FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS Y BIOMÉDICAS

PROGRAMA MICROBIOLOGÍA

EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO DE BACTERIAS HALOTOLERANTES

PARA LA PRODUCCIÓN DE UN BIOINOCULANTE

Presenta:

Arnaldo José Serna De La Hoz

Profesor Tutor:

Zamira Elena Soto Varela

Roger Alexander Consuegra Rivera

Trabajo de investigación del programa de Microbiología

31-10-2023

BARRANQUILLA, ATLÁNTICO

REPÚBLICA DE COLOMBIA
RESUMEN

Las bacterias endófitas halotolerantes de manglar con características promotoras del

crecimiento vegetal pueden emplearse como bioinoculante para estimular el crecimiento en
plantas bajo factores de estrés abióticos como la sequía y la salinidad en suelos. La
selección de una cepa bacteriana que cumpla con lo anterior incluye calcular los parámetros
cinéticos asociados al crecimiento en los medios a emplear y evaluar la formación de
biopelícula, debido a que esto puede dificultar el escalado para la producción del
bioinoculante de la bacteria encapsulada en perlas de alginato. El objetivo del trabajo fue
evaluar el crecimiento de bacterias halotolerantes para la producción de un bioinoculante;
para ello se estandarizaron preinóculos de 9 cepas endófitas aisladas de manglares en dos
medios de cultivos: caldo LB y caldo TSB, el crecimiento de los inóculos y la producción
de biopelículas se evaluó con un lector de microplacas midiendo densidad óptica a 600 nm
por 24 a 48 h. La cepa C7 es la de mejor crecimiento con μ: 0.1567 h -1 y Td: 4.42 h en LB,
y μ: 0.1212 h-1 y Td: 5.71 h en TSB. No obstante, la cepa C3 presentó el mayor crecimiento
con μ: 0.1947 h-1, Td de 3.56 h y formación de biopelícula en LB y una μ de 0.2382 h -1 y un
Td de 2.90 h en TSB, presentando gráficas atípicas en ambos medios. Se infiere que la
producción de biomasa en las cepas evaluadas está influenciada por el medio de cultivo, la
formación de biopelícula y el tiempo de fase exponencial. Se pretende continuar el estudio
evaluando el crecimiento de la cepa C7 por 24 h, midiendo densidad óptica y haciendo
recuento de viables por la técnica de microdiluciones y microgota cada 60 minutos.

PALABRAS CLAVES

Bacteria endófita, cinética del crecimiento, lector de microplaca, bioinoculante, biopelícula.

ABSTRACT

Halotolerant endophytic bacteria from mangroves with plant growth-promoting

characteristics can be used as bioinoculants to stimulate plant growth under abiotic stress
factors such as drought and soil salinity. Selecting a bacterial strain that meets these criteria
involves calculating kinetic parameters associated with growth in the chosen media and
evaluating biofilm formation, as this can hinder the scaling-up for the production of
encapsulated bacteria in alginate beads. The objective of the study was to evaluate the
growth of halotolerant bacteria for the production of a bioinoculant. To do this, pre-
inoculants of 9 endophytic strains isolated from mangroves were standardized in two
culture media: LB broth and TSB broth. Inoculum growth and biofilm production were
assessed using a microplate reader by measuring optical density at 600 nm over 24 to 48
hours. Strain 7 exhibited the best growth with μ: 0.1567 h-1 and Dt: 4.42 h in LB, and μ:
0.1212 h-1 and Dt:
5.71 h in TSB. However, strain 3 showed the highest growth with μ: 0.1947 h-1, Dt of 3.56
h, and biofilm formation in LB, and a μ of 0.2382 h-1 and a Dt of 2.90 h in TSB, displaying
atypical growth curves in both media. It is inferred that biomass production in the evaluated
strains is influenced by the culture medium, biofilm formation, and the time of exponential
phase. The study intends to continue by evaluating the growth of strain 7 for 24 hours,
measuring optical density, and performing viable counts using the microdilution and
microdilution methods every 60 minutes.

KEYWORDS

Endophytic bacteria, growth kinetics, microplate reader, bioinoculant, biofilm.

