INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGO

LABORATORIO DE ECOLOGÍA MICROBIANA

4QM2

PRÁCTICA 3.
ANÁLISIS DE CALIDAD DE AGUA 2.
DETERMINACIÓN MICROBIOLÓGICA

EQUIPOS 5 y 7
Sección 2

BUTANDA PUENTE DIANA KAREN

CASTILLO ENRIQUEZ ALMA KARINA
GÓMEZ CARRILLO AMAYRANI
MENDOZA HERNÁNDEZ KARINA

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OBJETIVO.
Determinar el Número más probable (NMP) de microorganismos coliformes totales,
microorganismos coliformes fecales termotolerantes y Escherichia coli presuntiva
en una muestra obtenida de un cuerpo de agua.

RESULTADOS.
TABLA 1. RESULTADOS DE LA PRUEBA PRESUNTIVA PARA LA CUANTIFICACIÓN DE
MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES.

ESTACIÓN/EQUIPO NÚMERO CARACTERÍSTICO

1 333
2 333
3 333
4 333
5 333
6 333
7 333
8 333

TABLA 2. RESULTADOS DE LA PRUEBA CONFIRMATIVA PARA LA CUANTIFICACIÓN DE

MICROORGANISMOS COLIFORMES FECALES.
ESTACIÓN/EQUIPO NÚMERO NMP MICROORGANISMOS
CARACTERÍSTICO COLIFORMES TOTALES/100 mL
1 333 ≥2400
2 333 ≥2400
3 333 ≥2400
4 333 ≥2400
5 333 ≥2400
6 333 ≥2400
7 333 ≥2400
8 333 ≥2400

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 TABLA 3. RESULTADOS DE LA PRUEBA CONFIRMATIVA PARA LA CUANTIFICACIÓN DE
Escherichia coli PRESUNTIVA

ESTACIÓN/EQUIPO NÚMERO ÍNDICE NMP / ML

CARACTERÍSTICO
1 323 290
2 333 ≥2400
3 333 ≥2400
4 333 ≥2400
5 333 ≥2400
6 333 ≥2400
7 322 210
8 333 ≥2400

TABLA 4. RESULTADOS DE LA PRUEBA COMPLETA PARA LA CUANTIFICACIÓN DE

Escherichia coli
ESTACIÓN/EQUIPO NÚMERO ÍNDICE NMP / ML
CARACTERÍSTICO
1 003 9
2 333 ≥1100
3 012 9.175
4 013 12
5 022 12.42
6 211 20
7 100 3.6
8 002 6

DISCUSIÓN.
Uno de los grupos de microorganismos recomendados en guías y normas como
indicadores de la calidad del agua e importantes para su valoración en términos
sanitarios, es el grupo de las bacterias coliformes, el cual está formado por los
coliformes totales y fecales con la presencia de contaminación fecal. Cuando se
detecta la presencia de coliformes fecales en cualquier fuente de agua, se considera
a la especie bacteriana Escherichia coli como el indicador de contaminación fecal
más adecuado, ya que está presente en grandes cantidades en las heces humanas
y animales (Fernández, M., 2017). Si se halla la presencia de Escherichia coli en
muestras de agua, indica la existencia de fallas en la eficacia de tratamiento de
aguas, en la integridad del sistema de tratamiento y por tanto es evidencia de
contaminación de diferentes orígenes: suelo, superficies de agua dulce y heces
fecales provenientes de las aguas negras que se descargan en el río Zahuapan.

