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ESTRUCTURA CITOPLASMICA
NUCLEOIDE
• En las células procariotas el ADN es una molécula única, generalmente circular y
filiforme, multiforme (cerrada) y de doble filamento.
• No implica la presencia de membrana nuclear.
• Este sistema sirve para guardar la información genética, contrasta con el sistema
existente en células eucariotas, donde el ADN se almacena dentro de un orgánulo con
doble membrana llamado núcleo
• El ADN del cromosoma no solo se condensa sino que también se organiza
funcionalmente de manera compatible con todos los procesos del ADN: la
replicación, la recombinación, la segregación y la transcripción.
• Las bacterias poseen un grupo de proteínas que se unen al ADN, conocidas como
proteínas asociadas a nucleoides (NAP en inglés) que son análogas en su función, a las
histonas de los eucariotas.
• Las poliaminas se encuentran asociadas con ribosomas y membranas. Las principales
son: Putrescina y Espermidina, ejercen un efecto antimutagénico, impiden la
disociación de los ribosomas 70S en sus componentes 30S y 50S y aumentan la
resistencia de los protoplastos a la lisis osmótica.
• Proteínas simil Histonas se ha encontrado en pequeña cantidad en asociación con el
ADN de E. coli
Citoplasma Bacteriano
A. La membrana externa
Sirve como membrana de permeabilidad selectiva, mantiene afuera a sustancias hidrófobas y hidrófilas. Por encima de cierto
tamaño y retiene las proteínas periplásmicas.
La membrana exterior es una típica capa doble de fosfolípidos en la cual los fosfolípidos de la capa más externa han sido
sustituidos por moléculas de LPS.
B. Porinas
Halladas en la membrana externa, con PM 35,000
Forman los poros transmembrana o canales de difusión que permite el pasaje de pequeñas moléculas hidrófilas a través de la
membrana externa.
C. Lipoproteína
Proteína más abundante en las células Gramnegativas
Función: estabiliza la membrana externa y anclarla a la capa de
peptidoglucano.
D. LPS
Conocido como lípido A, consiste en unidades del disacárido de glucosamina fosforilada que tiene
unidos varios ácidos grasos de cadena larga.
Es termoestable, letalmente tóxico, pirogénico.
E. Protoplasto y Esferoplasto
La capa de glucopéptidos de la pared celular puede
eliminarse mediante hidrólisis con lisozimas, pero es
estabilizada en soluciones hipertónicas de sacarosa.
- Protoplasto, cuando se libera un cuerpo esférico sin
pared osmóticamente sensible, Grampositivas.
- Esferoplasto, cuando hay retención de la cubierta
celular se denomina esferoplasto (Gramnegativas).
GRAMNEGATIVAS
Presentan 3 capas de envoltura distintas, dispuestas de manera laxa, estas incluyen
• La membrana externa (ME), convoluta, arrugada con surcos u ondulante, que contiene el
antígeno O somático conocido como lipopolisacárido LPS,
• Una capa densa intermedia, y
• La membrana plasmática interna. Un espesor de 0.0075 um.
DIFERENCIAS DE LA PARED CELULAR DE
GRAMPOSITIVAS, GRAMNEGATIVAS Y MICOPLASMA
Procedimiento
• Hacer el frotis y fijar a la llama
• Colorear con reactivo de Loeffer por 30 seg
• Lavar con agua
• Secar suavemente a la llama
• Observar 100X
• Los gránulos metacromáticos son coloreados por el azul de metileno
• Y se ve azul intenso
• El cuerpo bacteriano se ve azul claro
COLORACION DE ALBERT
Reactivos
• Albert (azul toluidina, verde malaquita)
Procedimiento
• Hacer el frotis y fijar a la llama
• Colorear con reactivo de Albert por 5 min
• Lavar con agua
• Colocar Lugol por 1 min
• Lavar con agua
• Secar suavemente a la llama
• Observar 100X
• Los gránulos metacromáticos son coloreados por el colorante Albert y se ven Verde oscuro
• El cuerpo bacteriano se ve verde claro
Esporas
FUNCIONES
• Protege el ADN del genoma
bacteriano del calor intenso, la
irradiación y la acción de la mayoría
de enzimas y sustancias químicas.
• Son tan resistentes a los factores
ambientales que pueden
mantener su viabilidad
• las esporas son difíciles de
descontaminar con los
desinfectantes convencionales
• Es una estructura deshidratada formada por
múltiples capas que protege a la bacteria y le
permite vivir en un «estado de latencia»
• Contiene una copia completa del
cromosoma bacteriano,
• Concentraciones mínimas ribosomas y
proteínas esenciales
• Elevada concentración de calcio unido a
ácido dipicolínico.
• Posee una membrana interna
• Dos capas de peptidoglucano
• Una capa proteica semejante a la queratina
externa.