1. INTRODUCIÓN

Los manglares son ecosistemas costeros tropicales y subtropicales caracterizados por

árboles y arbustos que crecen en áreas inundadas por mareas y limitados a suelos arenosos
o limo- arcillosos en bahías, lagunas, canales de mareas y desembocaduras de ríos. Estos
ecosistemas varían en tamaño, desde franjas estrechas hasta extensos bosques (Gaxiola,
2011). Cabe destacar que la capacidad de las plantas de manglares para crecer y prosperar
en su exigente ecosistema está influenciada en gran medida por la microbiota presente en la
endosfera y en la rizosfera de dichas plantas (Kaleh et al., 2022). Las bacterias que tienen
un efecto positivo en el crecimiento y desarrollo de las plantas, son conocidas a nivel global
como Bacterias Promotoras del Crecimiento Vegetal (BPCV) (Bonilla Buitrago et al.,
2021). Estas bacterias pueden ser utilizadas como inoculantes biológicos debido a su efecto
beneficioso en las plantas. Pudiendo ser; directo, a través de la fijación biológica del
nitrógeno, solubilización de fosfatos y producción de sustancias estimuladoras como el
ácido abscísico, ácido
indolacético y ácido giberélico, o una modulación de hormonas vegetales o indirecto, a
través de la producción de sideróforos, enzimas hidrolíticas, antibióticos y formación de
biopelículas (Bonilla Buitrago et al., 2021). A partir de ecosistemas de manglar se han
realizado estudios enfocados en identificar, aislar y determinar bacterias con características
promotoras del crecimiento vegetal para determinar sus posibles aplicaciones
biotecnológicas. Devainai et al., (2014) aislaron bacterias endófitas de los géneros Bacillus
y Pantoea a partir de Rhizophora apiculata donde se probaron en Oriza sativa (Devainai et
al., 2024). Kaleh et al., (2022) aislaron bacterias halotolerantes de la rizosfera y endosfera
de los géneros Bacillus y Pseudomonas de tres especies de mangles, dónde probaron la
promoción en salinidad en Musa acuminada (Kaleh et al., 2022). Soldan et al., (2019)
aislaron bacterias endófitas pertenecientes a los géneros de Staphylococcus, Rhizobium,
Micrococcus, Enterococcus, Gordinia, Bacillus y Acinetobacter a partir de propágulos de
mangles, evaluaron la promoción del crecimiento en Oriza sativa y Hordeum vulgare
(Soldan et al., 2019). Lavanya et al., (2022) aislaron bacterias endófitas halotolerantes
pertenecientes a los géneros de Bacillus, Exiguobacterium, Salinicola, Pseudomonas,
Enterobacter y Vibrio a partir de Avicennia officinalis L, determinando características
BPCV en los aislados (Lavanya et al., 2022).

Las interacciones entre plantas y bacterias endófitas son objeto de gran interés debido a su
contribución significativa en el incremento de la producción de cultivos y en la mejora de la
resistencia a la sequía (Finkel et al., 2017). Un biofertilizante es un producto que contiene
microorganismos vivos que puede emplearse en el suelo, plantas o semillas para promover
el crecimiento vegetal aumentando la disponibilidad de nutrientes (Vessey, 2003). Se han
utilizado varios materiales y métodos para producir biofertilizantes encapsulados como:
poliacrilamida, alginato de sodio (ALG), ALG–ácido húmico, ALG-almidón, entre otros
(Riseh et al., 2021). Antes de desarrollar cualquier aplicación biotecnológica de una BPCV
para la producción de un biofertilizantes con la encapsulación en perlas de alginato es
importante la evaluación del crecimiento para comprender la fisiología del microorganismo
en cuestión. Adicionalmente, permite optimizar condiciones iniciales de cultivo,
seleccionar las cepas de mejor crecimiento y garantizar la calidad y viabilidad en la
producción del bioinoculante.
Los estudios microbiológicos generalmente inician con el cultivo de células bacterianas y el
análisis de las curvas de crecimiento bacteriano, que reflejan un aspecto esencial de la
fisiología bacteriana (Kurokawa & Ying, 2017). El estudio del crecimiento microbiano
generalmente se adquiere midiendo de manera cronometrada el crecimiento celular en
cultivo, ya sea determinando la turbidez óptica o conteo de unidades formadoras de
colonias (UFC) (Kurokawa & Ying, 2017). A diferencia de otros métodos tradicionales que
emplean fotómetros y cubetas, la utilización de lectores de microplacas ha adquirido mayor
interés debido a que es menos laborioso y más eficiente. Sin embargo, la interpretación de
los datos obtenidos con lectores de microplacas puede ser un proceso más complejo
(Rogers et al., 2022). En este estudio se evaluó el crecimiento de 9 cepas bacterianas
endófitas halotolerantes aisladas de diferentes ecosistemas de manglar del departamento del
Atlántico y Bolívar en caldo LB y TSB para la producción de un bioinoculante.

