UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

Facultad de Ciencias básicas e ingenierías INFORME DE LABORATORIO

Departamento de Biología y Química BIOQUÍMICA
Área de Bioquímica

PRÁCTICA N° 6: REACCIONES DE RECONOCIMIENTO

DE CARBOHIDRATOS
David Fajardo (117004814)
Daniel Olivera (117004826)
Jesus Alvarez (117004502)

Facultad de ciencias básicas e ingenierías

Programa de ingeniería ambiental

OBJETIVOS

▪ Reconocer los carbohidratos mediante algunas reacciones características.

▪ Diferenciar los carbohidratos reductores y no reductores.
▪ Analizar algunas de las propiedades de los carbohidratos.

RESULTADOS Y ANÁLISIS

Tabla 1. Resultados prueba de Molisch

Reacción de Molisch Resultado Observaciones

Se observó un anillo color

violeta suave, no fue muy
Glucosa fuerte la coloración de este
anillo en la interface de la
solución.
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Figura1. Reacción de Molisch en hexosas

La reacción de Molish es una reacción que presenta la propiedad de teñir cualquier

carbohidrato presente en una disolución, el nombre de esta reacción se deriva en honor del
botánico austríaco Hans Molish.
Forma parte de la composición del reactivo de Molish el α-naftol el mismo que se lo utiliza
al 5 % en etanol de 96° por ello a temperatura ambiente en un tubo de ensayo se debe colocar
la muestra o solución problema más el reactivo de Molish posteriormente se adiciona ácido
sulfúrico (H2SO4) e inmediatamente aparece la formación de un anillo color violeta en la
interfase (10).

Tabla 2. Resultados de la prueba Benedict

Reacción de Resultado Observaciones
Benedict

Glucosa Positivo- color naranja.

Cantidad moderada de
azúcar reductor presente.

Positivo – color rojo ladrillo.

Fructosa Grandes cantidades de
azucares reductores
presentes.

Lactosa Positivo- color naranja con

precipitado azul. Cantidad
moderada-baja de azúcar
reductor.
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Negativo- azul. no es un
Sacarosa azúcar reductor .
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Figura 2. Reacción Benedict

La reacción de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su OH libre del
C anomérico), por lo cual nos dio un resultado en monosacáridos glucosa y fructosa positiva,
en disacáridos la lactosa positiva y la sacarosa negativo porque no es un azúcar reductor.

Tabla 3. Resultados prueba de Fehling

Reacción de Fehling Resultado Observaciones

Glucosa (F1) Positivo -color rojo ladrillo

Fructosa (F2) Positivo – color rojo ladrillo

Lactosa (F3) Positivo – color rojo ladrillo

Sacarosa (F4) Negativo – color azul

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Figura 3. Reacción Fehling

El reactivo de Fehling es un reactivo químico utilizado para diferenciar entre los grupos
funcionales carbohidrato y cetona solubles en agua, y como prueba para azúcares reductores
y azúcares no reductores, dándonos como positivos las azucares reductoras (glucosa, fructosa
y lactosa), estas azucares presentan un aldehído en su estructura el cual se oxida a ácido y se
reduce la sal de cobre en medio alcalino a óxido de cobre, formando un precipitado de color
rojo ladrillo; en el caso de la sacarosa el cual es un disacárido formado por una molécula de
glucosa y fructosa dio negativo ya que hubo presencia del grupo cetona el cual no puede
oxidarse.

Tabla 4. Resultados prueba de Barfoed

Reacción de Resultado Observaciones

Barfoed

Positivo – precipitado
Glucosa naranja en el fondo en un
tiempo de 5 minutos.

Positivo-precipitado
Fructosa naranja en el fondo a un
tiempo de 3 minutos y 9
segundos.

Negativo- color azul, se

Lactosa dejó a baño maría no se
observó ningún cambio.
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Negativo - color azul, se

Sacarosa dejó a baño maria no se
observó ningún cambio.