La formación de endosporas es un rasgo distintivo de la familia
Bacillaceae, que incluye al género aerobio, Bacillus y el género
anaerobio Clostridium.
Bacterias de suelos son capaces de formar esporas.
La espora capta agua, se hincha, pierde sus capas y produce una nueva
célula vegetativa que es idéntica a la célula original, finaliza todo el ciclo.
excrecencia
• Duplicación del cromosoma, una copia de ADN y los contenidos
citoplásmicos (región central o núcleo) son rodeados por la
membrana citoplásmica, el peptidoglucano y la membrana del
tabique.
• El ADN queda recubierto por las dos capas de membrana y el
peptidoglucano que normalmente dividiría a la célula.
• Estas dos capas están rodeadas por la corteza formada por una capa delgada
interna de peptidoglucano rígido entrecruzado que rodea membrana
citoplásmica (laxa) y capa externa de peptidoglucano.
• La corteza se rodea de una dura capa proteica semejante a la queratina que
protege a la espora. La duración del proceso es de 6 a 8 h
FORMA
Las endosporas pueden ser esféricas u ovales y
pueden o no hinchar la célula.
Subterminales Terminales
Centrales
Las endosporas generalmente no se tiñen por el método de Gram
y aparecen cuerpos refractarios, no teñidos en los extendidos.
A. ENDOSPORAS CENTRALES
Están situadas en el centro de la célula.
B. ENDOSPORAS SUBTERMINALES
Se encuentran próximas al extremo. Bacilos grampositivos
sobrecoloreados con endosporas subterminales.
Característico del Bacillus y Clostridium.
La diferencia se realiza en base a que el Bacillus es aerobio o
anaerobio facultativo y el Clostridium es anaerobio obligado.
C. ENDOSPORAS TERMINALES
Se encuentran situadas en el extremo. Clostridium tetani
MORFOLOGIA MICROSCOPICA Y
REACCIONES TINTORIALES
TINCION DE LAS ESPORAS
Las esporas son la forma de resistencia de las bacterias. Tienen forma
esférica u oval. Al microscopio, las esporas sin teñir se observan como
gránulos brillantes.
Se tiñen con verde malaquita o carbolfucsina y en suspensiones de bacterias
sin teñir se observan como cuerpos refringentes intracelulares.
Ej: Clostridium
BACTERIAS
A. TINCION DE GRAM:
Las bacterias se tiñen de color
violeta, mientras que las esporas no se
colorean dejando espacios vacíos.
C. TINCION DE MOELLER
Las esporas se habrán teñido de rojo o
rosado y las bacterias azules.
PROCEDIMIENTO
1.- Frotis. Secar
2.- Fijar con alcohol absoluto, escurrir el alcohol
y arder el resto.
3.- Lavar. Tratar con ác. Crómico 5 min. Lavar.
4.- Cubrir con fuscina fenicada de Ziehl. Calentar 10 min.
5.- Decolorar con ác. Sulfúrico 5/100 Alcohol.
6.- Lavar. Colorear con azul de metileno dil. 1 min.
7.- Lavar. Secar y observar.
FUNCIONES
• Proporcionan flagelar determina si las bacterias continúan nadando o bien giran.
• Motilidad a las bacterias y permiten que la célula se dirija hacia los nutrientes y
evite las sustancias tóxicas (quimio-Taxis).
• Las bacterias se acercan a sus nutrientes nadando en línea recta para girar luego
bruscamente y continuar en una nueva dirección.
• Este período de desplazamiento aumenta a medida que se incrementa la
concentración de la sustancia quimio-atrayente.
• Portan factores antigénicos y determinantes de la cepa bacteriana
Los flagelos bacterianos son:
• Largos apéndices filiformes
• Compuestos en su totalidad por proteína, Miden
de 12 a 30 nm de diámetro.
• Estan constituidos por una sola clase de
proteínas denominada FLAGELINA.
Fundamento:
Los flagelos son estructuras demasiado finas para ser visible al microscopio óptico,
en presencia de ácido tánico puede evidenciarse su presencia y disposición en las
células, por medio de un precipitado grueso que se deposita sobre la pared celular y
flagelos.
El diámetro aumenta con la tinción de fucsina se les hace visibles. Los flagelos se
tiñen con soluciones alcohólicas de colorantes de anilina, forman un precipitado al
evaporarse el alcohol en el proceso de tinción.
La fucsina básica es el colorante primario y el ácido tánico añadido a la solución
actúa como un mordiente.
Se puede usar un contracolor como el azul de metileno, para visualizar mejor la
bacteria en los casos en que el colorante primario es débil o no reacciona del todo
con la pared celular bacteriana.