2. MATERIALES Y MÉTODOS

2.1 Cepas bacterianas y medios de cultivo

Se utilizaron 9 cepas endófitas halotolerantes con algunas características promotoras del

crecimiento vegetal aisladas de los ecosistemas de manglar de Galerazamba (Bolívar),
Puerto Caimán y Ciénaga del Mallorquín (Atlántico) (Tabla 1). Estas se encontraban en
conservación con glicerol al 30% a -80 °C en el Laboratorio de Biotecnología del Distrito
de Conocimiento e Innovación, Eureka. Las cepas fueron reactivadas en agar OGYE. Para
los ensayos de evaluación del crecimiento, se emplearon los medios de cultivos: agar
tripticasa de soya (TSA), caldo tripticasa de soya (TSB), agar oxitetraciclina-glucosa-
extracto de levadura (OGYE) y caldo Luria Bertani (LB). La preparación de los medios se
realizó siguiendo las indicaciones del fabricante.

Cepa Codificación Lugar

C1 C1NG02 Galerazamba

C2 C1NPC03 Puerto Caimán

 C3 C3HPC02 Puerto Caimán

C4 C1HMA02 Ciénaga del Mallorquín

C5 C4PG02 Galerazamba

C6 C3TMA03 Ciénaga del Mallorquín

C7 C2HMA01 Ciénaga del Mallorquín

C8 C1TMA03 Ciénaga del Mallorquín

C9 C2PG02 Galerazamba

Tabla 1. Codificación de las 9 cepas en estudio y lugar de aislamiento. Elaboración propia.

2.2 Preparación del preinóculo

Se tomó 1 colonia (replica biológica) para cada una de las 9 cepas presentes en agar OGYE
y agar TSA, y luego se inocularon en tubos con 5 mL caldo LB y 10 mL de caldo TSB,
respectivamente. Las condiciones de inoculación fueron: 150 rpm a 37°C durante 12 h para
caldo LB y 24 h para caldo TSB. Adicionalmente se realizó un subcultivo en TSA de las
cepas C2, C3, C4, C7 y C8, se inoculó 1 colonia en 10 mL de caldo TSB bajo las mismas
condiciones. Todo el proceso de preparación del preinóculo en los dos medios de cultivos
se empleó por duplicado de cada cepa (2 réplicas biológicas). De cada preinóculo en caldo
LB y TSB, se tomaron 200 uL por triplicado con el respectivo blanco en microplaca de 96
pozos y se midió la densidad óptica (DO) a 600 nm en lector de microplacas Multiskan
SkyHigh.

2.3 Ensayo del crecimiento en microplacas

2.4

Se realizo la evaluación del crecimiento bacteriano en dos medios de cultivo. En el caso del
LB, de cada RB de los inóculos en LB se realizó un screening de 26 h por sextuplicado en
microplaca de 96 pozos, con 2.5% y 5% de inóculo respectivamente para un volumen final
de 200 uL con el respectivo blanco en lector de microplaca Multiskan SkyHigh
estableciéndose mediciones cada 10 min, con un 1 min de agitación antes de cada lectura
(Figura 1). En el caso del TSA, a partir de una RB de los inóculos en TSB de la cepa C2,
C3, C4, C7 y C8 se realizó un screening de 48 h por cuadruplicado de cada RB en
microplaca
de 96 pozos con inoculo al 5% estableciéndose mediciones cada 30 min, con 1.5 min de
agitación antes de cada lectura (Figura 2).

