mar) son los principales

vehículos de trasmisión del cólera epidém ico. El cólera es endémico en el
sudeste asiático. En 1991 se inició una pandemia que abarcó todo el continente.
El Vibrio cholerae se mantiene viable en crustáceos y plancton. Esta
enfermedad afecta solo al hombre. No es una enfermedad invasiva, pero si e s
una enfermedad severa de alta mortalidad.

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PREVENCIÒN

-Educación sanitaria

-Buena disposición de excretas

-Consumo de agua potable

-Higiene personal

-Lavado y cocción de los alimentos

-Aislar a los enfermos y desinfectar sus heces

-La vacuna de microorganismos lisados tiene utilidad limitada.

DIANGNÒSTICO

Muestra para cultivo: heces mucosas

FROTIS: ver motilidad en campo oscuro o contraste de fase

CULTIVO: crecimiento rápido en agar peptonado con pH cercano a 9.0 en agar

TCBS desarrollándose las colonias típicas amarillas en 18 horas.

SEROLOGÌA: pruebas de aglutinación con antisueros específicos y mediante

reacciones bioquímicas.

TRATAMIENTO

El tratamiento prácticamente se basa en la restitución del agua y de los

electrolitos perdidos para corregir la deshidratación grave. Las tetraciclinas son
el antibiótico de elección.

VIBRIO PARAHAEMOLYTICUS:

CARACTERISTICAS: microorganismo marino que causa gastroenteritis aguda

después de la ingestión de productos marinos contaminados, como pescado y
mariscos crudos, crece mejor en medio alcalino, halófilo estricto (necesita al
menos 2 % de NaCL).

ESTRUCTURA ANTIGÈNICA: existen alrededor de 12 serotipos O y 59 K.

MANIFESTACIONES CLÌNICAS:

Gastroenteritis con diarrea acuosa y explosiva. cólicos abdominales, náuseas y

vómitos.
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DETERMINANTES DE PATOGENICIDAD:

-Hemolisina termoestable, hemolisina termolábil, fosfolipasa, liso fosfolipasa

(fenómeno de Kanagawa)

IDENTIFICACION Y AISLAMIENTO DE VIBRIO CHOLERAE

Para el aislamiento del microorganismo las muestras para el cultivo consisten

en muestras de moco de las heces.

Para tomar nuestra muestra debemos estar en una zona estéril, tomamos
nuestra asa, la esterilizamos y posteriormente obtenemos la muestra tomando
una pequeña porción del moco, posteriormente realizamos el cultivo por el
cultivo del Vibrio cholerae vamos a realizar mediante estrella cruzada el cual
consiste en dividir nuestra placa en cuatro cuadrantes.

El Vibrio cholerae produce colonias convexas lisas y redondas que son opacas
y granulosas en la luz transmitida, Vibrio cholerae y la mayor parte de los demás
Vibrios se multiplican bien a una temperatura de 37 grados centígrados, en
muchas clases de medios entre los más utilizados es el medio de TCBS que es
el agar de tiosulfato, citrato, bilis y sacarosa.

Como podemos observar en nuestro hogar de TCBS se pueden obtener colonias

características en un lapso de 18 horas, estas colonias tiene n un color
característico amarillo en un fondo verde oscuro del agar .

Para las pruebas bioquímicas a realizar vamos a tomar el asa en punta y la

esterilizamos, tomamos una pequeña parte de nuestro cultivo y empezamos a
inocular nuestras pruebas bioquímicas

• Nuestra primera prueba bioquímica a inocular es el agar lía o el agar lisina

de hierro, esta es mediante picadura y se terminó estriando en el pico de
flauta, esta prueba valora la presencia de la enzima glicina descarboxilasa .
• El segundo estuvo a inocular es el medio TSI o agar- hierro- triple azúcar,
éste también se hace mediante picadura en el fondo y se termina con estría
en pico de flauta.
• El agar hierro de Klinger éste es igual mediante picadura y estría .
• Por último, utilizamos la prueba de RM VP rojo de metilo bogues Rosauer,
recordando que para realizar la inoculación de todas nuestras pruebas sólo

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se toma una sala de nuestro cultivo y se inoculan todas a la vez, también se

deben inocular en una zona de esterilidad cerca del mechero.

Pasado el tiempo de incubación de nuestras pruebas bioquímicas procedemos

a la toma de resultados.

• Nuestra primera prueba bioquímica inoculada fue la agar lia o agar lisina
hierro como había mencionado anteriormente este valora la presencia de la
enzima lisina descarboxilasa donde un resultado K sobre K indica que es
morado sobre morado y tiene la capacidad descarboxilasa la lisina hay
productos alcalinos y el indicador varía a morado produce una coloración
morada en el fondo y también podemos obtener otros posibles resultados en
lo cual como había mencionado K indica alcalinidad A indica acides y R
indica acidez que es de examinación .
• El segundo tubo inoculado es el agar agar hierro triple azúcar el medio TSI
contienen glucosa sacarosa y lactosa en nuestro tubo como podemos
observar presenta una reacción que es A sobre A oséa amarillo sobre
amarillo esto indica que utiliza la glucosa lactosa y sacarosa además que en
condiciones ácidas el indicador rojo de metilo varía de color amarillo y cómo
podemos observar no tiene la capacidad de producir gas o producir ácido
sulfhídrico.
• Nuestra tercera prueba bioquímica es el agar kía o agar hierro de kigler este
contiene dos azúcares lactosa y sacarosa este medio puede sustituir al TSI
y la única diferencia entre estos medios es la ausencia de sacarosa como
podemos observar en nuestro tubo tenemos un resultado K sobre A lo que
indica rojo sobre amarillo este tiene una interpretación que el
microorganismo solo fermenta la glucosa por lo cual se ve la variación del
color donde nuestro fondo es amarillo y nuestro pico de flauta es rojo este
medio como les acabo de mencionar puede sustituir al medio TCI
• Nuestro cuarto y última prueba bioquímica realizada es la prueba de RM VP
rojo de metilo vogues proskauer; el ensayo de esta prueba detecta los ácidos
que provienen de la fermentación de la glucosa y los microorganismos que
no fermentan a la glucosa por lo tanto no hay presencia de ácidos este tiene
dos resultados, la aparición de un anillo de color rojo o sin presencia de
anillo, cabe destacar que para poder revelar esta prueba se necesita agregar
unas gotas del indicador rojo de metilo entonces como podemos observar en
nuestra muestra hay presencia de un anillo de color rojo lo cual indica que

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tiene ácidos que provienen de la fermentación de la glucosa , si no hay

presencia del anillo de color rojo indica que el organismo no puede
fragmentar la glucosa y por lo tanto no hay presencia de ácidos .

Posteriormente realizamos una atención diferencial en este caso sería la tinción

gram con la ayuda de nuestra asa tomamos una pequeña muestra de nuestra
bacteria y realizamos un frotis posteriormente la fijamos al calor cubrimos los
productos con el colorante primario en este caso es cristal violeta dejándolo
actuar durante un minuto posteriormente se escurre el colorante y se lava con
chorros de agua colocamos el mordiente .

Por lo general Vibrio cholerae fermenta sacarosa y manosa, pero no hará vinos
a y una prueba de oxidada positiva es un paso clave para la identificación de
este microorganismo la mayor parte de las especies del género Vibrio son a lo
tolerantes y el producto de sodio a menudo estimula su multiplicación les
recuerdo tener su equipo de protección personal y tomar las medidas de
seguridad correspondientes en el laboratorio.

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