INSTITUTO TECNOLOGICO DE

ACAPULCO
INGENIERIA BIOQUIMICA

MICROBIOLOGÍA GENERAL
M.A. MIGUEL ANGEL DIAZ ALDAY
DISEÑO EXPERIMENTAL X
´´LEVADURAS´´
GRUPO ¨A¨ DE 8:00 A 10:00 A.M
EQUIPO 1
ALUMNA: OLGADILIA CHALMA MARTINEZ.
NUMERO DE CONTROL: 16320347

ACAPULCO GUERRERO, A 31 DE MARZO DEL 2019.

1
 ÍNDICE

INTRODUCCIÓN………………………………………………………………....…..…..3

ANTECEDENTES…………………………………………………………………………4

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA…………………………………….……....…….8

HIPÓTESIS……………………………………………………………….………..……...8

JUSTIFICACIÓN………………………………….………………………...………..……8

OBJETIVO GENERAL………………………………………………………..…......……9

OBJETIVOS ESPECÍFICOS……………………………………………..…………...…9

MATERIALES Y SUSTENCIAS……………..……………………………..……….…..9

METODOLOGÍA.……………………………………………….………………………..10

BIBLIOGRAFÍAS………………………………………………………………….....…..11

2
 INTRODUCCIÓN
Los hongos presentan básicamente dos tipos de morfologías: una multicelular
denominada filamentosa y otra unicelular denominada levaduriforme. En esta
práctica nos centraremos en las características microscópicas y macroscópicas de
las levaduras.
Las levaduras son hongos muy difundidos en la naturaleza. Pueden hallarse sobre
las frutas, las flores, los granos, en el suelo, en el intestino de los animales, etc.
La importancia económica de las levaduras es grande y además de las clásicas
utilizaciones para la fabricación de pan y la fermentación de zumos de frutas. En la
actualidad son aprovechadas para sintetizar algunas vitaminas, grasas y proteínas
a partir de azúcares sencillos y nitrógeno amoniacal.
Las levaduras son hongos que forman sobre los medios de cultivo colonias
pastosas, constituídas en su mayor parte por células aisladas que suelen ser
esféricas, ovoideas, elipsoideas o alargadas. Las dimensiones pueden oscilar de 1
a 9 µm de ancho y 2 a más de 20 µm de longitud según la especie, nutrición, edad
y otros factores.
Algunos hongos fitopatógenos forman colonias levaduriformes en cultivos
axénicos y varios patógenos de animales se presentan como levaduras en los
materiales clínicos.
Las levaduras pertenecen a dos clases de hongos: ascomicetos o basidiomicetos,
aunque muchas de ellas se presentan comúnmente en la forma imperfecta. Las
levaduras ascomicéticas forman ascas libres, con 1 a 8 ascosporas, y en las
especies hifales las ascas están desnudas.
Las ascoporas de las levaduras son algo más resistentes al calor y la desecación
que las células vegetativas, si bien tienen mucha menor resistencia térmica que
las esporas bacterianas, por lo que mantienen la viabilidad de la especie durante
los cambios adversos del medio ambiente

Imagen 1: Placa de cultivo de levaduras.

3
 ANTECEDENTES
 ¿Qué son las levaduras?
Las levaduras es cualquiera de los diversos hongos microscópicos unicelulares
que son importantes por su capacidad para realizar la fermentación de hidratos de
carbono, produciendo distintas sustancias. Son abundantes en la naturaleza, y se
encuentran en el suelo y sobre las plantas. La mayoría de las levaduras que se
cultivan pertenecen al género Saccharomyces.

 Características generales.
Las levaduras se clasifican en base a sus caracteres morfológicos, aunque para
algunos microbiólogos, sus propiedades fisiológicas tienen mayor importancia.
La mayoría de las levaduras son hongos unicelulares sencillos microscópicos, la
mayoría se reproducen asexualmente por gemación, y otras especies lo hacen por
fisión múltiple. Las levaduras que pueden reproducirse sexualmente se conocen
como “verdaderas”, este proceso implica la formación de ascosporas, sirviendo la
propia levadura como asca, de aquí que ellas se clasifican como Ascomicetos; por
el contrario las “falsas” que no producen ascosporas, pertenecen a los hongos
imperfectos.