Figura 1. Metodología implementada en la siembra y preparación de preinóculos,

estandarización del inóculo y screening de las 9 cepas en caldo LB.

Figura 2. Metodología implementada en la siembra y preparación de preinóculos,

estandarización del inóculo y screening de las cepas C2, C3, C4, C7 y C8 en caldo TSB
2.5 Análisis de datos

En el análisis de datos para la extrapolación de los valores de DO a g/L se utilizaron datos

experimentales de un estudio donde determinaron el valor en peso seco con la medición de
DO de E. coli en microplaca (datos no publicados).

Fórmulas:

Velocidad específica de crecimiento

(𝐿𝑛 𝑁2 − 𝐿𝑛 𝑁1)
𝜇=
𝑡2 − 𝑡1
Tiempo de duplicación

𝑇𝑑 = 𝐿𝑛 (2)/𝜇

Conversión datos experimentales g/L

1𝑔
81.734 𝑚𝑔
∙ 1000 𝑚𝐿
∙ = 0.82 𝑔/𝐿
100 𝑚𝐿 1000 𝑚𝑔 1𝐿

0,82 g/L por 1 DO

3. RESULTADOS

3.1 Evaluación preliminar en tubos de ensayo

De un total de 18 inóculos de 9 cepas preparados en 5 mL de caldo LB se observaron

biopelículas en 8 tubos correspondientes a las cepas C1, C3, C5, C6 y C9, lo cual se
confirmó mediante la formación de curvas de crecimiento atípicas en el ensayo de
microplaca (Gráfica 1), mientras que las cepas C2, C4, C7 y C8 presentaron crecimiento
según lo esperado con turbidez y la no formación de biopelícula.

En caldo TSB inicialmente se realizó un ensayo preliminar donde se inocularon 2 réplicas

biológicas de cada cepa en 10 mL de caldo, pero de nuevo se evidenció la formación de
biopelícula en las cepas C1, C5, C6 y C9 confirmándose con lecturas por duplicado de los
preinóculos en 24 y 48 h dónde se registraron valores menores en la lectura a 48 h de las
cepas formadoras de biopelículas. Acorde a los anteriores resultados, se prepararon
preinóculos de las cepas C2, C3, C4, C7 y C8 en 10 mL TSB debido a que presentaron
crecimiento según lo esperado con turbidez y sin formación de biopelícula. Además de ser
novedad la inclusión de la cepa 3 debido a que no generó biopelícula en TSB, por esa razón
se incluyó el análisis de esta para los dos medios. La Figura 3 muestra a las 9 cepas en
caldo LB.

1,4

1,2 Cepa 1
Cepa 3
1
Cepa 5
0,8
DO

Cepa 6
0,6
Cepa 9
0,4

0,2

0
0 5 10 15 20 25 30
Tiempo h

Gráfica 1. Curvas de crecimiento atípicas por parte de las cepas C1, C3, C5, C6 y C9 en
caldo LB, debido a la formación de biopelícula.

Figura 3. 9 cepas en 5 mL de caldo LB ordenadas de forma numérica dónde la cepa C1 se

ubica en la esquina superior izquierda, se evidencia biopelícula en las cepas C1, C3, C5, C6
y C9.
Se esperaba que la DO a 600 nm de cada cepa en caldo LB a 12 h alcanzará una DO igual o
superior a 0.5 para ajustar diluyendo con el respectivo medio, sin embargo como ninguna
cepa alcanzó la DO esperada no se realizó estandarización debido a que la DO estaban
entre
0.15 y 0.25 se continuó con el ensayo en microplaca. Lo que se hizo montar inóculos al
2,5% y 5% para saber si afectaba el crecimiento de las cepas, al final se seleccionó inóculo
al 5% para garantizar un mayor volumen de inóculo al momento de escalar el proceso
(Gráfica 2). En caldo TSB tampoco se alcanzó una DO superior a 0.5 por ende no se realizó
estandarización, se utilizó inoculo al 5 % y la DO de las cepas C2, C3, C4, C7 y C8 estaban
entre 0.28 y 0.38 lo que permitió continuar el ensayo en microplaca.