Reactivo de Barfoed principalmente se puede identificar azúcares reductores y también poder

diferenciar si la muestra de azúcar analizada es un monosacárido o disacárido esto se debe al
tiempo que se tarda la reacción. Los azucares reductores fueron la glucosa y sacarosa ya que
presentaron un precipitado de color naranja el cual indica la presencia característica del óxido
cuproso (Cu2O), y se determinó que se trataba de monosacáridos ya que el precipitado se
evidencio de 0-5 minutos; en el caso de la lactosa y sacarosa dio negativo ya que no
presentaron precipitado, lo cual demuestra que no son azucares reductoras, y son disacáridos
ya que se cedió a baño maria por más de 5 minutos y no reacciono. La reacción
correspondiente a la prueba de Barfoed para que obtengamos un resultado positivo es:
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RCOH + 2Cu+2 + 2H2O → RCOOH + Cu2O↓ + 4H+

Tabla 5. Resultados prueba Tollens

Reacción de Tollens Resultado Observaciones

Positivo – espejo de plata a los

Glucosa 35 segundos
aproximadamente

Fructosa Positivo – espejo de plata a los

35 segundos
aproximadamente.

Positivo -espejo de plata a los

Lactosa 5 minutos aproximadamente.

Negativo- color negro con un

poco de precipitado espejo de
Sacarosa plata, esto ocurrió a entre los
5 minutos y 7 minutos y no se
terminó de formar el espejo de
plata.

La reacción de Tollens es una reacción de oxidación, en donde se van a formar los espejos
de plata en las azucares con grupo aldehído (glucosa, fructosa y lactosa), estas azucares son
denominadas aldosas; el grupo aldehído se va a oxidar fácilmente debido a la existencia del
hidrógeno en su grupo funcional (R - C= O), los aldehídos se transforma en ácidos de igual
número de átomos de carbono; las cetonas no se pueden oxidar, por esta razón la sacarosa no
pudo formar en su totalidad el espejo de plata debido a que la sacarosa es la unión de una
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molécula de glucosa (aldosa) y la fructosa (cetosa), a razón de la cetosa

no se logró componer el espejo de plata.

Figura 4 . Reacción de Tollens

Tabla 6. Resultados prueba de Nylander

Reacción de Nylander Resultado Observaciones

Positivo- naranja- amarillo.

Cantidad moderada-baja de
azúcar reductor presente
Glucosa

Positivo – naranja-amarillo.
Fructosa Cantidad moderada-baja de
azúcar reductor presente.
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Lactosa Positivo – amarillo. Bajas

cantidades de azúcar
reductor presente.

Negativo- transparente
Sacarosa incoloro. azúcar no reductor

La prueba de Nylander es una prueba química que se utiliza para detectar la presencia de
azúcares reductores. La glucosa, fructosa y lactosa reduce el oxinitrato de bismuto a bismuto
en condiciones alcalinas. Cuando el reactivo de Nylander, que consiste en nitrato de bismuto,
tartrato de sodio y potasio e hidróxido de potasio , se agrega a una solución con azúcares
reductores, produciendo un color de acuerdo con la cantidad de azúcar reductor presente.

Figura 5. Interpretación de azucares reductores según el color resultante

DISCUSIÓN
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Prueba de Molisch

La reacción Molisch-Udransky dio positiva al observarse una coloración violeta (no muy
fuerte) en la mezcla, también en su parte superior contenía un anillo que sobresalía de color
violeta. La prueba de molisch es una prueba cualitativa, en la cual solo sabemos si la solución
(o muestra problema) contiene glúcidos o no, es decir, si la mezcla contiene algún
carbohidrato. No podemos identificar que carbohidrato es, ni podemos saber si es
monosacárido, disacárido, polisacárido. Por lo tanto no podemos identificar si es un azúcar
reductor o no reductor.
En la reacción con la solución de glucosa, se provocó una deshidratación del azúcar, de la
molécula de azúcar, provocando así que sea menos cargada, por lo tanto más liviana y se vea
en la parte superior de la mezcla, además el reactivo molisch contiene α-naftol lo cual
provoca que el anillo de furfural o hidroximetilfurfural y se forme de color purpura para la
identificación de estos.
Al realizar la prueba con glucosa, la formación del aro violeta, fue rápida, ya que es un solo
azúcar (sin saber la cantidad de concentración, ya que es una prueba cualitativa) el cual tuvo
que deshidratar. En lo cual depende cuanto demore en formar el aro, podemos señalar si se
trata de un monosacárido, disacárido o polisacárido (11).