 Características Morfológicas.
Los caracteres morfológicos de las levaduras se determinan mediante su
observación microscópica. Además, los criterios morfológicos se basan en el modo
de reproducción vegetativa de la morfología celular, de la formación de
Pseudomicelio y de Micelio. La forma de la levadura puede ser desde esférica a
ovoide, en forma de limón, piriforme, cilíndrica, triangular, e incluso alargada
formando un verdadero micelio o un falso micelio.

Imagen 2: Varios géneros de

levaduras.

4
También se diferencian en cuanto a su tamaño, miden de 1-10 um ancho por 2-3
um de longitud. Son partes observables de su estructura, la pared celular, el
citoplasma, las vacuolas, los glóbulos de grasa, y los gránulos, los cuales pueden
ser metacromáticos, de albúmina o de almidón. Para poder observar el núcleo es
preciso utilizar tinciones especiales.
La estructura celular es de tipo eucariótico, pero sin sistema fotosintético. La pared
rígida, se caracteriza por la presencia, en su composición, de dos polisacáridos:
manano y glucano. Algunas levaduras producen una cápsula constituida por
fosfomanos. El núcleo está rodeado de una membrana que persiste durante la
división celular. El número de cromosomas es variable de unas a otras. Las
levaduras en ningún caso son móviles.

Imagen 3: Estructura celular de una levadura.

 Reproducción
La mayoría de las levaduras se reproducen por gemación multicelular o por
gemación polar, que es el mecanismo en el cual una porción del protoplasma
sobresale de la pared de la célula y forma una protuberancia, la cual aumenta de
tamaño y se desprende como una nueva célula de levadura.
En las levaduras que forman película, la yema crece a partir de una prolongación
tubuliforme de la célula madre. El material nuclear replicado se reparte entre la
célula madre y la célula hija.
La reproducción sexual de las levaduras verdaderas (Ascomycotina) da lugar a la
producción de ascosporas, desempeñando la función de asca, la propia célula de
la levadura. En la mayoría de las especies de levaduras verdaderas, la formación
de ascosporas tiene lugar tras la conjugación de dos células, aunque algunas
pueden producir ascosporas sin que exista conjugación previa, teniendo lugar
después la conjugación de las ascosporas.

5
Tanto el número y el aspecto de esporas por asca, son típicos de cada especie de
levadura, y se pueden diferenciar por su color, rugosidad o lisura de su pared y por
su forma (redondeada, ovalada, arriñonada, falciforme, forma de saturno o de
sombrero, hemisférica, angular). Las células de algunas levaduras se transforman
en clamidosporas mediante la formación de una gruesa pared alrededor de la
célula, tal como ocurre, por ejemplo, en las especies de los géneros Candida,
Rhodotorula y Cryptococcus.

Imagen 4: De izquierda a derecha Gemación de saccharomyces, reproducción

sexual: formación de ascosporas.

 Características de cultivo
En la mayoría de los casos, el crecimiento en masa de las levaduras no resulta
apropiado para su identificación. En los cultivos con agar, es difícil diferenciar las
colonias de levaduras de las colonias bacterianas, por lo que la observación
microscópica es la única forma segura que existe para poderlas diferenciar.
La mayoría de las colonias jóvenes de levaduras son húmedas y algo mucosas, y
es posible que tengan aspecto harinoso. La mayoría de las colonias son
blanquecinas, algunas tienen un color crema o rosado. Algunas colonias cambian
poco de aspecto cuando envejecen, otras se secan y se vuelven rugosas.
En la superficie de un líquido, las levaduras oxidativas pueden crecer en forma de
película, de velo, o de espuma, y por ello se denominan levaduras formadoras de
película. Las levaduras fermentativas suelen crecer en toda la masa del líquido y
producen dióxido de carbono.