0,9 Cepa 2 Ino 2.5%

0,8 Cepa 2 Ino 5 %
0,7 Cepa 4 Ino 2.5%
0,6 Cepa 4 Ino 5%
0,5 Cepa 7 Ino 2.5%
DO

0,4 Cepa 7 Ino 5%

0,3 Cepa 8 Ino 2.5%
0,2 Cepa 8 Ino 5%
0,1
0
0 5 10 Tiem15po 20 25 30
h
Gráfica 2. Curvas de crecimiento de las cepas C2, C4, C7 y C8 en LB con dos porcentajes
de inóculos al 2.5% y 5%, dónde se observa similitudes entre las gráficas con los dos
porcentajes de inóculos.

3.3 Evaluación del crecimiento en microplacas

En caldo LB la cepa C3 presentó un crecimiento atípico, dónde se observa un crecimiento

inicial rápido y luego un decaimiento, seguido de un crecimiento hasta alcanzar un
producción de biomasa de 0.95 g/L en 24 h (Gráfica 4a). Las cepas C2, C4, C7 y C8
presentaron gráficas de crecimiento típicas (Gráfica 3). Se determinó la velocidad
específica de crecimiento (μ) y tiempo de duplicación (Td) de las cepas C2, C3, C4, C7 y
C8, se determinó que la cepa C3 con un μ de 0.1947 h -1 y Td 3.56 h fue la que presentó un
mayor crecimiento (Tabla 2). Dentro de las cepas que no presentaron gráficas atípicas la
cepa 2 presentó una μ 0.1815 h-1 y Td 3.81 h siendo la de segunda cepa de mayor
crecimiento pero
sin ser la que mayor biomasa generó. En cambio la cepa C7, presentó una μ 0.1567 h-1 , y
Td de 4.42 h, siendo la que mayor biomasa produjo entre las cepas con curvas de
crecimiento típicas con 0.65 g/L en 24 h (Grafica 3).

En caldo TSB se evidenció curvas de crecimiento típicas para las cepas C2, C4, C7 y C8
(Gráfica 4b), la producción de biomasa por las cepas C2, C3, C4, C7 y C8 fueron; 0.45 g/L,
0.5 g/L, 0.43 g/L, 0.47 g/L y 0.44 g/L respectivamente en 24 h ( Tabla 2). Se determinó μ y
Td de las todas las cepas, siendo la cepa C3 con una μ 0.2382 h -1 y un Td 2.9 h siendo la de
mejor crecimiento en caldo TSB, mientras que la cepa C7 fue la de menor crecimiento con
una μ 0.1212 h-1 y un Td 5.71 h (Tabla 2), aún así fue la que generó mayor biomasa entre
las cepas que presentaron curvas de crecimiento típicas con 0.47 g/L en 24 h. Se evidenció
que las cepas C2, C3, C7 y C8 generaron una mayor producción de biomasa en caldo LB
alcanzando 0.51 g/L, 0.95 g/L 0.65 g/L y 0.47 g/L respetivamente en 24 h (Tabla 2).

0,7

0,6

0,5

0,4
Cepa 2 LB
g/L

0,3 Cepa 4 LB
Cepa 7 LB
0,2
Cepa 8 LB

0,1

0
0 5 10 15 20 25 30
Tiempo h

Gráfica 3. Curvas de crecimiento generadas por las cepas C2,C4,C7 y C8 caldo LB donde
se puede evidenciar que la cepa C7 produjo una mayor cantidad de biomasa en 24 h
alcanzando 0.65 g/L en 24 h con una μ 0.1567 h-1 y Td de 4.42 h.
 a. b.
1
0,6
0,9
0,8 0,5
0,7
0,4 C2
0,6
g/L