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En la práctica se llevó a cabo el método microbiológico del número más probable,
el cuál refiere la detección y cuantificación de microorganismos coliformes en el
agua. Para ello contempla 3 fases (fase presuntiva, fase confirmativa y fase
completa). Con la muestra analizada de cada estación se cuantificaron los
microorganismos coliformes fecales, coliformes totales y Escherichia coli de
acuerdo con la NMX-AA-042-SFCI-2015.
En la prueba presuntiva se hicieron pruebas por triplicado, donde se sembraron 9
tubos, 3 tubos con 10 mL de muestra, 3 tubos con 1 mL de muestra y 3 tubos con
0.1 mL de muestra, se tomaron como resultados positivos los que presentaron una
producción de gas a través del desplazamiento de la campana de Durham, todos
los equipos obtuvieron resultados positivos, esto se debe a las características del
medio que se utilizó que fue caldo lactosado con doble concentración para los tubos
de 10 mL y concentración simple para los tubos de 1 y 0.1 mL. Los microorganismos
coliformes presentan un metabolismo fermentador de lactosa generando gas como
producto de este metabolismo en un lapso de 48 hrs a 37 °C (Gianoli et al 2019),
que fueron las condiciones con las que se trabajó por lo que los resultados
concuerdan con la literatura.
Para la prueba confirmativa para coliformes totales (tabla 1) se utilizó caldo bilis
lactosa verde brillante (BLVB) que es un medio con bilis y verde brillante que son
agentes que inhiben el crecimiento de las bacterias Gram + y -, a excepción de
coliformes, el medio cuenta con lactosa como fuente de carbono (McFaddin, 1985),
los tubos se incubaron a 37 °C por 48 horas, estas condiciones favorecieron el
crecimiento de los coliformes totales en los 9 tubos de todos los equipos, de esta
forma el numero característico para la sección 2 fue “333”, para determinar el
número más probable (NMP) se consultaron las tablas de McGrady dando como
resultado ≥2400.
En el caso de la prueba confirmativa para la cuantificación de coliformes fecales, los
resultados se muestran en la tabla 2., se siguió el mismo método que en la prueba
para coliformes totales, con la variación de la temperatura de incubación que para
este caso fue 44 °C por 48 hrs. Dentro de los coliformes hay bacterias que pueden
realizar sus procesos a temperaturas más altas 44-45 °C (Gianoli et al, 2019),
también se obtuvieron 9 tubos positivos para cada equipo, su número característico
fue “333” y el número más probable fue ≥2400, lo que nos indica la presencia de
coliformes termotolerantes en una gran cantidad.
Los resultados del análisis de la muestra de agua de cada estación sobrepasan el
límite máximo permisible que estípula la norma, ya que de acuerdo con la NOM-
001-SEMARNAT (1996) el límite máximo permisible, es de 1000 y 2000 coliformes
fecales por 100 mL (Enriquez, et. al, 2011), con esto podemos confirmar un exceso
de contaminación en el agua de las cascadas de Atlihuetzia.
La tabla 3 muestra los resultados de la prueba confirmativa para Escherichia coli, el
medio de cultivo utilizado en este ensayo fue caldo triptona y se incubaron a 44 °C,

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posteriormente se agregó reactivo de Kovacs, 6 equipos obtuvieron 9 tubos
positivos, por lo que su NMP fue ≥2400, mientras que los equipos 1 y 7 obtuvieron
8 y 7 tubos positivos, por lo que sus NMP fueron 290 y 210 respectivamente. Estos
resultados se deben a que el caldo triptona es un buen sustrato para la producción
de indol gracias a su alto contenido de triptófano y Escherichia coli se caracteriza
por producir indol a partir del triptófano (American Puclic Health Association, 1998).
La presencia de indol se comprobó con la formación de un anillo de color rojo al
agregar reactivo de Kovacs, lo que demuestro la presencia de Escherichia coli.
Como podemos observar se presenta una menor cantidad de microorganismos en
estas secciones, por lo que podemos deducir que; si bien hay una contaminación,
pero en menor proporción comparada con las otras secciones en donde se presenta
un NMP mucho mayor.
Posteriormente se realizó la prueba completa, se utilizaron los tubos positivos de
caldo lactosa verde brillante bilis (BLVB) incubados a 37 °C para sembrar por estría
cruzada en placas de agar eosina azul de metileno (EMB), para esta prueba los
resultados por equipo fueron muy diferentes como se observa en la tabla 4., al usar
el agar azul de metileno se realizó una diferenciación en entre los microorganismos
capaces de utilizar lactosa de los que no pueden hacerlo, gracias a los indicadores
eosina y azul de metileno, la presencia de Escherichia coli quedo demostrada con
el crecimiento de colonias con un brillo verde metálico, esto se debe a la rápida
fermentación de la lactosa (Farmer III, 2003). El único equipo en obtener crecimiento
con las características antes mencionadas en todas sus placas fue el equipo 2, su
número característico fue “333” y su NMP fue ≥2400, esto nos indica una abundante
contaminación fecal en esa estación. Para los equipos restantes podemos ver que
no todos tuvieron presencia de Escherichia coli, esto puede estimar que tal vez las
aguas también están contaminadas con otros microorganismos indicadores de
contaminación fecal, como las especies de los géneros Klebsiella, Enterobacter y
Citrobacter.
Analizando las tablas, podemos observar que, en la prueba confirmativa para
microorganismos coliformes fecales, coliformes totales y Eschericha coli,
respectivamente, todos los equipos obtuvieron un número característico, con lo cual
confirmamos que las muestras analizadas de cada estación presentan
contaminación por estos microorganismos.
Los datos recabados en esta práctica forman parte de la evidencia que indican el
gran índice de contaminación que presenta este ecosistema. Realizar el monitoreo
de los contaminantes presentes en estas cascadas resulta insuficiente para poder
revertir los daños que se han causado por décadas. Sin embargo, nos permite
contar con información para orientar acciones de saneamiento y restauración
ecológica.