Imagen 5: Cultivos de levaduras que originas

distintos tipos de colonias.
6
  Propiedades Fisiológicas
Las distintas especies de levaduras pueden ser muy diferentes en cuanto a su
fisiología, la mayoría necesitan más humedad para crecer y desarrollarse. El
intervalo de temperatura de crecimiento de las levaduras es en general, parecido
al de los hongos, con una temperatura óptima en torno a los 25 a 30ºC y una
temperatura máxima en torno a los 35 a 47ºC.
Una reacción ácida del medio, próxima a un pH de 4 a 4.5, estimula el crecimiento
de la mayoría de las levaduras, mientras que en medios básicos, no crecen bien a
no ser que se hayan adaptado a los mismos, crecen mejor en aerobiosis, aunque
las especies de tipo fermentativo son capaces de crecer, aunque lentamente, en
anaerobiosis.
En general, los azúcares son la fuente energética más apropiada para las
levaduras, aunque en las oxidativas, por ejemplo, las formadoras de película
oxidan los ácidos orgánicos y el alcohol.

 Clasificación e identificación.
La clasificación de las levaduras es compleja. Las levaduras pertenecen al Reino
Fungi y dentro de él a la división Eumicota que agrupa a los hongos verdaderos.
En esta división, las levaduras se incluyen en 2 de las 5 subdivisiones de los
Eumicetos, la Ascomycotina representada por las levaduras capaces de producir
ascosporas, llamadas por ello esporógenas, y la Deuteromycotina representadas
por las levaduras incapaces de formar esporas llamadas no esporógenas. Los
géneros de las levaduras esporógenas englobados todos ellos en la familia
Saccharomycetaceae, se distribuyen en 3 subfamilias. Los géneros de las
levaduras no esporógenas constituyen la familia Cryptococcaceae.
Además las levaduras pueden ser clasificadas por debajo de los taxones género y
especie, en subespecies. Los principales criterios utilizados para la clasificación e
identificación de las levaduras son los
siguientes:
1.- Producción de ascosporas.
2.- Aspecto de las células vegetativas.
3.- Forma de reproducción asexual.
4.- Producción de micelio.
5.- Forma de película en medio líquido.
6.- Color de la colonia.
8.- Propiedades fisiológicas.
Imagen 6: Algoritmo de identificación
presuntiva de levaduras.

7
 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Las levaduras son hongos muy difundidos en la naturaleza. Pueden hallarse sobre
las frutas, las flores, los granos, en el suelo, en el intestino de los animales, etc.
Existen varias especies de levaduras que son microscópicas del reino fungí, que
crecen en formas unicelulares. Es necesario que un alumno de microbiología de
respuesta a preguntas esenciales como: ¿Cuál es la técnica correcta para realizar
cultivos de hongos (levaduras)? ¿Cuáles son las características morfológicas
microscópicas que definen a una levadura? Con la realización de la práctica se
espera que tengamos mayor comprensión con respecto a la estructura
microscópica de las levaduras.

HIPÓTESIS
Se obtendrán cultivos procedentes de un cepario de levaduras.
Mediante la observación lograremos identificar las principales características
macroscópicas del cultivo de levaduras.
Mediante el uso del microscopio óptico compuesto lograremos identificar las
características morfológicas de las levaduras. Con el objetivo de 100x
observaremos los detalles de esta.

JUSTIFICACIÓN
Las levaduras se encuentran en la mayoría de las frutas y de las flores y en los
exudados de las plantas. Se denomina levadura o fermento a cualquiera de los
diversos organismos eucariotas, clasificados como hongos, ya sean ascomicetos o
basidiomicetos microscópicos, con forma unicelular predominante en su ciclo de
vida, generalmente caracterizados por dividirse asexualmente por gemación o
fisión binaria y por tener estados sexuales que no están adjuntos a un
esporocarpo (cuerpo fructífero).
Desde una perspectiva microbiológica se ha denominado levadura a todos los
hongos con predominio de una fase unicelular en su ciclo de vida, incluyendo a los
hongos basidiomicetes. A veces suelen estar unidas entre sí formando cadenas.
Además producen enzimas capaces de descomponer diversos sustratos,
principalmente los azúcares.
La realización de esta práctica tiene como justificación aprender a identificar las
características morfológicas macro y microscópicas de las levaduras. Conocer
cuáles son los medios en donde los encontramos y las repercusiones que estas
tienen en el área microbiologíca.