0,5 C3

g/L
0,3
0,4 C4
0,3 0,2 C7
0,2
0,1 C8
0,1
0
0
0 5 10 15 20 25 0 5 10 15 20 25
Tiempo h Tiempo h
Gráfica 4. a) Curvas generadas por las cepas C2, C3, C4, C7 y C8 en LB, la cepa C3
presentó una producción de biomasa de 0.57 g/L en 12 h, y una μ 0.19 h -1, mientras que la
cepa C7 una μ 0.15 h-1. b) Curvas generadas por las cepas C2,C3,C4, C7 y C8 en TSB, la
Cepa C3 y C7 presentaron una producción de biomasa de 0.5 y 0.47 g/L respectivamente.

Cepa Medio μ (h-1) Td (h) 12 h (g/L) 24 h (g/L)

LB 0.18 3.8 0.32 0.51
C2
TSB 0.169 4.1 0.16 0.45
LB 0.19 3.56 0.57 0.95
C3
TSB 0.23 2.9 0.49 0.5
LB 0.09 7.45 0.26 0.4
C4
TSB 0.13 5.22 0.14 0.43
LB 0.15 4.42 0.36 0.65
C7
TSB 0.12 5.71 0.13 0.47
LB 0.10 6.38 0.28 0.47
C8
TSB 0.16 4.09 0.23 0.44
Tabla 2. Velocidad específica de crecimiento μ h-1, tiempo de duplicación Td y g/L
alcanzado a las 12 y 24 h en LB y TSB. Elaboración propia.
 4. DISCUSIÓN

En este estudio se evaluó el crecimiento de 9 cepas endófitas halotolerantes para conocer el

comportamiento de estas en caldo LB y caldo TSB. Se realizaron evaluaciones preliminares
dónde se empleó volúmenes y tiempos distintos en la preparación de preinóculos, se
determinó la velocidad específica y tiempo de duplicación de las cepas. Además se
evidenció formación de biopelículas para las cepas C2, C3, C5, C6 y C9 en caldo LB, y en
TSB se registró también biopelícula para esas cepas pero en menor proporción excepto la
C3 debido a que no presentó biopelícula en TSB. Teniendo en cuenta la dificultad que
representa evaluar biopelículas en microplacas, debido a la poca reproducibilidad de los
datos (Allkja et al., 2021). Además de que sería un inconveniente en la encapsulación de
células en perlas de alginato para la producción de un bioinoculante. También se ha
reportado la formación de biopelícula por parte de cepas de Bacillus subtilis con una mayor
proporción en caldo LB en condiciones estáticas, respecto a otros medios como caldo
triptona de soya o caldo nutritivo (Sarti et al., 2019). El estudio cinético del crecimiento
microbiano es herramienta que permite estimar y definir relaciones entre las respuestas
microbianas que se monitorean en la producción de microorganismos biofertilizantes
(Sepúlveda & Aguilar, 2014).

Teniendo en cuenta la importancia del medio de cultivo a emplear para la producción de un

bionoculante y la influencia del mismo en la cinética del crecimiento, otros autores han
evaluado el crecimiento de las bacterias Sphingomonas Paucimobilis y Bacillus
megaterium en un medio definido y uno modificado con la inclusión de melaza para la
producción de un bioinoculante en un biorreactor de 3,37 L dónde calcularon la µ y la
concentración de biomasa en máxima fase exponencial, determinaron que el medio
modificado aumento la µ y concentración de biomasa de las bacterias; ciertamente lograr
una mejor producción de biomasa permite reducir costos de producción para un escalado en
la producción del inoculante (Contreras et al., 2011). La determinación de la cinética de
crecimiento de un microorganismo en particular, es punto de partida para la producción a
gran escala o con un enfoque industrial (Rodríguez, 2018). En un estudio realizado por
Rodríguez., (2018) evaluó la cinética de crecimiento de rizobacterias promotoras del
crecimiento vegetal para la producción masiva de: Acinetobacter calcoaceticus, Serratia
marcescens, Pseudomonas protegens, Pseudomona veronii en distintos medios de
cultivos donde determinaron la
velocidad especifica de crecimiento (µ), tiempo de generación (G), y duración de la fase de
latencia (λ), además de la concentración celular durante la fase estacionaria para lograr la
mayor biomasa posible (Rodríguez, 2018). En otro estudio llevado a cabo por Rivera.,
(2008) optimizó un medio de cultivo y evaluó la cinética de crecimiento de Azospirillum
brasilense para la producción de un bionoculante, con el medio optimizado y un medio
referencia determinando la velocidad específica de crecimiento y tiempo de duplicación de
la bacteria en los dos medios (Rivera, 2008). Ciertamente evaluar el crecimiento
microbiano es esencial para la producción de un bionoculante. Además, es complementario
a un proceso de optimización de condiciones y diseño de medios de cultivos para obtener el
máximo rendimiento de biomasa posible aumentando la viabilidad de la producción a gran
escala.