METODO DE RHODES
Reactivos:
•Mordiente de Rhodes (contiene una solución
acuosa de tanino, alumbre potásico, aceite de
anilina y cloruro férrico).
•Nitrato de plata amoniacal.
Técnica:
•Se cubre la preparación con el mordiente de
Rhodes durante 3 a 5 minutos.
•Se lava cuidadosamente con agua, mejor por
inmersión.
•Se cubre con la solución de nitrato de plata Observación
amoniacal, calentándolo hasta casi ebullición y Los flagelos se observan por el
dejándolo actuar por 3 a 5 minutos. precipitado de nitrato de plata que se ha
•Se lava con agua destilada. depositado en torno suyo.
•Se seca a temperatura ambiente.
•Observar a 100X.
METODO DE GRAY
Reactivos:
•Mordiente de GRAY.(contiene solución alumbre potásico, tanino y
Cl3Hg).
•Fucsina fenicada Ziehl-Neelsen.
Técnica:
•La lámina se deja secar a t. ambiente-
•Colocar Mordiente GRAY por 10 min.
•Lavar agua+Colorear con Fucsina fenicada Ziehl Neelsen por 10 min-
•Lavar Observación
•Secar al aire Los flagelos se
•Observar 100X observan oscuros
Cuerpo bacteria: rojo
oscuro
METODO DE TRIBONDEAU
Reactivos:
•Mordiente de Tribondeau.(contiene solución alumbre potásico y tanino).
•Solución de cristal violeta.
Técnica:
•Se fija el frotis con alcohol.
•Se cubre la preparación con la mezcla formada por 5 ml del mordiente y
0.5 ml de cristal violeta previamente sometida a ebullición.
•Se deja actuar la mezcla unos veinte segundos.
•Se lava rapidamente con agua, sin volcar previamente el colorante para Observación
evitar que se forme una película sobre la preparación. Los flagelos se
•Se seca a temperatura ambiente. observan de color
•Observar a 100X. violeta oscuro a
negruzco
FILAMENTOS AXIALES O
ENDOFLAGELOS
Espiroquetas: estructura y movilidad característica
• Treponema pallidium: sífilis
• Leptospiras
• Borrelia bugdorferi: Enfermedad de Lyme
Estructura similar a los flagelos
Estos filamentos están ubicados en el espacio periplásmico entre las membranas interna y
externa de la célula.
Formados por proteínas fibrilares alrededor de los microorganismos adheridos a ambos polos
de la célula.
Fibrilla que nacen en los extremos de la célula y siguen un trayecto helicoidal alrededor de la
célula.
.
FUNCIONES
Desplazamiento sobre filamentos axiales en torno
de los cuales se arrolla la célula.
Se mueven desplazándose por una onda helicoidal,
permite penetrar en medios viscosos.
Movimiento en tirabuzón.
Movimiento flexión y giro producido por el
filamento axial.
Da movimiento rápido a las espiroquetas
Lectinas
Los extremos de las fimbrias pueden contener unas proteínas (lectinas) que se fijan a azúcares
específicos (ej., manosa).
Pilis
• Los pili (pelos) estructuralmente similares a las fimbrias.
• Son más largos
• Existe uno o unos pocos pili sobre la superficie, en una proporción de 1 a 4 pili por
100 a 200 fimbrias.
• Los pili pueden verse (microscopio electrónico) al funcionar como receptores
específicos para determinadas partículas víricas, pueden observarse con facilidad
cuando están recubiertos con virus.
tamaño
cantidad
MAYOR
MAYOR FLAGELO
FLAGELO
PILI PILI
MENOR
FIMBRIAS
MENOR FIMBRIAS
FUNCIONES
• Los pili son proyecciones tipo fibroso de las
células.
• Están relacionados con la conjugación sexual
conjugación (transferencia del material genético
plasmido, de una célula a otra)
• Permiten la adherencia de la bacteria a las
superficies epiteliales del huésped que infecta.
Los pili F (pili sexuales)
Se unen a otras bacterias y configuran una estructura tubuliforme
para la transferencia horizontal de grandes segmentos de los
cromosomas bacterianos.
Pelo sexual: unión a celula receptora durante la
Estos pilis están codificados por un plásmido F
Capsula y
glicocalix
• La formación de estas estructuras extracelulares depende del
sistema de secreción bacteriano.
• Este sistema transfiere proteínas desde el citoplasma al
periplasma o al espacio que rodea a la célula.
• Los sistemas de secreción son esenciales para la virulencia de los
patógenos
• La cápsula, es una estructura rígida, bien definida que rodea la célula CAPSULA
y se une firmemente a la superficie bacteriana. Bacillus megaterium.
• Protege a la célula de la desecación y de materiales tóxicos del medio ambiente (metales pesados y
radicales libres)
• Promueve la concentración de nutrientes en la superficie de la bacteria debido a su naturaleza
polianiónica.