Prueba de Benedict

La reacción benedict es una reacción de oxidación que nos ayudó al reconocimiento de los
azucares reductores. Al momento de mezclarse con la solución muestra, reduce el Cu2+,
gracias al efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) a su forma de Cu+, este ion se puede
observar de un color rojo ladrillo el cual nos representa que se encuentra un azúcar reductor.
De manera que, la glucosa, tomo en su parte superior una coloración naranja muy fuerte en
la parte superior de la solución, por lo cual nos afirma que es un azúcar reductor, la solución
no toma la en su totalidad la coloración, debido a que no se dejó reposar un poco más la
solución, en teoría es correcto ya que la glucosa es un monosacárido y es considerado un
azúcar reductor gracias su grupo carbonilo libre.
La fructosa, fue la mezcla que se posó de un color naranja fuerte en su totalidad, fue la
mezcla que sin duda (según la teoría) nos da positivo, esto en teoría es cierto ya que la
fructosa es un monosacárido y es considerado un azúcar reductor fuerte, gracias a su grupo
carbonilo libre.
La lactosa, tuvo en la mezcla una leve coloración de un naranja claro, esto se posó en la parte
superior de la mezcla, por lo cual es positivo para un azúcar reductor. La lactosa es un
disacárido formado por los azucares galactosa y glucosa, y es considerado teóricamente
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como un azúcar reductor (12), en la reacción con la solución benedict,

este último es capaz de oxidar el cobre o el Cu2+ de la lactosa.
Y en el caso de sacarosa, fue una solución que no cambio de color, se mantuvo en la
coloración azul, la cual, con la solución benedict solo representa que tiene un grupo Cu2+
presente. Por lo cual la sacarosa no es un azúcar reductor, y esto concuerda con la teoría
(13), ya que es un disacárido (azúcar de mesa) formado por los monosacáridos glucosa y
fructosa. Además la sacarosa no posee ningún grupo carbonilo libre, y esto es lo que
convierte un azúcar en un azúcar reductor.

Prueba de Fehling

La prueba de fehling es una reacción en la que podemos determinar si una solución es

reductora o no. Es un reactivo que está conformado por dos soluciones acuosas, sulfato de
cobre cristalizado y tartrato mixto de potasio y sodio. El reactivo al encontrarse con una
solución o muestra que contenga un azúcar reductor, va a oxidar el grupo carbonilo y lo va a
convertir en un ácido. También se reduce la sal de cobre, por lo cual se forma en el precipitado
una coloración rojiza (positivo para azúcar reductor).
En la práctica, la solución que contenía glucosa, tomo una coloración roja en la totalidad de
la muestra, con lo cual se afirma que es un azúcar reductor. El reactivo de fehling pudo
identificar el grupo carbonilo libre y lo oxido, de la misma manera, redujo la sal de cobre
convirtiéndolo en oxido de cobre, para tomar la coloración rojiza. Teóricamente la glucosa
es el azúcar reductor más conocido (14), por lo tanto la prueba se realizó bien.
En la prueba con fructuosa, la solución tomo de la misma forma que la glucosa una
coloración rojiza en su totalidad de la solución, su coloración es más fuerte que la que tuvo
la solución de glucosa, eso es debido a la cantidad de azúcar que se manifiesto en cada
precipitado. La solución de fructuosa es positiva, eso quiere decir que el reactivo de fehling
pudo identificar el grupo carbonilo libre y oxidarlo. Teóricamente la fructuosa es uno de los
azucares reductores fuertes (14), por lo cual también la coloración rojiza fuerte.
En la prueba con lactosa, la solución obtuvo un color azul que tendía a ser rojo. Por lo que
podemos identificar presencia de azúcar reductor, no se manifiesta de manera fuerte
debido a una mala preparación del reactivo o mala elaboración de la mezcla con el reactivo.
El reactivo fehling pudo identificar algún alcalino libre y oxidarlo, por la poca coloración
rojiza que se observa. La lactosa es un azúcar considerado como reductor teóricamente (14),
no es uno de los más fuertes, pero es un azúcar reductor. Por lo cual la prueba o mezcla de la
solución de lactosa y el reactivo fehling se elaboró mal.
Y en la prueba con sacarosa, el precipitado tomo un color azul, lo cual solo nos indica
presencia de un azúcar. Con el reactivo de fehling, la sacarosa no presento grupo alcalino
libre, y por ello el reactivo de fehling no reacciono debidamente. La sacarosa con la prueba
de fehling es negativa para azúcar reductor. Teóricamente la sacarosa es un disacárido
conformado por glucosa y fructuosa. La sacarosa es considerada como un azúcar no reductor
ya que no posee grupo alcalino libre y tampoco reaccionan con otras moléculas (15).
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Prueba Barfoerd