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CONCLUSIONES.
• Las muestras de agua analizadas en la práctica presentan una
contaminación de microorganismos coliformes totales, fecales y Escherichia
coli con base al NMP/100mL por encima del límite establecido en la NOM-
001-SEMARNAT (1996).

• La presencia de Escherichia coli en las muestras de agua analizadas nos

confirma contaminación fecal en las cascadas de Atlihuetzia.

• Los coliformes son indicadores de contaminación del agua, la determinación

y concentración de estas bacterias en el agua proporciona una herramienta
de control para conocer su calidad.

• La cuantificación usando el número más probable es un método estadístico

que nos permite conocer el índice de coliformes con un límite confiable de
95%.

CUESTIONARIO.
1. Mencionar qué inhibidor selectivo contiene el medio de BLVB.
En el Caldo Lactosa Verde Brillante Bilis (BLVB), el verde brillante y la bilis son los
agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram
negativas, a excepción de coliformes. También evitan el crecimiento de los
fermentadores anaeróbicos de lactosa, como Clostridium perfringens, que podrían
dar reacciones positivas falsas.
2. ¿Qué entiende, en general, por microorganismo indicador?
Se trata de microorganismos control cuya presencia permite determinar las
condiciones microbiológicas de un medio o la calidad de un producto.
3. ¿En qué casos se utiliza Clostridium perfringens como microorganismo
indicador de contaminación fecal?

Debido a su asociación con el tracto digestivo de humanos y animales y la presencia

de sus esporas en aguas residuales, Clostridium perfringens ha sido identificado
como un indicador de contaminación fecal tardía y lejana, por lo que puede señalar
cuáles fuentes son susceptibles de contaminación intermitente. Debido a que las
esporas de Clostridium perfringens son más pequeñas que los quistes u ooquistes
de protozoos, estas pueden ser útiles como indicadores de la eficacia de los
procesos de filtración.

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BIBLIOGRAFÍA.
• Rodríguez, M. (2016, diciembre). Verificación del método para la detección y
cuantificación de Clostridium perfringens en agua potable mediante
filtración. Revista Politécnica. Pág. 83-89.
• Organización Mundial de la Salud, OMS. Guías para la calidad del agua
potable. Primer apéndice a la tercera edición. Volumen 1. 2006.
• Olivas, E.,Flores.M, et.al. (2011). Indicadores fecales y patógenos en agua
descargada al Río Bravo. Terra Latinoamericana, 29(4), 449-457.
Recuperado en 20 de septiembre de 2023, de
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-
57792011000400449&lng=es&tlng=es.
• Fernández-Santisteban, MT, (2017). Determinación de coliformes totales y
fecales en aguas de uso tecnológico para las centrífugas. ICIDCA. Sobre
los Derivados de la Caña de Azúcar, 51 (2),70-73. [fecha de Consulta 20 de
septiembre de 2023]. ISSN: 0138-6204. Recuperado de:
https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=223154251011