• La cápsula actúa barrera frente a moléculas hidrófobas tóxicas (p. ej., detergentes)
• La cápsula ofrece resistencia a la acción bactericida del complemento y de los anticuerpos séricos.
• Estas estructuras protegen a las bacterias y evita que sean fagocitadas por los macrofagos
• Actuán como antígenos y estar implicadas en el reconocimiento bacteriano
FUNCIONES
Fundamento
La cápsula es una estructura fuerte de naturaleza polisacárida. Esta protege a los microorganismos de la
fagocitosis, y por tanto es una estructura difícil de penetrar.
Las tinciones de cápsulas se fundamentan en el contraste. Los colorantes tiñen el fondo de la preparación
mientras que la cápsula queda incolora y reconocible.
Si el microorganismo no posee cápsula no será distinguible con este tipo de coloración, porque todo se teñirá
del mismo color.
Todas las técnicas que se utilizan para colorear la cápsula poseen el mismo fundamento a pesar de que
utilizan colorantes y procedimientos diferentes.
COLORACION ANTHONY WELCH
Reactivos:
• Cristal violeta 1%.
•Solución acuosa de sulfato de cobre 20%.
Técnica:
• Hacer la extensión y secar al aire
•No fijar al calor
• Se cubre la preparación Cristal violeta
durante 1 minuto. No calor
•Se lava con sulfato de cobre.
•Se seca a temperatura ambiente.
•Observar a 100X.
Reactivos:
•Solución Cristal violeta 0.1%.
•Solución acuosa de sulfato de cobre 20%.
Técnica:
•Se fija el frotis al calor.
•Se cubre la preparación cristal violeta se
calienta a vapor fluente durante 1 minuto.
•Se lava con sulfato de cobre.
•Se seca a temperatura ambiente.
•Observar a 100X.
Reactivos:
•Solución Fucsina básica 0.15%.
•Solución acuosa de sulfato de cobre 20%.
Técnica:
•Se fija el frotis al calor.
•Se cubre la preparación Fucsina básica se
calienta a vapor fluente durante 1 minuto.
•Se lava con sulfato de cobre.
•Se seca a temperatura ambiente.
•Observar a 100X.
Reactivos:
(Nigrosina al 10% + formol0.5%)
Azul metileno de Loeffer o Safranina
Técnica:
•Mezclar una gota de nigrosina al 10% que esta
conservado con formol 0.5% y dejar 1 minuto
• Se seca y fija el frotis al calor.
•Agregar el contracolor: safranina o azul metileno
Loeffer durante 2 minuto.
•Se lava con agua destilada
•Se seca a temperatura ambiente.
Cápsula: transparente
Fondo: oscuro
Cuerpo bacteriano no azul o rojizo
TINCION NEGATIVA (TINTA CHINA)
Reactivos:
• Tinta china Pelikan
Cápsula: transparente
Fondo oscuro
TINCIÓN DE CAPSULAS
COLORACION WRIGHT
Wright
Lavar Sorensen
Lavar agua
Cápsula: transparente
Fondo: celeste
Cuerpo bacteriano: azul
LIBROS TEORIA
• INGRAHAM I
• KONEMAN
• TELLO
• MC FADDIN MADDIN
• PRESKOTT
COCOS GRAMPOSITIVOS EN CADENAS
Streptococcus
COCOS GRAMPOSITIVOS EN TETRADAS
Micrococcus
COCOS GRAMPOSITIVOS EN RACIMOS
Staphylococcus
COCOS GRAMPOSITIVOS EN PAREJAS
DIPLOCOCOS GRAMPOSITIVOS
Diplococcus pneumoniae
BACILOS GRAMPOSITIVOS SIN ESPORA
Lactobacillus
BACILOS GRAMPOSITIVOS CON ESPORA
Bacillus anthracis
BACILOS GRAMPOSITIVOS CON ESPORA
Clostridium
COCOS GRAMNEGATIVOS EN PAREJAS
DIPLOCOCOS GRAMNEGATIVOS
Neisseria
BACILOS GRAMNEGATIVOS
Escherichia coli
Enterobacter
Pseudomona
COCOBACILOS GRAMNEGATIVOS
ACINETOBACTER
BRUCELLA
BACILO GRAMNEGATIVO ESPIRAL
Campylobacter
ESPIRILOS GRAMNEGATIVOS
Helycobacter pylori
ESPIROQUETAS GRAMNEGATIVAS
Treponema
BACILOS GRAMNEGATIVOS EN FORMA DE HUSO
Fusobacterium
BACILOS GRAMNEGATIVOS
PLEOMORFICOS
BACTEROIDES
ESPORAS E HIFAS GRAMPOSITIVAS
Candida