Esta prueba se realizó con muestras de glucosa 5%, fructosa 5%, sacarosa 5% y lactosa 5%.
Es una prueba parecida a la Benedict y Fehling, por lo cual la evidencia es la formación
de un precipitado rojo. La prueba Barfoerd identifica los azucares reductores y diferencia
los monosacáridos de los disacáridos basándose en el tiempo en que se efectué la reacción
y la coloración rojiza o formación de un aro rojo de manera visible.
EL tiempo que tarda en evidenciarse la reacción puede variar debido a la reacción del acetato
de cobre perteneciente al reactivo de Barfoed con cada uno de los azúcares en usados. Pero
en la práctica realizada no se midió el tiempo de reacción, solo se tomó en cuenta la
formación de los colores.
En los tubos que contenían Glucosa y Fructosa respectivamente, se formó un precipitado
color rojo, lo cual nos indica que son dos azucares monosacáridos reductores de acuerdo
a la información consultada sobre carbohidratos y la prueba de Barfoed. En el caso de los
tubos que contenían Lactosa y Sacarosa no evidenciamos ninguna reacción después de 20
minutos, aunque conocemos que son dos disacáridos podemos inferir que al no haber
reacción con el reactivo de Barfoed no se pueden clasificar como azucares reductores. Según
(16). Se encontró que efectivamente la Sacarosa está clasificada como un azúcar disacárido
no reductor, pero en el caso de la Lactosa nos muestran que se clasifica dentro de los azucares
reductores, comparando con nuestro resultado negativo podemos determinar que la causa
fueron diferentes factores como, un mal estado del reactivo e incluso mala preparación de
nuestra muestra.

Prueba tollens

Este procedimiento sirve para identificar la presencia de azúcares reductores que son
oxidados por plata amoniacal en medio básico obteniendo como subproducto plata metálica
sólida que forma una superficie reflejante en el fondo del tubo de ensayo (espejo de plata) al
obtener una reacción como la descrita anteriormente se infiere que el grupo funcional del
carbohidrato es un aldehído. La reacción para obtener un resultado positivo en esta prueba es
la siguiente:

En la imagen encontrada en la tabla 5, se observan los cuatro tubos correspondientes a la

Sacarosa, Glucosa, Fructosa y Lactosa, donde se observó que estos tres últimos reaccionaron
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de manera positiva formando el efecto de espejo de plata de manera

vistosa. En el caso de la Fructosa aunque su grupo funcional es una
cotosa, se logra la reacción debido a que en el desarrollo de la práctica realizamos una
disolución básica que permite a la fructosa isomerizarse y pasar a ser una mezcla de aldosas
las cuales son capaces de

reacción con el reactivo de Tollens. Sacarosa no evidenciamos reacción en cambio la

solución se tornó de un color oscuro, esto podemos relacionarlo al grupo cetosa presente en
este carbohidrato que no permite la oxidación completa y por ende no reacciona
adecuadamente con el reactivo de Tollens.