8
 OBJETIVO GENERAL.
 Realizar cultivos de diferentes tipos de levaduras.
 Realizar observaciones macroscópicas y microscópicas de colonias de
diferentes especies de levaduras para poder identificar e interpretar sus
características morfológicas.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Observar el crecimiento de diferentes especies de levaduras.
 Realizar manipulación microscópica para observar la estructura de las
levaduras por microscopia óptica.
 Determinar las características del desarrollo vegetativo de las levaduras.
 Observar los detalles de la ornamentación de las levaduras utilizando los
diferentes objetivos del microscopio.

MATERIALES Y SUSTANCIAS

Material Equipo Sustancia,

reactivos y
muestras.
Cajas Petri. Autoclave. Agar dextrosa
sabouraud.
Matraces Incubadora. Cepario de
Erlenmeyer. levaduras.
Asa bacteriológica. Microscopio. Agua destilada.
Cinta testigo. Casacara de fruta sin
lavar.
Mechero de bunsen. Solución salina.
Papel destraza.
Aluminio.
Portaobjetos
Cubreobjetos

METODOLOGÍA
9
Preparación de medios de cultivo de levaduras.
1. Como primer paso pesaremos la cantidad necesaria de Agar dextrosa
sabouraud para preparar dos cajas Petri.
2. Diluiremos en agua y se dejara hidratar durante 5 minutos. Se agitara y
calentara para obtener una disolución totalmente homogénea.
3. Esterilizar en autoclave a 121º C a 1 atm de presión durante 20 minutos.
4. En el tiempo de espera se procederá a pelar la fruta sin lavar.
5. Se pesaran 10 gramos de la cascara y se mezclara con 90 ml de solución
salina.
6. Al tener el agar listo vaciar en las dos cajas Petri y enseguida agregar 2 ml
de la solución salina con cascara preparada anteriormente.
7. Para homogenizar el ADS y la solución con levaduras se realizan 30 vueltas
en el sentido de las manecillas del reloj y 30 contrarias.
8. Incubar a 26-28º C durante 18 a 24 horas.
9. Realizar observaciones necesarias (Aspecto de las colonias, el crecimiento
y la coloración)

Observación al microscopio.

1. Se prepara una solución de agua con levadura del cultivo previamente

obtenido.

2. Se coloca sobre un porta objetos una gota de solución.

3. Se fija suavemente a la llama.

4. Se tiñe con azul de metileno durante 15 minutos.

5. Se lava con agua corriente.

6. Se seca el porta objetos cuidadosamente con papel filtro.

7. Observación al microscopio.

8. Realizar apuntes necesarios.

10
 BIBLIOGRAFÍAS
Manual de microbiología de alimentos
http://www.unsa.edu.ar/biblio/repositorio/malim2007/4%20levaduras.pdf
Recopilación de contenido sobre levaduras.
http://www.ibiologia.unam.mx/biodiversidad2011/Folleto%20levaduras.pdf
https://www.ecured.cu/Levadura
http://www.fciencias.unam.mx/biologia/celular/grupos/levaduras.html
http://tatipastry.blogspot.com/2012/03/la-levadura_06.html
http://www.plantasyhongos.es/hongos/hongos_levaduras.htm
Frazier W. & Westhoff D. (1994) Microbiología de los Alimentos. 4ª. ed.
Acribia, España. 23-50.
Prescott L.M., Harley J.P. and Klein G.A., Microbiología, 3a edición, México, Mc.
Gerhardt E., Vila J. & Llimona X., 2000, Hongos de España y de Europa.

11