Teniendo en cuenta que se realizó una evaluación preliminar en microplaca, donde se

puedo evidenciar que la mayoría de cepas crecieron mejor en LB, y que el inoculó a 12 h x
150 rpm a 37 °C condujo a una mayor producción de biomasa inicial para las cepas C2, C3,
C4, C7 y C8 (Gráfica a), además se determinó que el uso de inoculó al 5% no afecta el
crecimiento de las cepas (Gráfica 2), ciertamente se han establecido condiciones y
parámetros para poder implementar un ensayo en Erlenmeyer con un volumen efectivo de
100 mL con caldo LB donde se implementará la técnica de microdiluciones y microgota
para el conteo de viables cada 60 min con la cepa C7, debido a que fue la de mejor
crecimiento alcanzando una biomasa de 0.65 g/L a 24 h sin la formación de biopelícula.

5. CONCLUSIONES

La formación de biopelículas por parte de algunas cepas condujo a registros variables de la

DO en el lector de microplaca, dificultando la evaluación del crecimiento microbiano en
cepas formadoras de biopelícula. La formación de biopelículas se vio influenciada por el
tipo de medio utilizado dónde se evidenció visualmente una mayor formación en caldo LB.
Además la cepa que mejor se comporta en los dos medios es la cepa C7, no registra el
mayor crecimiento pero es la cepa que más biomasa produce en el tiempo de las no
formadoras de biopelícula, lo que puede un beneficio en la encapsulación en perlas de
alginato para la producción de un bioinoculante. Sin embargo, la medición de la densidad
óptica no distingue
entre células vivas y células muertas por esa es importante un segunda evaluación del
crecimiento mediante el conteo de células viables.

