TEMA 1. CULTIVO DE MICROORGANISMOS.

En los cultivos sólidos se pueden tener colonias aisladas. Son 95% o más de agua.

Azúcares, proteínas, lípidos y ácidos nucleicos para lo que necesitan H, O, C y N. Algunas células
también necesitan macronutrientes. Cada microorganismo tiene unas necesidades diferentes.

Colonia bacteriana: conjunto de bacterias que provienen todas de la misma célula madre.

Crecimiento microbiano: cuando aumenta el número de células a lo largo del tiempo.

Las bacterias son células procariotas, células simples. Las levaduras en cambio son células eucariotas
que tienen más DNA separado en cromosomas en el núcleo, cada especie tiene un número fijo de
cromosomas.

Fisión binaria:

ESQUEMA

En las colonias las células son todas iguales. La forma depende de la especie.

A los medios sólidos se le añade Agar-agar que se extrae de algas, es inerte y no modifica el pH.

MEDIOS SELECTIVOS Y MEDIOS SELECTIVO-DIFERENCIAL

Los medios generales contienen muchos nutrientes y ahí crecen la mayoría de las bacterias.

En los medios selectivos sólo crecen algunas especies. Además, si diferencia los tipos de bacterias es
un medio selectivo-diferencial. Al tener los microorganismos diferentes metabolitos, utilizan de
manera distinta los nutrientes y dan diferentes productos. Estos tienen pH diferentes y el medio
tiene un indicador de pH. El diferente metabolismo depende del código genético que se traduce en
enzimas.

Los medios son definidos cuando se sabe exactamente su composición pero también son más caros.
Los medios complejos se sabe que se le añade pero no exactamente, tiene todo lo necesario en
exceso.

CURVA DE CRECIMIENTO
Las células al principio no crecen (fase
1 o de latencia). La bacteria necesita
adaptarse al nuevo medio de cultivo.

Cuando se adapta y empieza a

producir las encimas necesarias,
comienza la etapa de rápido
crecimiento. Esta fase se denomina
fase II logarítmica o exponencial.
Llega un momento en el que se agotan los nutrientes, la fase estacionaria, y llega un momento en el
que las células se mueren, fase 4 de muerte.

Cabe destacar que los microorganismos se están muriendo durante toda la curva, sólo que en una
proporción mucho menor.

En la fase de latencia tienen el metabolismo parado, al llegar a la fase III la bacteria deja de producir
las enzimas, para mucho su metabolismo.

RECUENTO DE CÉLULAS TOTALES

Cámara de recuento.

Contamos al microscopio las células

que hay en un volumen
determinado. La fase 4, de muerte,
no se puede ver ya que nosotros no
distinguimos si las células están
vivas o muertas. Es un método muy
complejo.

RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES

El problema es que las colonias se pueden juntar y

habría otra vez que diluir con agua estéril o solución
salina.

Se utiliza el método de las disoluciones seriadas:

Método de placa extendida:

1. La muestra se pipetea en una placa con agar.

2. La muestra se extiende por toda la superficie
del agar usando un asa de siembra estéril.
3. Incubación.
4. Se obtienen colonias en la superficie de la placa.
Método de vertido en placa:

1. La muestra se pipetea en una placa estéril.

2. Se añade el medio estéril y se mezcla bien con el inóculo.
3. Incubación.
4. Se obtienen colonias en la superficie del agar debajo de ésta.

ESPECTOFOTOMETRÍA

Se mide la turbidez. La densidad óptica, comúnmente a una longitud de onda de 600 nm. Se
representa t frente la densidad óptica de 600 nm. Se obtiene una curva de crecimiento sólo que un
poco desplazada. No se ve la fase de muerte.

EFECTOS AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO MICROBIANO

Temperatura:

Por temperatura óptima en orden creciente los

microorganismos pueden ser psicrófilos,
mesófilos, termófilos e hipertermófilos.

pH: Los microorganismos también pueden ser

acidófilos o alcalófilos.

Efecto osmótico: (sal)

Oxígeno:

a) Aerobio total
b) Anaerobio
c) Aerobio facultativo
d) Microaerófilo
e) Aerotolerante