Prueba Nylander

La prueba de Nylander tiene el mismo principio de la reacción de Benedict, busca identificar

azucares reductores, con la excepción que en lugar de cobre el catión a ser reducido es
bismuto el cual pasa de su estado de oxidación Bi+3 a Bi0, consiste en nitrato de bismuto,
tartrato de sodio y potasio e hidróxido de potasio y cuando se agrega se a una solución con
azúcares reductores, se forma un precipitado negro de bismuto metálico. La glucosa o
fructosa reduce el oxinitrato de bismuto a bismuto en condiciones alcalinas. Para identificar
la presencia de azucares reductores se usan los mismos parámetros colorimétricos que en la
prueba Benedict, por tanto, todos los carbohidratos son considerados azucares reductores a
excepción de la sacarosa, de la cual se obtuvo una solución incolora.

Tabla final
En las siguientes tablas se ilustrara, de cada prueba, los azucares que dieron positivo para
reductores (color verde) y los que no dieron positivo para azúcar reductor (color naranja).

Tipo de prueba Azúcar Presencia Glúcidos

Molisch Glucosa Positivo

Tipo de prueba Azúcar Azúcar reductor o no

reductor
Glucosa Reductor
Benedict Fructosa Reductor
Lactosa Reductor
Sacarosa No reductor
Fehling Glucosa Reductor
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Fructosa Reductor
Lactosa Reductor
Sacarosa No reductor
Barfoed Glucosa Reductor
Fructosa Reductor
Lactosa No reductor
Sacarosa No reductor
Tollens Glucosa Reductor
Fructosa Reductor
Lactosa Reductor
Sacarosa No reductor
Nylander Glucosa Reductor
Fructosa Reductor
Lactosa Reductor
Sacarosa No reductor

CONCLUSIONES
● La prueba molisch es una prueba cualitativa que identifica la presencia de glúcidos,
por lo cual solo se puede determinar si una mezcla es reductora o no, por la cantidad
de tiempo que demore en formarse el aro de color violeta.

● Gracias a la reacción de benedict hemos podido comprobar que la glucosa fructosa y

lactosa son azúcares reductores ya que en estas muestras se produjo la formación del
precipitado de óxido cuproso de color rojo anaranjado o amarillo, lo que se evidenció
en los resultados.

● En la prueba de fehling un azúcar es reductor por la formación de un precipitado de

color rojo ladrillo (óxido cuproso) y la decoloración de la solución.

● A través de la prueba de Tollens se logra evidenciar la presencia de grupos aldehídos

en los carbohidratos y aunque no de la misma manera también la de algunos grupos
cetona con isomerización especial como en el caso de la fructosa.

BIBLIOGRAFÍA
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(16) Moreano Pilatásig M., 2015. [En línea] Repositorio.uta.edu.ec.

Disponible en:
https://repositorio.uta.edu.ec/bitstream/123456789/10569/1/TESIS%20MAYRA%20
MOREANO%20(1).pdf [Consultado 30 de junio 2022].

(15) https://www.sabermas.umich.mx/archivo/articulos/267-numero-31/479-la-
sacarosa-el-dulce-de-las-plantas.html

(14) https://www.studocu.com/ec/document/universidad-de-las-americas-
ecuador/biologia-celular-y-molecular-medica-teoria/azucares-reductores-y-no-
reductores/5204821

(13) https://www.sabermas.umich.mx/archivo/articulos/267-numero-31/479-la-
sacarosa-el-dulce-de-las-plantas.html

(12) https://tecnal.com.br/es/blog/266_azucares_reductores_en_alimentos_y_bebidas

(11) https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-
i/carbohidratos/reaccion-de-molish

(10) https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-
i/carbohidratos/reaccion-de-molish

▪ CARBOHIDRATOS - LABORATORIOS DE BIOQUÍMICA. (s. f.). Google Sites:

Sign-in. https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-i/carbohidratos

▪ BIOQUIMICA. (s. f.). Google Sites: Sign-in.

https://sites.google.com/site/bioquia9/home

▪ (s. f.). D.E.A.

http://dea.unsj.edu.ar/quimica2/LABORATORIO%202%20GLUCIDOS.pdf
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