6. REFERENCIAS

1. Allkja, J., Van Charante, F., Aizawa, J., Reigada, I., Guarch-Pérez, C., Vazquez-
Rodriguez, J. A., Cos, P., Coenye, T., Fallarero, A., Zaat, S. A. J., Felici, A., Ferrari, L.,
Azevedo, N. F., Parker, A. E., & Goeres, D. M. (2021). Interlaboratory study for the
evaluation of three microtiter plate-based biofilm quantification methods. Scientific
Reports, 11(1). https://doi.org/10.1038/s41598-021-93115-w
2. Bonilla Buitrago, R. R., González de Bashan, L. E., Pedraza, R. O., Estrada Bonilla, G.
A., & Pardo Díaz, S. (2021). Bacterias promotoras de crecimiento vegetal en sistemas
de agricultura sostenible. In Bacterias promotoras de crecimiento vegetal en sistemas de
agricultura sostenible. https://doi.org/10.21930/agrosavia.analisis.7405019
3. Contreras Roa, B., López Pérez, S., Reyes, J. P., y Cárdenas-Caro, D. (2011).
Producción de un inoculante a base de rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal.
Respuestas, 16(2), 20–29. https://doi.org/10.22463/0122820X.382
4. Deivanai, S., Bindusara, A. S., Prabhakaran, G., & Bhore, S. J. (2014). Culturable
bacterial endophytes isolated from Mangrove tree (Rhizophora apiculata Blume)
enhance seedling growth in Rice. Journal of Natural Science, Biology and Medicine,
5(2), 437– 444. https://doi.org/10.4103/0976-9668.136233
5. Finkel, O. M., Castrillo, G., Paredes, S. H., González, I. S., & Dangl, J. L. (2017).
Understanding and exploiting plant beneficial microbes. Current Opinion in Plant
Biology, 38, 155-163. https://doi.org/10.1016/j.pbi.2017.04.018
6. Gaxiola, J. M. D. (2011). Una revisión sobre los manglares: características,
problemáticas y su marco jurídico. Importancia de los manglares, el daño de los efectos
antropogénicos y su marco jurídico: Caso Sistema Lagunar de Topolobampo. Ra
Ximhai, 355-370. https://doi.org/10.35197/rx.07.03.2011.05.jd
7. Kaleh, A. M., Singh, P., Mazumdar, P., Chua, K. O., & Harikrishna, J. A. (2022).
Halotolerant rhizobacteria isolated from a mangrove forest alleviate saline stress in
Musa
 acuminata cv. Berangan. Microbiological Research, 265(August), 127176.
https://doi.org/10.1016/j.micres.2022.127176
8. Kurokawa, M., & Ying, B. (2017). Precise, high-throughput analysis of bacterial
growth. Journal of Visualized Experiments, 127. https://doi.org/10.3791/56197
9. Lavanya, J., Deepika, D. S., & Sridevi, M. (2022). Screening and Isolation of Plant
Growth Promoting, Halotolerant Endophytic Bacteria from Mangrove Plant Avicennia
officinalis L. at Coastal Region of Corangi Andhra Pradesh. Agricultural Science
Digest
- A Research Journal, 17(Of). https://doi.org/10.18805/ag.d-5607
10. Riseh, R. S., Ebrahimi-Zarandi, M., Vazvani, M. G., & Skorik, Y. А. (2021). Reducing
drought stress in plants by encapsulating plant Growth-Promoting bacteria with
polysaccharides. International Journal of Molecular Sciences, 22(23), 12979.
https://doi.org/10.3390/ijms222312979
11. Rivera, D. M. (2008). Optimización de un medio de cultivo para la producción de un
inoculante con base en Azospirillum brasilence C16. Recuperado de:
http://hdl.handle.net/20.500.12324/18647.
12. Rodríguez Acosta, Jorge Luis. (2018). Evaluación de la cinética de crecimiento de
PGPR y su actividad antagonista hacia Meloidogyne incognita “in vitro”. Quevedo.
UTEQ. 80
p. https://repositorio.uteq.edu.ec/items/9c65c0bd-0b5d-476c-90c7-7f362f4efc5e

13. Rogers, A., Bullard, K. R., Dod, A. C., & Wang, Y. (2022). Bacterial growth curve
measurements with a multimode microplate reader. Bio-protocol, 12(9).
https://doi.org/10.21769/bioprotoc.4410
14. Sarti, G. C., Míguez, A. E. J. C., & Curá, A. J. (2019). Optimización de las condiciones
de cultivo para el desarrollo de una biopelícula bacteriana y su aplicación como
biofertilizante en Solanum lycopersicum L. Var. Río Grande. Revista de Protección
Vegetal, 34(2). http://scielo.sld.cu/pdf/rpv/v34n2/2224-4697-rpv-34-02-e01.pdf
15. Sepúlveda, L., & Aguilar, C. N. (2014). Cinética microbiana de microorganismos
biofertilizantes. ResearchGate. https://www.researchgate.net/publication/264442301
16. Soldan, R., Mapelli, F., Crotti, E., Schnell, S., Daffonchio, D., Marasco, R., Fusi, M.,
Borin, S., & Cardinale, M. (2019). Bacterial endophytes of mangrove propagules elicit
early establishment of the natural host and promote growth of cereal crops under salt
 stress. Microbiological Research, 223–225(March), 33–43.
https://doi.org/10.1016/j.micres.2019.03.008
17. Vessey, J. (2003). Plant growth promoting rhizobacteria as biofertilizers. Plant and Soil,
255, 571-586. https://doi.org/10.1023/A:1026037216893